人乳头瘤病毒专家讲座

人乳头瘤病毒（HPV）HPV(人类乳头瘤病毒)是以人类为唯一宿主一个DNA病毒，现在已经明确，HPV与宫颈癌发生高度相关。医学数据表明，60％～70％女性感染过HPV病毒，99.8％宫颈癌患者中能够检测到HPV，而HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。除此之外，98％以上宫颈疾病患者体内也存在HPV。人乳头瘤病毒专家讲座第1页

当前有100余种型别HPV,约35种型别与生殖道感染相关，大约20种型别与癌症相关。与宫颈癌相关高危型HPV有13种：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。与宫颈癌相关低危型别有：6，11，40，42，43，44。人乳头瘤病毒专家讲座第2页HPV基因分型检测意义•宫颈病变及宫颈癌筛查，经过分型检测对患者个体化评定，预测宫颈病变发生风险度,决定筛查间隔、治疗方案制订。•未明确诊疗意义非经典鳞状细胞和腺细胞（AS-CUS/AGUS）和宫颈上皮内低度病变（LSIL）分流，提升诊疗可信度，降低漏疹风险。•宫颈病变治疗后追综和随访人乳头瘤病毒专家讲座第3页HPV阳性还可提醒生殖器赘生物为尖锐湿疣可能性。HPV感染与宫颈炎发生有亲密关系。HPV病毒也可引发宫颈糜烂。人乳头瘤病毒专家讲座第4页宫颈癌筛查方案1.基本筛查方案醋酸或碘染色后肉眼观察阳性阴性阴道镜活检+病理检验对应治疗定时随访人乳头瘤病毒专家讲座第5页2.普通筛查方案HPV检测+传统巴氏涂片HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H随访（次/3-5年随访（次/年阴道镜检验/多点活检+ECC对应治疗（-）（+）人乳头瘤病毒专家讲座第6页3.最正确筛查方案HPV检测+液基细胞学检验HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H随访（次/3-5年随访（次/年阴道镜检验/多点活检+ECC对应治疗（+）（-）人乳头瘤病毒专家讲座第7页HPV基因分型检测方法我科当前采取分子生物学前沿技术—多重PCR（聚合酶链式反应）先进技术，经过对HPV-DNA基因分型，可快速、准确地检测常见23种HPV亚型，包含5种低危型（HPV6，11，42，43，44）和18种高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆盖了现有已知与人生殖道感染相关绝大部分HPV亚型。人乳头瘤病毒专家讲座第8页HPV基因分型芯片技术特点HPV基因芯片分型检测，利用L区相对保守区引物对待测样品中可能HPV亚型进行广谱扩增，再将产物与固定在膜芯片上亚型特异性探针进行杂交，显色并判读结果。此技术灵敏、准确、高效、快速，并确定详细亚型。人乳头瘤病毒专家讲座第9页GC-HPV检测试验流程人乳头瘤病毒专家讲座第10页HPV检测目标物：宫颈脱落细胞、疣体组织、组织切片、活体组织人乳头瘤病毒专家讲座第11页阴道镜下“活检”组织采集

经过阴道镜观察宫颈表面血管病变，并用宫颈活检钳或宫颈管刮勺从宫颈上提取可疑组织，装入有保留液洗脱管中，旋紧管盖，做好标识

人乳头瘤病毒专家讲座第12页疣体样本采集用棉拭子在疣体表面剐蹭4-6遍，也能够把经过手术切除下来疣体直接作为检测样本。人乳头瘤病毒专家讲座第13页专用宫颈脱落细胞采集器人乳头瘤病毒专家讲座第14页步骤1.标本采集扩阴器暴露宫颈口，用棉拭子将分泌物擦去将宫颈刷伸入宫颈口，单向轻柔转动4-5周将其放入有保留液洗脱管中旋紧管盖，做好标识将宫颈刷折断，刷头留在管中人乳头瘤病毒专家讲座第15页步骤二：提取HPVDNA13000rpm10分钟，弃上清

将标本转移到1.5mL微量离心管中加50

L裂解液充分悬浮沉淀100℃加热10分钟

13000rpm离心10分钟，保留上清待用人乳头瘤病毒专家讲座第16页步骤三：PCR扩增50℃ 15min95℃ 10min 94℃ 30s42℃ 90s40cycles72℃ 30s72℃ 5min

人乳头瘤病毒专家讲座第17页

51℃洗脱15min步骤四：杂交与洗脱

设定杂交仪温度，无需看管，于51℃杂交1小时

PCR产物加入杂交缓冲液中,沸水浴变性10min人乳头瘤病毒专家讲座第18页步骤五显色与结果判读POD孵育POD洗涤显色前准备配制显色液,显色人乳头瘤病毒专家讲座第19页检测结果：膜条显色直接提醒感染HPV亚型，包含高危及低危亚型。HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC人乳头瘤病毒专家讲座第20页适用人群：三年以上性行为或21岁以上有性行为女性宫颈病变及宫颈癌患者治疗后随访尖锐湿疣患者咽喉部HPV感染造成疣体增生婴幼儿人乳头瘤病毒专家讲座第21页受检前须知：月经来潮后10-18天为最正确检验时间检验前三天内不要用避孕药膏等阴道内用药品及阴道冲洗检验前24小时最好不要有性生活人乳头瘤病毒专家讲座第22页HPV检验汇报单将分为高危及低危两组汇报结果，并注明两组中详细阳性亚型，未注明表示为阴性。例：HPV-DNA分型汇报单高危组阳性（+）16，33

低危组阴性（-）人乳头瘤病毒专家讲座第23页结果分析HPV-DNA阳性：

20％－30％HPV病毒感染会引发疾病，假如HPV-DNA阳性，并伴随宫颈病变，应采取深入医学检验，以明确病变性质。60％－70％人仅是HPV阳性而未见宫颈病变，提醒即使发生HPV感染但并没有造成宫颈病变或宫颈癌，只需每年进行一次HPV病毒筛查及相关其它检验即可。HPV-DNA阴性：假如30岁以上女性HPV检测结果为阴性，同时细胞学检验提醒没有发生任何病变，3－5年内都无需再做类似检验。人乳头瘤病毒专家讲座第24页HPV检测后处理HPV基因分型检测阴性常规筛查阳性低危高危无症状一年后复查疣体组织对应治疗（冷冻、激光）液基细胞学检验（TCT）正常一年后复查HPV和TCT≤AS-CUS一年后复查HPV和TCT或阴道镜检验≥ASC-H阴道镜活检/多点活检+ECC6个月后复查HPV和TCT（-）（+）对应治疗人乳头瘤病毒专家讲座第25页标本搜集时间及结果汇报标本可于天天要求工作时间（8：00AM~5：00PM）送检验科，未及时送检可于4℃冰箱保留。在临床送检标本量满足天天检测前提下，当日8：30后送检标本，次日下午发出汇报，若标本量较少，则集中在每七天三、五进行检测。人乳头瘤病毒专家讲座第26页HPV感染后教育信息HPV检测阳性只说明一个病毒感染，而不是疾病。