医学实验室的生物安全防护专家讲座

医学试验室生物安全与防护兰州大学基础医学院医学试验中心医学实验室的生物安全防护第1页BIOHAZARD生物危害标识医学实验室的生物安全防护第2页医学实验室的生物安全防护第3页试验室生物安全法规年12月《试验室生物安全通用要求》经过了教授审定，并很快申报国家标准年SARS期间，相关部门制订了《传染性非经典肺炎病毒研究试验室暂行管理方法》年11月12日我国公布了《病原微生物试验室生物安全管理条例》医学实验室的生物安全防护第4页严重生物安全事故案例年9月新加坡试验室人员感染SARS病毒年9月台湾试验室人员感染SARS病毒年4月我国国家CDCSARS试验室硕士感染SARS病毒并传染给他人医学实验室的生物安全防护第5页动物试验中生物安全事故动物约有200种传染病、80种寄生虫病，其中半数能够感染给人动物感染试验，有病原体随尿粪、唾液排出，有感染性气溶胶扩散危险剖检动物时，有接触病原体危险，还可能被动物咬伤或注射器、手术刀创伤等肿瘤病毒引发潜在致癌性等生物危害医学实验室的生物安全防护第6页国内外曾屡次发生因喂养野鼠或大白鼠而发生肾综合征出血热流行1999年广州中医药大学博士后张某从事“九五”国家攻关课题“补肾法治疗老年性痴呆”试验时接触大鼠，3个月后感染流行性出血热，年被诊疗为肾功效衰竭，年进行肾移植手术年,湖北省药检学校一名毕业生在某药厂从事动物试验工作，因为接触了带出血热病毒试验动物而感染流行性出血热不治死亡医学实验室的生物安全防护第7页年6月，北京发生了因使用质量不合格试验动物和动物试验不规范致使鼠源性人兽共患病流行性出血热感染：一名院士死亡和700多师生紧急预防接种年，东北三省因为个体户养殖、贩运不合格试验动物，造成几十名教学科研人员感染流行性出血热广东省，1990年和1997年分别出现因使用不合格试验动物而感染人畜共患病严重生物安全事故医学实验室的生物安全防护第8页年12月，东北农业大学学生在进行“羊活体解剖学试验”时，28名师生感染布鲁氏菌病（乙类传染病）不合格动物（养殖场购置、未检疫）不合格试验室（普通试验室、脏乱差、无保护）不恪守操作规程（有制度规程，教师不要求）无有效防护（口罩、手套）学生感叹：十多年寒窗苦，一病全作废医学实验室的生物安全防护第9页SARS病毒蛋白模型HIV病毒医学实验室的生物安全防护第10页生物安全防范处理微生物及其毒素对人体危害综合性办法危害起源：

生物试验室生物恐怖活动医学实验室的生物安全防护第11页试验室生物安全防护试验室工作人员所处理试验对象含有致病微生物及其毒素时，经过在试验室设计建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化工作及操作程序和规程等方面采取综合办法，确保试验室工作人员不受试验对象侵染，确保周围环境不受其污染医学实验室的生物安全防护第12页生物安全主要性应对公共卫生突发事件需要预防外来生物危险因子侵入需要试验室工作需要预防医院感染需要预防人畜共患病需要反生物恐怖需要医学实验室的生物安全防护第13页生物安全内容生物危险度分级生物安全分级生物安全试验室试验室设备生物安全管理和操作技术个人生物安全防护装备卫生保健和医学监测医学实验室的生物安全防护第14页生物危险（risk）分级I级：个体和群体低危险II级：中等个体危险，有限群体危险III级：高个体危险，低群体危险IV级：高度个体和群体危险医学实验室的生物安全防护第15页当试验室使用传染性或有潜在传染性材料前，必须进行微生物危害评定。应依据传染性微生物致病能力程度、传输路径、稳定性、感染剂量、操作时浓度和规模、试验对象起源、是否有动物试验数据、是否有有效预防和治疗方法等诸原因进行微生物危害评定经过微生物危害评定确定对象微生物应在哪一级生物安全防护试验室中进行操作依据危害评定结果，制订对应操作规程、试验室管理制度和紧急事故处理方法，形成书面文件并严格恪守执行微生物危害评定医学实验室的生物安全防护第16页第一级：不引发健康成年人疾病第二级：可经过破损皮肤、消化道及粘膜暴露等方式引发人类疾病第三级：本土或外来微生物，经过吸入路径暴露时能够造成严重或潜在致死性疾病第四级：能够引发严重且威胁生命人类疾病，可经过气溶胶传输，或相关传输危险性不明微生物生物安全防护试验室依据不一样微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别美国CDC/NIH对微生物指导性分级医学实验室的生物安全防护第17页我国对病原微生物分类第一类：能够引发人类或者动物非常严重疾病微生物，以及我国还未发觉或者已经宣告毁灭微生物第二类：能够引发人类或者动物严重疾病，比较轻易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传输微生物第三类：能够引发人类或者动物疾病；不组成严重危害，传输风险有限；具备有效治疗和预防办法第四类：通常情况下不会引发人类或者动物疾病微生物第一类和第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物医学实验室的生物安全防护第18页试验室生物安全防护基本标准试验室生物安全防护内容包含安全设备、个体防护装置和办法（一级屏障）；试验室特殊设计和建设（分区、单向气流）要求（二级屏障）；严格管理制度和标准化操作程序及规程（三级屏障）应将每一特定试验室从立项、建设到使用维护全过程中相关生物安全防护综合办法内容编入各试验室生物安全手册中。必须设有专职生物安全责任人生物安全防护试验室依据不一样微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别医学实验室的生物安全防护第19页管理制度试验室内设置和准入在主试验室内应合理设置清洁区、半污染区和污染区非试验相关人员和物品不得进入试验室试验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入试验室及其岗位之前必须经过试验室同意医学实验室的生物安全防护第20页试验室工作人员资格和培训试验室工作人员必须是受过专业教育技术人员。在独立工作前须在中高级试验技术人员指导下进行上岗培训，到达合格标准，方可开始工作试验室工作人员必须被通知试验室工作潜在危险并接收试验室安全教育，自愿从事试验室工作试验室工作人员必须恪守试验室全部制度、要求和操作规程医学实验室的生物安全防护第21页试验室特殊管理对可能危险原因，制订确保安全SOP事前进行有效培训和模拟训练对于意外事故要能够提供包含紧抢救助或专业性保健治疗办法，足以应付紧急情况试验室事故处理及上报医学实验室的生物安全防护第22页安全设备和个体防护是确保试验室工作人员不与致病微生物及其毒素直接接触一级屏障生物安全柜是最主要安全设备，形成最主要防护屏障。试验室应按要求分别配置Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级生物安全柜。全部可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶操作，除实际上不可实施外，都必须在生物安全柜内进行不得用超净工作台代替生物安全柜安全设备和个体防护（一级屏障）医学实验室的生物安全防护第23页必要时试验室应配置其它安全设备，如设置配有排风净化装置排气罩等，或采取其它不使致病微生物逸出确保安全设备试验室所配置离心机应在生物安全柜或其它安全设备中使用，不然必须使用安全密封专用离心头（杯）必须给试验室工作人员配置必要个体防护用具，如个人防护服、防毒面具、安全眼镜或眼罩医学实验室的生物安全防护第24页生物安全柜（biosafetycabinet）是处理危险性微生物时所用箱型空气净化安全装置生物安全柜医学实验室的生物安全防护第25页I级生物安全柜

（classIbiosafetycabinet）

最少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出；100%由密接排气导管排到室外（类似于通风厨）

工作状态时确保工作人员不受侵害，但不确保试验对象不受污染。

现已极少使用医学实验室的生物安全防护第26页

最少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化无涡流单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开二分之一，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出

工作状态下恪守操作规程时既确保工作人员不受侵害，又确保试验对象及环境不受污染Ⅱ级生物安全柜

（classⅡbiosafetycabinet）医学实验室的生物安全防护第27页

II级生物安全柜依据结构以及气流分配不一样主要是外排气流不一样分为：

A1型:（0.38m/s，30%排在室内）

A2型:（0.5m/s，30%

外排，原B3型）

B1型:

（0.5m/s，

70%接管道外排）

B2型:

（0.5m/s，100%接管道外排）医学实验室的生物安全防护第28页Ⅲ级生物安全柜

（classⅢbiosafetycabinet）最少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化无涡流单向流空气。正面上部为观察窗，下部手套箱式操作口箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝医学实验室的生物安全防护第29页

全封闭、气密结构通风柜经过与柜体联结橡胶手套进行操作；柜内保持最少120Pa负压(0.50wg)；供气经过HEPA抽入内；外排气流经过双层HEPA过滤或经HEPA后再经燃烧处理。医学实验室的生物安全防护第30页隔离器医学实验室的生物安全防护第31页IIIIII医学实验室的生物安全防护第32页高效空气过滤工作人员安全无涡流单向流空气试验对象不受污染手套箱式操作口I级有是否否否II级有是是是否III级有是是是是医学实验室的生物安全防护第33页个人生物安全防护装备试验室防护服面部防护手套呼吸防护医学实验室的生物安全防护第34页微生物和生物安全试验室生物安全试验室不一样于其它普通试验室，是从事对人可能产生危害生物试验场所尤其是三级和四级生物安全试验室主要用于对人、畜有高度传染性烈性传染病研究（如反恐）和检测（如SARS）工作医学实验室的生物安全防护第35页试验室设施结构和通风设计试验室分区:

清洁区半污染区污染区单向气流(负压):

外界HEPA清洁区半污染区污染区HEPA外界医学实验室的生物安全防护第36页生物安全试验室分类分级试验室分类

普通生物安全防护试验室(不使用试验脊椎动物和昆虫)

试验脊椎动物生物安全防护试验室

（A）试验室生物安全防护分级

一级生物安全防护试验室，简称BSL1或P1

二级生物安全防护试验室，简称BSL2或P2

三级生物安全防护试验室，简称BSL3或P3

四级生物安全防护试验室，简称BSL4或P4

一级最低，四级最高医学实验室的生物安全防护第37页试验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适合用于对健康成年人已知无致病作用微生物，如用于教学普通微生物试验室等。包含微生物举例

大肠杆菌格鲁伯耐格里原虫感染性犬肝炎病毒枯草杆菌一级生物安全防护试验室医学实验室的生物安全防护第38页试验室应设洗手池（靠近出口处）试验室围护结构内表面应易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯试验室中家俱应牢靠。应有专门放置生物废弃物容器台（架）试验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热试验室如有可开启窗户，应设置纱窗一级生物安全防护试验室试验室设计及建造医学实验室的生物安全防护第39页

工作过程中禁止非工作人员进入试验室。接触微生物或含有微生物物品后，脱掉手套后和离开试验室前要洗手禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化装及存放食物一级生物安全防护试验室标准微生物操作规程医学实验室的生物安全防护第40页

使用机械移液器吸收液体，禁止口吸制订尖锐器具安全操作规程按试验室安全规程操作，降低溅出和气溶胶产生天天最少消毒一次工作台面，活性物质溅出要随时消毒全部培养物、废弃物在运出试验室前须进行灭活（如高压）；需运出试验室灭活物品须放在专用密闭容器内医学实验室的生物安全防护第41页一级生物安全防护试验室

安全设施和个体防护普通无须使用生物安全柜等专用安全设备工作人员在试验室应穿工作服，戴防护眼镜工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套医学实验室的生物安全防护第42页试验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适合用于对人或环境含有中等潜在危害微生物包含微生物举例

麻疹病毒沙门氏菌乙型肝炎病毒

HIV血清学检测衣原体志贺氏菌二级生物安全防护试验室医学实验室的生物安全防护第43页二级生物安全防护试验室设计和建造特殊要求

消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置等）洗眼装置可自动关闭门锁门口有发光指示装置换气装置（3-4次/小时）医学实验室的生物安全防护第44页满足一级试验室(标准微生物操作规程)各款要求，在此基础上尤其注意：制订出入制度试验室人口贴上生物危险标志制订试验室特定生物安全操作规则每年一次最新培训制度二级生物安全防护试验室特殊微生物操作规程医学实验室的生物安全防护第45页使用塑料器材代替玻璃器材禁止用手处理破碎玻璃器具培养基、组织、体液及其它含有潜在危险性废弃物须放在防漏容器中储存、运输及消毒、灭菌医学实验室的生物安全防护第46页用过针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止用手直接从注射器取下。用过针头必须直接放入防穿透容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运输到特定区域消毒，最好进行高压消毒医学实验室的生物安全防护第47页工作人员应接收必要免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要时搜集从事危险性工作人员本底血清严格执行试验室工作人员年度采血检测HIV

抗体和立案制度。每六个月进行一次

HIV

抗体检测，并保留样品对从事艾滋病试验室工作人员，因工作中意外事故造成HIV

职业暴露者，所在单位应负责处理抗病毒及其它对应治疗医疗费用医学实验室的生物安全防护第48页试验设备在运出修理或维护前必须进行消毒人员暴露于感染性物质时，及时向试验室责任人汇报，并统计事故经过和处理方案禁止将无关动物带入试验室医学实验室的生物安全防护第49页处理以下致病微生物时应在生物安全柜(Ⅱ级)中进行，包含:

高浓度大容量有喷溅可能性上述材料离心操作如使用密封离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在试验室中进行Ⅱ级生物安全柜必须每年进行一第二年度现场检测二级生物安全防护试验室安全设施和个体防护医学实验室的生物安全防护第50页当微生物操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用面部保护装置应有对应SOP在试验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过工作服应先在试验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃当手可能接触感染材料、污染设备时应戴手套。如可能发生感染性材料溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开试验室，工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用医学实验室的生物安全防护第51页以下操作必须在P2试验室或全排式生物安全柜中进行l、含漱液、血清和血液等样品诊疗检测2、溶解、固定或用其它方法处理灭活病毒和(或)无传染性病毒基因片段3、常规细菌和毒素检验4、可能产生气溶胶样品处理5、临床样品包装、分装6、离心管和离心机转头封闭和开启医学实验室的生物安全防护第52页试验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适合用于主要经过呼吸路径使人传染上严重甚至是致死疾病致病微生物及其毒素。通常已经有预防疫苗包含微生物举例

结核分枝杆菌牛分枝杆菌鼠疫杆菌炭疽杆菌

Q热病原体HIV(血清学检测除外)

澳大利亚立克次氏体加拿大立克次氏体

三级生物安全防护试验室医学实验室的生物安全防护第53页以下操作必须在P3试验室中进行l、用细胞培养方法分离病毒2、搜集或浓缩病毒或其培养产物3、用活病毒或病毒全基因接种动物4、咽拭子样品诊疗检测医学实验室的生物安全防护第54页P3试验室示意图医学实验室的生物安全防护第55页试验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适合用于对人体含有高度危险性，经过气溶胶路径传输或传输路径不明，当前尚无有效疫苗或治疗方法致病微生物及其毒素与上述情况类似不明微生物，也必须在四级生物安全防护试验室中进行，待有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级别试验室中处理包含微生物举例

黄病毒埃博拉病毒中欧蜱传脑炎病毒

四级生物安全防护试验室医学实验室的生物安全防护第56页美国国立卫生研究所美国疾病控制中心病源操作一级屏障二级屏障P1BSL—1不会经常引发健康成人疾病标准微生物操作不要求开放试验台、洗手池P2BSL—2人类病源菌，因皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发生危险BSL—1操作外加：1、限制进入2、有生物危险警告标志3、“锐器”安全方法4、生物安全手册，其中要求废物消毒和医疗观察1级、2级生物安全柜试验服、手套、若需要则采取面部保护方法BSL-1外加：高压灭菌锅P3BSL—3内源性和外源性病源，可经过气溶胶传输，能造成严重后果或生命危险BSL-3BSL-2操作外加：1、控制进入2、全部废物消毒3、洗涤前，试验服消毒4、有基础血清1级、2级生物安全柜保护性试验服、手套、若需要则采取呼吸保护方法BSL-2外加：1、和进入走廊隔开2、双门进入，门自动关闭3、排出空气不循环4、试验室内负压P4BSL—4对生命有高度危险危险性病源或外源性病源：致命、经过气溶胶而致试验室感染：或未知传输风险相关病源BSL3操作外加：1、进入前换衣服2、出试验室前淋浴3、带出设施全部材料消毒3级生物安全柜或1级、2级生物安全柜加全身、供给空气正压防护服BSL3外加：1、单独建筑或隔离区域2、有供气系统、排气系统、真空系统、消毒系统3、其它相关要医学实验室的生物安全防护第57页

样品从一个试验室转送到另外一个试验室，必须是血清或血浆，除特殊需要外，普通不能用全血且需置于带有盖帽试管内，预防样品流出，试管上应有显著标识。清楚地标识为感染性材料感染性材料必须放在密闭管子中，再放入含有足够吸水材料生物危险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖容器内，容器材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外表有HIV检测专用字样。假如旅程较远或者气候酷热时，盛有样本容器应至于4℃以下转运样本转送和发放生物危险Ⅲ级医学实验室的生物安全防护第58页试验室生物安全防护医学实验室的生物安全防护第59页职业暴露是指试验室、医护、预防保健人员以及相关监管工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作过程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者血液、体液污染了破损皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有艾滋病病毒血液、体液污染了针头及其它锐器刺破皮肤，而含有被艾滋病病毒感染可能性情况试验室生物安全事故处理

（以HIV为例）医学实验室的生物安全防护第60页美国CDC研究显示：影响针头刺伤后危险性原因包含

伤口深度有可见血液从伤口溢出针头刺破了静脉或动脉污染源来自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒载量高)医学实验室的生物安全防护第61页皮肤针刺伤或切割伤：马上用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤出血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂紧急处理办法医学实验室的生物安全防护第62页粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位衣物污染：尽快脱掉污染衣物