临床常用免疫学检验专家讲座

临床常用免疫学检验临床常用免疫学检验第1页免疫沉淀技术免lghk疫电泳技术酶联免疫测定放射免疫分析化学发光免疫测定其它免疫细胞活性与数量测定技术免疫学检验技术临床常用免疫学检验第2页免疫球蛋白检测血清补体检测感染性疾病免疫学指标肿瘤标志物检测本身免疫性疾病免疫学指标其它体液免疫指标细胞免疫相关检测临床常用免疫学检验临床常用免疫学检验第3页

感染性疾病免疫学诊疗临床常用免疫学检验第4页病毒检验方法培养电镜免疫学方法分子生物方法临床常用免疫学检验第5页病原体免疫学方法检测

原理

用特异性抗体检测病人标本中特定病原体。

优势

出汇报快速、能在感染早期得到诊疗。局限

病原体表型不稳定，存在假阴性；病原体之间有交叉抗原，存在假阳性。检测方法

ELISA(酶联免疫吸附分析)凝集试验免疫制动试验……临床常用免疫学检验第6页特异性抗体检测

原理

检测病人体内特异性抗体动态改变，可以作为病原体感染佐证。优势能反应机体对病原体感染反应性。局限存在潜伏期，不能用于早期诊疗；有窗口期，存在假阴性；检测方法ELISA(酶联免疫吸附分析)凝集试验临床常用免疫学检验第7页甲型肝炎病毒（HAV）RNA病毒检验指标与检验方法

检验指标检验方法HAVAgELISAHAVAbELISAHAVRNAreversetranscriptionPCR,RT-PCR临床常用免疫学检验第8页

DNA病毒乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝病毒科,含有显著种属及嗜肝特征通常判断感染及其情况指标为HBV血清学标志物,如HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HcAg(即所谓"两对半")、抗HBcIgM和HBVDNA等,。乙型肝炎病毒（HBV）临床常用免疫学检验第9页乙型肝炎表面抗原

HBSAg1963年由Blumberg发觉,为肝炎相关抗原(HAA),

HBsAg不但存在于血液中,而且还存在于许多体液和分泌物中,如唾液、尿液、乳汁、精液等。

血清HBsAg仅为HBV感染标志.不反应病毒有没有复制、复制程度、传染性强弱及预后。临床常用免疫学检验第10页抗HBs(HBsAb)

抗HBs是一个中和抗体,对HBV感染含有保护性免疫作用。普通情况下,血清中抗HBs和HBsAg不一样时存在,若同时检出,可能为抗HBs产生早期,或属于不一样亚型HBV感染,或由HBvS基因变异所致。临床常用免疫学检验第11页HBeAg

在血清中出现时间稍后于HBsAg,普通血清HBeAg阳性者,HBsAg亦为阳性。HBeAg与病毒Dane颗粒、HBVDNA含有伴随关系,是HBV复制活跃血清学指标,血清HBeAg阳性说明传染性强,急性乙肝病人血清HBeAg连续阳性3个月以上,则有疾病慢性化倾向。临床常用免疫学检验第12页抗HBe当血清HBeAg转阴后,可出现抗HBe.二者同时阳性较少见,抗HBe不是保护性抗体,。抗HBe阳性说明病毒复制降低,传染性弱,但并非没有传染性。临床常用免疫学检验第13页总抗HBc和抗HBcIgM

总抗HBc包含抗HBcIgM、IgA、IgG和IgE等。抗HBcIgM能够说是机体感染HBV后在血液中最早出现特异抗体,是判断急性乙型肝炎主要指标,研究表明在慢性活动性乙型肝炎患者血循环中,抗HBcIgM检出率及滴度亦较高,说明HBV在体内复制活跃,是传染性强指标之一。抗HBc不是保护性抗体。抗HBc在血中呈低滴度且与抗HBs同时存在,是既往感染标志。临床常用免疫学检验第14页HBVDNA

血中HBVDNA存在是HBV感染最为直接,最为灵敏和最为特异指标。HBVDNA检测方法当前在国内使用最广是聚合酶链反应(PCR)。普通以定量检测103copies/ml以下为阴性，以上为阳性。阳性提醒体内病毒复制活跃，血液中含量高，传染性较强；阴性则相反，病毒复制已得到抑制，血液中含量底，传染性弱。临床常用免疫学检验第15页HBVDNAPCR检测临床意义：(1)急性HBV感染诊疗；

(2)HBVDNA结果与免疫学结果综合评价:

①与HBsAg检测结果关系。②与抗HBs关系。③与HBeAg、抗HBe和抗HBc关系。④疗效果和抗病毒药品疗效评价。临床常用免疫学检验第16页慢性乙型肝炎感染过程分为3个连续阶段：

免疫耐受期（高复制水平HBeAg和HBV-DNA）免疫去除期（中等或低复制水平HBeAg和HBV-DNA）残余整合期（无HBeAg和HBV-DNA）。HBeAg产生，增加转阳，进而降低、消失、转阴；以及HBeAb产生，进而增加转阳，与HBV病毒消失是一个动态过程。HBV-M虽可在一定程度上反应病毒是否处于复制状态，不过不可防止地含有一定不足。而荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量水平，能直接表达HBV复制程度，敏感性更强，特异性更高，在乙肝早期诊疗、传染性识别、病毒复制水平判断以及动态观察治疗效果中含有更高地位和价值。临床常用免疫学检验第17页检验指标与检验方法

检验指标检验方法HBSAgELISAHBSAbELISAHBCAgELISAHBEAgELISAHBEAbELISAHBCAb-IgMELISAHBVDNA荧光定量PCR、巢式PCR临床常用免疫学检验第18页序号HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb临

床

意

义1－－－－－过去和现在未感染过HBV。2－－－－+(1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已消，抗-HBs还未出现；(3)无症状HBsAg携带着。3－－－++(1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期；(3)少数标本仍有传染性。①HBV感染已过；②抗HBs出现前窗口期。4－+－－－(1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性5－+－++急性HBV感后康复。6+－－－+(1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。7－+－－+既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。8+－－++(1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。即俗称“小三阳”。9+－+－+急性或慢性乙型肝炎感染。提醒HBV复制，传染强。即俗称“大三阳”。10+－－－－(1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潜伏期；(2)慢性HBV携带者，传染性弱。11+－－+－(1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向恢复。12+－+－－急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。13－－+－+非经典性急性感染。14－+－+－HBV感染后已恢复。15－－－+－急性HBV感染趋向恢复。临床常用免疫学检验第19页丙型肝炎病毒（HCV）RNA病毒检验指标与检验方法

检验指标检验方法HCVAb-IgMELISAHCVAb-IgGELISAHCVRNAreversetranscriptionPCR,RT-PCR临床常用免疫学检验第20页丁型肝炎病毒（HDV）DNA病毒检验指标与检验方法

检验指标检验方法HDVAgELISAHDVAb-IgGELISAHDVAb-IgMELISAHDVDNA荧光定量PCR、巢式PCR临床常用免疫学检验第21页戊型肝炎病毒（HEV）RNA病毒检验指标与检验方法

检验指标检验方法HEVAb-IgMELISAHEVAb-IgGELISAHEVRNAreversetranscriptionPCR,RT-PCR临床常用免疫学检验第22页庚型肝炎病毒（HGV）RNA病毒检验指标与检验方法

检验指标检验方法HGVAbELISA、RIA临床常用免疫学检验第23页人取得性免疫缺点病毒

（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）属RNA病毒，分HIV-I、HIV-II型；可疑HIV感染病员全部检验申请单应用红笔书写；检验指标与检验方法过筛试验：ELISA查抗体、快速蛋白印迹法查抗原确诊试验：蛋白印迹试验查抗原、RT-PCR查RNA临床常用免疫学检验第24页肿瘤标志物（tumormarker)：

在肿瘤发生、发展过程中，由肿瘤细胞合成、释放物质或由机体对肿瘤发生反应而产生一类物质；与正常组织相比，这些物质在机体内含量显著增高；检测这些物质能够反应肿瘤恶变阶段和肿瘤基因型。肿瘤标志物检测临床常用免疫学检验第25页蛋白类甲种胎儿球蛋白（alphafetoprotein,AFP)癌胚抗原（carcineombryonicantigen,CEA)前列腺特异抗原（prostatespecificantigen,PSA)癌抗原125（cancerantigen125,CA125)癌抗原15-3（cancerantigen15-3,CA15-3)组织多肽抗原（tissuepolypeptideantigen,TPA)鳞状上皮细胞癌抗原（squamousecellcarcinomaantigen,SCC)临床常用免疫学检验第26页酶类P461-462α-L岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）前列腺酸性磷酸酶（prostaticacidphosphates，PAP）神经原特异性烯醇化酶（neuronspecificenolase，NSE）异常凝血酶原（abnormalprothrombin，APT）临床常用免疫学检验第27页糖脂类P460-461癌抗原50（cancerantigen50,CA-50)癌抗原72-4（cancerantigen72-4,CA72-4)糖链抗原19-9（carbohydrateantigen19-9,CA19-9)癌抗原242（carbohydrateantigen242,CA242)临床常用免疫学检验第28页甲种胎儿球蛋白（alphafetoprotein,AFP)AFP在胚胎期是功效蛋白，合成于卵黄囊、肝和小肠AFP在临床上用于以下辅助诊疗：

(1)产前诊疗胎儿宫内死亡、神经管畸形、无脑儿和脊裂。(2)急慢性肝炎，(3)原发性肝细胞癌约70％以上AFP在400μg/L以上，多逐步升高，亦有不高于400μg/L，甚至在正常水平患者。临床常用免疫学检验第29页癌胚抗原（carcineombryonicantigen,CEA)CEA是一个酸性糖蛋白，胚胎期在小肠、肝脏、胰腺合成，成人血清含量极低(<5μg/L。CEAl965年被发觉时，认为是结肠癌标志物(60%-90％患者升高)，但以后发觉胰腺癌(80%)、胃癌(60％)、肺癌(75％)和乳腺癌(60％)也有较高表示。临床常用免疫学检验第30页癌抗原125（cancerantigen125,CA125)为一个广谱标志物。正常值以35U／ml为界，82．2％卵巢癌、58％胰腺癌、32％肺癌，及其它非妇科肿瘤皆有不一样程度升高，但作为卵巢癌辅助诊疗是个主要标志物，与病程相关。临床常用免疫学检验第31页癌抗原19-9（cancerantigen19-9,CA19-9)

为唾液酸化乳-N-岩藻戊糖II，是一个类粘蛋白糖蛋白成份，与Lewis血型成份相关。血清内正常值＜37U／mL(＞95％)，异常升高也是在各种肿瘤出现，如79%胰腺癌、58%结肠癌、49％肝癌、67％胃癌、67如胆囊癌、肺癌、乳腺癌皆有10％左右是升高。临床常用免疫学检验第32页癌抗原15-3（cancerantigen15-3,CA15-3)是乳腺细胞上皮表面糖蛋白变异体，近年推出作为乳腺癌标志物，正常＜40U／ml哺乳期妇女或良性乳腺肿瘤皆低于此值。乳腺癌晚期100％，其它期75%此值显著升高。该标志物也是广谱，可见于50％肝细胞癌、53％肺癌、34％卵巢癌患者。因为CEA在乳腺癌中也有诊疗价值，如二者联合将可提升10％阳性率。临床常用免疫学检验第33页鳞状细胞相关抗原(SCC)是由宫颈癌细胞中提纯，是宫颈癌很好肿瘤标志物。SCC在正常鳞状上皮细胞内也存在，伴随鳞状上皮细胞增殖(恶性)而释放入血。正常人血清水平＜2μg/L。异常升高可见于宫颈鳞癌，21％宫颈腺癌也有升高。肺鳞癌有较高阳性率，可见SCC是鳞状上皮癌主要标志物。临床常用免疫学检验第34页前列腺特异抗原（prostatespecificantigen,PSA)

PSA是当前诊疗前列腺癌最敏感指标，可用于前列腺癌早期诊疗、监测治疗及预测复发。PSA是由前列腺上皮细胞产生一个大分子糖蛋白，它含有极高组织器官特异性。异常升高预示有患前列腺癌可能。以＞4μg/L为临界值，早期前列腺癌63％-70％阳性，总阳性率可达69-92．5％。临床常用免疫学检验第35页神经原特异性烯醇化酶(NSE)

血清NSE是神经内分泌肿瘤特异性标志，如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(70％升高)。正常人血清NSE水平＜12．5U／ml当前，NSE已作为小细胞肺癌主要标志物之一。临床常用免疫学检验第36页肿瘤首选标志物补充标志物肺癌CEA、NSE、CYFRA21-1TPA、SCC、ACTH、降钙素、TSA肝癌AFPAFU、γGT、CEA、ALP乳腺癌CA15-3、CEACA549、hCG、降钙素、铁蛋白胃癌CA72-4CEA、CA19-9、CA242前列腺癌PSA、f-PSAPAP结肠直肠癌CEACA19-9、CA50胰腺癌CA19-9CA50、CEA、CA125卵巢癌CA125CEA、hCG、CA19-9睾丸肿瘤AFP、hCG

宫颈癌SCCCA125、CEA、TPA膀胱癌无TPA、CEA骨髓瘤本-周蛋白、β2-M

惯用肿瘤标志物联合检测临床应用临床常用免疫学检验第37页类风湿因子（rheumatoidfactor,RF)抗核抗体(antinuclearantibody,ANA)组织和细胞抗体本身免疫病相关免疫指标临床常用免疫学检验第38页抗核抗体抗组蛋白抗体抗脱氧核糖核蛋白(DNP)抗体抗双链DNA抗体抗RNA抗体抗可提取核抗原(ENA)抗体临床常用免疫学检验第39页抗Sm抗体抗RNP抗体抗SS-A(Ro)抗体抗SS-B(La)抗体抗Scl-70抗体抗着丝点抗体抗PM-1抗体抗JO-1抗体抗核仁抗体临床常用免疫学检验第40页

ANA(Antinuclearantibodies)

ANA是一类能与各种细胞核抗原反应本身抗体，许多本身免疫性疾病都能够出现阳性。如系统性红斑性狼疮(SLE)、混合结缔组织病(MTCD)、干燥症(SS)、全身性硬皮病(PSS)。ANA测定在许多胶原病病人均可呈阳性，需深入作抗DNA抗体和抗ENA抗体测定判别。

临床常用免疫学检验第41页

抗－dsDNA（double-strandedDNA）

抗－dsDNA抗体在SLE病人血清中经常能够检测到。美国风湿病学研究院把它作为SLE分类标准指标之一。临床常用免疫学检验第42页

抗-SS-A(Ro)