临检血检类仪器专家讲座

临检血检类

仪器临检血检类仪器第1页教学重点：传统仪器—生物显微镜当代仪器—血液分析仪当代仪器—尿液分析仪临检血检类仪器第2页教学重点：

传统仪器—生物显微镜当代仪器—血液分析仪当代仪器—尿液分析仪临检血检类仪器第3页HansJanssen临检血检类仪器第4页1665年，罗伯特·虎克观察到细胞RobertHook(1635-1703)临检血检类仪器第5页

Leeuwenhoek(1632-1723)Malpighi（1628-1694）临检血检类仪器第6页19世纪70年代，德国人阿贝奠定了显微镜成像原理ErnstAbbe（1840-1905）显微镜成像理论提出大大促进了显微镜制造和显微观察技术快速发展临检血检类仪器第7页偏光显微镜荧光显微镜相差显微镜临检血检类仪器第8页扫描式电子显微镜SEM透射式电子显微镜TEM临检血检类仪器第9页临检血检类仪器第10页

重点1：显微镜原理显微镜成像原理显微镜主要光学技术参数光学显微镜是由两组透镜组成光学折射成像系统其成像原理见图：临检血检类仪器第11页光学原理物体像2像1F1’与F2之间距离称为光学筒长临检血检类仪器第12页

重点1：显微镜原理显微镜成像原理显微镜主要光学技术参数数值孔径NA分辨率d放大率M焦点深度Depthoffield视场Fieldofview工作距离WD临检血检类仪器第13页数值孔径定义：数值孔径(numericalaperture,NA)又称镜口率，指物镜前介质折射率(n)和物镜孔径角(α)半数正弦乘积，与显微镜分辨率成正比表示公式：NA=n×sinα/2N：物镜与样本之间介质（空气、水、香柏油等）折射率α：物镜孔径角，即从物镜光轴上物点发出光线与物镜前透镜有效直径所形成张角临检血检类仪器第14页分辨率定义：分辨率是指显微镜分辨两个物点最小间距，显微镜分辨间距越小，显微镜分辨率就越高，所以分辨率普通以分辨距离(d)来表示表示公式：d=0.61λ/N.Aλ：为光线波长临检血检类仪器第15页放大率定义：放大率(magnification)是指物镜放大率和目镜放大率乘积。表示公式：M总=M目×M物注意：当显微镜分辨率不高时，假如只增大放大倍数，那么得到图象即便轮廓很大，细节也会不清所以使用显微镜时，应该注意显微镜有效放大率表示公式：M有效=d肉眼/d临检血检类仪器第16页其它技术参数焦深：又称景深。即用显微镜观察某一平面时，不但位于平面上各点能够看清楚，而且平面上下一定厚度内各点也能看清楚，这个厚度就是焦深。焦深与总放大倍数及物镜分辨率成反比关系视场：又称为视野。即显微镜观察时所看到样本圆形范围。其大小由视场光栅直径和放大率大小来决定。视野直径大小与视场光栅直径成正比，与放大率成反比工作距离：指物镜前透镜表面到被观察样本表面距离NA大高倍物镜，其工作距离越小临检血检类仪器第17页重点2：显微镜结构显微镜光学系统：目镜物镜照明系统临检血检类仪器第18页目镜目镜由两组透镜组成：

上端“接目镜”下端“场镜”目镜分类：

惠更斯目镜(Huygenseyepiece)

冉斯登目镜(Ramsdeneyepiece)赔偿目镜（K）平场目镜（P）临检血检类仪器第19页物镜物镜筒上标识：

放大倍数、数值孔径(NA)机械筒长、盖玻片厚度物镜分类：

消色差物镜(Ach)

复消色差物镜(Apo)平场消色差物镜（Plan）平场复消色差物镜（PlanApo）临检血检类仪器第20页

重点2：显微镜结构显微镜机械系统：目镜筒物镜转换器镜座和镜臂载物台调焦系统临检血检类仪器第21页

重点3：显微镜操作临检血检类仪器第22页瞳距调整临检血检类仪器第23页屈光度调整调整临检血检类仪器第24页粗调松紧调整旋钮临检血检类仪器第25页聚光镜中心调整⑤光轴中心调整螺钉③视场光栏③孔径光栏②10X物镜①标本④聚光镜升降旋钮临检血检类仪器第26页孔径光栏调整N.A聚=(0.6-0.8)N.A物临检血检类仪器第27页孔径光栏开度与图象100%70%30%临检血检类仪器第28页显微镜维护经常性维护1．持镜时必须是右手握臂、左手托座姿势，不可单手提取，以免零件脱落或遭受碰撞。2．轻拿轻放，不可把显微镜放置在试验台边缘，以免碰翻落地。3．保持显微镜清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。临检血检类仪器第29页显微镜维护使用中维护4．水滴、酒精或其它药品切勿接触显微镜镜头和镜台，假如沾污应马上擦净。5．放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，预防压坏玻片或碰坏物镜。6．不要随意取下显微镜目镜，以预防尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。临检血检类仪器第30页显微镜维护其它注意事项7．显微镜使用完成后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使显微镜镜头离开通光孔，下降镜台，下降聚光器、光亮度调制最小，关闭光源，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回试验台柜内。最终填写使用记录表。临检血检类仪器第31页清洁工具临检血检类仪器第32页擦拭方法临检血检类仪器第33页教学重点：传统仪器—生物显微镜

当代仪器—血液分析仪当代仪器—尿液分析仪临检血检类仪器第34页1855年创造了血细胞计数板1、传统血液学检验：显微镜手工检验法。检验人员费时费劲，且可靠性和结果准确性受到人为一定影响。临检血检类仪器第35页2、50年代初，库尔特弟兄利用电阻抗原理设计了第一台血细胞计数仪－CoulterModelA型。能计数血液中红细胞和白细胞，突破了手工模式，开创血液分析仪新时代Coulter（1913-1998）临检血检类仪器第36页1962年日本Sysmex企业开始生产第一台血球计数仪。型号为：CC－10013、60年代，血液分析仪在血细胞检测参数数量上有了很大提升，70年代计算机技术发展，使血细胞计数仪增加了血小板计数，至此，仪器已能够进行全血细胞计数（CBC）。临检血检类仪器第37页SysmexF820半自动4、80年代，开发了白细胞分类计数、红细胞分布宽度等新参数。1980年Coulter企业推出第一台二分类血液分析仪CoulterS-plus，之后S-plusIV等三分类血液分析仪问世临检血检类仪器第38页5、90年代，将激光，射频，化学染色等技术纷纷应用于对细胞特征分析，出现了自动五分类血液分析仪，推进了血液普通检验自动化深入发展临检血检类仪器第39页检测参数缩写WBC白细胞总数

PDW血小板体积分布宽度RBC红细胞总数

PCT血小板比积HGB血红蛋白浓度

PLT血小板总数HCT红细胞比积

MPV平均血小板体积MCV平均红细胞体积

RET网织红细胞MCH平均红细胞血红蛋白含量HFR高荧光强度RETMCHC平均红细胞血红蛋白浓度MFR中荧光强度RETRDW红细胞体积分布宽度LFR低荧光强度RETHDW血红蛋白分布宽度临检血检类仪器第40页重点1：基本原理

光学检测原理电学检测原理光散色检测比色测定电阻抗原理电导原理临检血检类仪器第41页Coulter原理临检血检类仪器第42页临检血检类仪器第43页白细胞计数和分类计数1、血液先经稀释和溶血剂处理溶血剂作用:使红细胞快速溶解;使白细胞胞浆经过膜渗出,胞膜紧贴于胞核或颗粒周围;经处理后白细胞与自然体积无关,含有颗粒粒细胞体积大于无颗粒单核及淋巴细胞.临检血检类仪器第44页2、仪器将35-450fl血细胞分为256个通道，每个通道为1.64fl，依据细胞大小分置于不一样通道中从而显示白细胞体积分布直方图。白细胞按照体积可分为三群：35-90fl：小细胞群,淋巴细胞为主;90-160fl：中间细胞群,包含单核细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,幼稚细胞或白血病细胞;135-450fl：大细胞群,主要为中性粒细胞.临检血检类仪器第45页临检血检类仪器第46页红细胞计数经稀释后红细胞经过计数小孔时产生对应脉冲，脉冲高低代表红细胞体积，脉冲数量为红细胞数，脉冲高度叠加换算为红细胞比积，(有仪器先计算MCV再乘以红细胞数)稀释血液中含有白细胞，因其百分比较小，可忽略。但在白血病及严重感染患者并伴有严重贫血时，需去掉白细胞计数结果。36~360fl，256个通道，范围在50~200fl。临检血检类仪器第47页各项红细胞参数MCV，MCH，MCHC，依据仪器检测红细胞数，红细胞比积和血红蛋白含量计算而来；RDW：红细胞体积分布宽度，反应红细胞大小不等程度，经过统计近万个红细胞数据求得，以RDW-CV和RDW-SD汇报。临检血检类仪器第48页血小板测定与红细胞在一个系统进行检测；当各种细胞所产生脉冲数字化后，依据不一样阈值，分别计算血小板和红细胞数目分别储存于64个通道，范围在2~30fl依据血小板体积大小计算出血小板平均体积（MPV）临检血检类仪器第49页血红蛋白测定加溶血剂后，血红蛋白释放，与转化剂结合形成血红蛋白衍生物,在特定波长下比色，用光电比色法求出血红蛋白含量。ICSH推荐使用氰化高铁法。校正仪器须以HiCN值为标准，HiCN最大吸收峰在540nm。因为氰化物毒性，非氰化溶血剂（SDS）应用日益广泛。临检血检类仪器第50页光散射原理FSCSensorSSCSensorLaser全血标本稀释后，在鞘液作用下，形成细胞流，细胞被排成单列快速经过光学检测区，细胞与测定光速相交时，因为血细胞透光度与鞘液不一样，引发光散射改变，引发脉冲信号，信号大小与细胞体积相关，脉冲数量代表细胞数量。临检血检类仪器第51页激光器激光器激光探测器大颗粒小颗粒前散射光示意图临检血检类仪器第52页激光器激光器侧向散射光探测器复杂颗粒简单颗粒侧向散射光示意图临检血检类仪器第53页容量,电导,光散射(VCS技术)血细胞保持自然形态V:电阻抗原理测细胞体积大小C:高频电磁探针测量细胞内部结构,核质比,细胞内化学成份.S:细胞表面光散射特点,判别细胞内部颗粒构型和颗粒质量区分这种技术是Coulter企业推出专有方法，应用VCS技术血液细胞分析仪主要有MAXM、STKS、HMX等型号临检血检类仪器第54页

采取阻抗、激光散色和荧光染色技术：主要应用在Sysmex研制和开发SF-3000、SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中激光散色和细胞化学染色技术：该类型仪器最新型号为Bayer企业Advia120型和Advia2120型临检血检类仪器第55页多角度偏振光散色法：该类型仪器型号为ABBOTT企业CD-3200，CD-3500型和CD3700，CD4000等型采取图象分析单纯细胞分类仪：该类型仪器以日本日立企业生产8200为代表。这类仪器要求大型计算机系统支持临检血检类仪器第56页检测流程质控标本测定

仪器准备：开启;自检及清洗;空白计数血液标本测定结果分析与判定采抗凝血、稀释、制血涂片临检血检类仪器第57页仪器使用和维护标本采集与储存良好使用环境试剂使用注意仪器检测不足工作人员素质和责任心抗凝剂使用临检血检类仪器第58页仪器本身保养小孔堵塞问题燃烧电路及高压反冲技术故障自检功效－开机循环管道和进样针自动清洗1.运行样本间自动清洗2.测试完成后停机自动进行全系统漂洗3.每次计数循环结束,自动进行循环清洗计数孔4.长时间不用机，自动进入静止状态5.关机冲洗程序临检血检类仪器第59页教学重点：传统仪器—生物显微镜当代仪器—血液分析仪

当代仪器—尿液分析仪临检血检类仪器第60页仪器发展史1、1827年，Bright最早把尿液检验用于患者诊疗和护理成为尿液常规分析最早期开拓者和支持者2、20世纪40年代，逐步出现了尿液干化学试剂带法，成为筛检健康人或患者尿液首选方法。1956年,美Ames企业生产第一条尿糖试带-Clinistrix；1957年,尿蛋白试带-Albustix；1958年,葡萄糖尿蛋白二联试带-Uristix；1959年,Glu-Pro-pH三联试带-Combistix;十联试带-Multistix

；11项参数试剂带3、70年代，第一台尿液试纸带检测自动化学分析仪问世，从此在相当程度上改变了传统尿液检验繁琐费时操作方式，成为当代尿液分析标志；临检血检类仪器第61页仪器发展史

4、80年代，伴随色谱和免疫技术发展，生产出含有检测敏感性和特异性极高单克隆抗体试剂带；80年代中后期，韩国采取比较尖端光电转换元件CCD(电荷耦合器件)生产出技术先进Uriscan-S300型自动11项尿液分析仪。5、90年代，尿液分析仪自动化程度和性能都得到突飞猛进发展。Bayer企业推出Clinitek-atlas型全自动尿液干化学分析仪，含有条码识别系统，双探头读数装置，能储存500个结果和200个质控数据,自动打印检验时间、日期等功效。临检血检类仪器第62页仪器分类按工作方式湿式尿液分析仪干式尿液分析仪按测试项目按自动化程度半自动尿液分析仪:8/9/10/11全自动尿液分析仪:10/11项8项:蛋白/糖/pH/酮体/胆红质/胆原/隐血/亚硝酸盐9项:8项/尿白细胞10项:9项/尿比重11项:10项/维生素C临检血检类仪器第63页重点1：试剂带第一层尼龙膜起保护作用，预防大分子物质污染；第二层绒制层，包含碘酸盐层和试剂层，碘酸盐层可破坏维生素C等干扰物质，试剂层含有机试剂成份，主要与尿液中所测定物质发生化学反应，产生颜色改变；第三层是固定有试剂吸水层，可使尿液均匀快速地浸入，并能抑制尿液流到相邻反应区；最终一层选取尿液不浸润塑料片作为支持体。临检血检类仪器第64页基本结构机械系统:

将待测试剂带传送到预定检测位置，检测后将试剂带传送到废物盒中光学系统:

光学系统通常包括光源、单色处理、光电转换三部分。光线照射到反应表面产生反射光，反射光强度与各个项目标反应颜色成反比。电路系统:

将转换后电信号放大,经模