输血前血型血清学检验

关于输血前血型血清学检验2输血前要做三项检查：血型鉴定；抗体筛选；交叉配血试验。目的有二：使输入的血液成分有效存活；不会引起受血者的红细胞发生破坏。三者有互补作用，缺一不可。第2页,共60页，星期六，2024年，5月3在检验医学中，没有几项检验像输血前检验一样，临床医生几乎完全依赖其结果的正确性。输血前检验的每一个环节均可能发生差错，标本搞错最为常见。给患者输入不相容的血液成分导致严重不良后果：急性溶血反应：多由ABO血型不相容输血引起，人为差错是其主要原因；迟发性溶血反应：多由ABO以外血型不相容输血所致，输血前检验不规范是其主要原因。第3页,共60页，星期六，2024年，5月4常规ABO血型鉴定应包括正反定型，二者起到互相验证和质控的作用。ABO正定型采用单克隆抗-A、抗-B血型试剂，抗-B试剂不应该与获得性B抗原反应。ABO、RhD血型抗原检测第4页,共60页，星期六，2024年，5月5ABO、RhD血型卡检测每个血型检测卡都带自身质控（ctl）对照，实质就是一个阴性质控。如果是阳性，则检测结果无效。优点为：避免病人自身凝集引起误判结果。监控操作规范性。监测试剂卡质量。第5页,共60页，星期六，2024年，5月6ABO、RhD血型卡检测操作步骤a.制备1%待检红细胞生理盐水(1mlN.S+10ul压积红细胞)；b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul；c.将检测卡置离心机，1800r/min2min，2500r/min1min离心；第6页,共60页，星期六，2024年，5月7ABO、RhD血型抗原检测卡4+表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。3+表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。2+表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。1+表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。±表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。-表示RBC全部沉积于胶底。PH表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。H表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。dcp表示混合凝集外观，部分红细胞凝集颗粒集结于凝胶表层，部分红细胞沉于胶底。第7页,共60页，星期六，2024年，5月8ABO、RhD血型抗原检测卡多发生在异型输血、异卵双生、双精受精和异型骨髓移植后。异型输血、异型骨髓移植属于暂时性嵌合（人工嵌合），双卵双生、双精受精是遗传嵌合属于永久性嵌合。混合凝集外观：一般出现在嵌合体血型中第8页,共60页，星期六，2024年，5月9检验结果的解释A、B管凝胶强度<3+，可疑为A、B亚型结果或其他原因引起的抗原减弱；

RhD凝集强度<3+，可疑为变异株。ABO、RhD血型抗原检测卡第9页,共60页，星期六，2024年，5月10ABO正反定型不符结果分析假阴性结果a.试剂和细胞比例不当；b.没能认识溶血也是阳性反应；c.加错样本；d.离心时间、速度不足；e.试剂失效、用法错误；f.记录或结果判读错误。第10页,共60页，星期六，2024年，5月11假阳性结果a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染；b.加样时交叉污染；c.加错样本;d.离心时间、速度过大;e.实验容器不洁;f.记录或结果判读错误。ABO正反定型不符结果分析第11页,共60页，星期六，2024年，5月12ABO正反定型矛盾

抗体问题正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc-----第12页,共60页，星期六，2024年，5月13抗体减弱或不产生原因新生儿（新生儿ABO抗体很弱，通常在三个月后进行反定)老年人白血病、淋巴瘤患者使用免疫抑制剂的患者免疫缺陷患者(先天性丙种球蛋白缺乏症等)骨髓移植患者第13页,共60页，星期六，2024年，5月14ABO正反定型矛盾

抗原问题正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc4++4+-4+第14页,共60页，星期六，2024年，5月15获得性“B”现象由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的疾病引起。肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生B特异性。也见于普通变形杆菌引起的败血症。第15页,共60页，星期六，2024年，5月16红细胞血型抗原减弱或消失A亚型和/或B亚型白血病、何杰金氏病等某些疾病引起的血型物质增多，如胃癌，胰腺癌第16页,共60页，星期六，2024年，5月17ABO正反定型矛盾

血浆异常（1）：缗钱状凝集正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

4+2+4+2+4+第17页,共60页，星期六，2024年，5月18缗钱状凝集原因白/球蛋白倒置血浆扩容剂，如右旋糖酐华通氏胶状物（Wharton’sjelly)：存在于脐带血中。第18页,共60页，星期六，2024年，5月19ABO正反定型矛盾

血浆异常（2）：多凝集正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

2+1+4+4+4+第19页,共60页，星期六，2024年，5月20多凝集现象原因病人红细胞被细菌或病毒感染，使T抗原激活。所有正常人血清均含有T抗体。反应强度取决于血清中T抗体的量。第20页,共60页，星期六，2024年，5月21ABO正反定型矛盾

血浆异常（3）：丫啶黄抗体正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

-3+-4+4+第21页,共60页，星期六，2024年，5月22ABO正反定型矛盾

血浆异常（4）：不规则抗体正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

4+4+4+++第22页,共60页，星期六，2024年，5月23ABO正反定型矛盾

血浆异常（5）：其他原因高效价冷凝集素抗A1（A2,A2B型）抗H（A1,A1B型）第23页,共60页，星期六，2024年，5月24正定型反定型抗A抗B抗ABAcBc

4+2+4+-+ABO正反定型矛盾

cisAB型、AB亚型第24页,共60页，星期六，2024年，5月25ABO正反定型矛盾的处理方法重复所有试验直接抗人球蛋白试验受检RBC用N.S洗3次，用抗A、抗B、抗A1、抗H和抗AB检查抗A1用来鉴定A亚型（A型中A1和A2这两种亚型占99.99%，A1约占80%，A2约占20%，抗-A1与A2不反应）；抗H用于鉴定亚型及孟买型（亚型细胞上有较多的H抗原，与抗-H反应较强，而孟买型红细胞上无H抗原）抗AB用来确认弱A和弱B抗原（这种抗-A和抗-B的混合物与弱A和弱B亲和力强，发生强烈反应）用A1、A2、B、O细胞反定型抗体筛选自身对照第25页,共60页，星期六，2024年，5月26处理方法

超量血型物质用N.S洗涤被检红细胞多次，将红细胞配成盐水溶液，即可得到正确的正定型。第26页,共60页，星期六，2024年，5月27处理方法

获得性“B”现象将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获得性“B”。酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。第27页,共60页，星期六，2024年，5月28处理方法

缗钱状凝集用N.S洗涤被检红细胞，或在反应管中滴加1~2滴N.S。脐带血用N.S洗涤6~8次。第28页,共60页，星期六，2024年，5月29处理方法

冷凝集将反应管置37°C水浴，晃动3~5min冷吸收放散试验第29页,共60页，星期六，2024年，5月30对受血者常规只测Rh(D)抗原；而对献血者不仅要检测Rh(D)抗原，在初筛为阴性时必须进一步确定是否为弱D(即Du)。

；Rh(D)阴性及弱D的受血者只能提供Rh(D)阴性血，不得使用D阳性及弱D的血。即弱D针对受血者而言为D阴性，而对于供血者而言则为D阳性Rh（D）血型鉴定原则第30页,共60页，星期六，2024年，5月31对直抗阳性的Rh(D)阴性红细胞进行Rh(D)定型时，易引起假阳性反应，因此必须按照试剂生产商的试剂使用说明书要求，增加对照试验。Rh（D）血型鉴定原则第31页,共60页，星期六，2024年，5月32抗体筛选对受血者作抗体筛选的目的是检出有临床意义的抗体，并可在配血前有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免盲目配血。方法是用受检者血清与试剂红细胞起反应，以发现在37℃有临床意义的抗体。如抗体筛选试验阳性，缺乏谱细胞鉴定其特异性时，可送有条件的单位鉴定。第32页,共60页，星期六，2024年，5月33抗体筛选抗体鉴定试验包括：自身细胞检查：确定患者血清内是否有自身抗体或自身抗体与同种抗体并存；使用试剂谱细胞：谱细胞一般是由8～16单人份的已知血型表型的O型红细胞配套组成，具有各种不同的抗原成分；根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。第33页,共60页，星期六，2024年，5月34交叉配血主侧交叉：由患者血清和供者红细胞组成；次侧交叉：由患者红细胞和供者血清（浆）组成（由于我国尚未对供者进行抗体筛选，故次侧交叉是有必要的，尤其是输全血时）；自身对照：由患者自身血清和患者自身红细胞组成（自身对照有助于分析解释交叉配血试验中出现的阳性结果）。第34页,共60页，星期六，2024年，5月35凝聚胺试验原理凝聚胺（Polybrene）是一种阳离子聚合物，溶解后能产生很多正电荷，可中和红细胞表面负电荷，引起红细胞非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的；如果是抗体致敏的红细胞在凝聚胺作用下发生凝集，这种凝集是不可逆的；交叉配血第35页,共60页，星期六，2024年，5月36在凝聚胺试验中，首先让红细胞和血清在低离子介质中孵育，促进抗体与红细胞抗原结合，然后加入凝聚胺使红细胞凝聚，再加入枸橼酸钠重悬液（枸橼酸根带负电荷）中和凝聚胺正电荷，恢复红细胞表面的负电荷；重悬后如果是非特异性凝聚，则由于红细胞表面负电荷的排斥作用，红细胞散开，结果为阴性；若是由于抗原抗体引起的特异性凝集则不会散开，结果为阳性。交叉配血第36页,共60页，星期六，2024年，5月37凝聚胺试验的注意事项加入重悬液后，应尽快观察结果，最好在1min内，最长不要超过3min，以免弱反应消失；凝聚胺溶液若放玻璃瓶中太久作用会变弱，所以必须保存在黑色塑料瓶中；凝聚胺是一种抗肝素药物，所以使用含肝素的血标本要稍稍多加一些凝聚胺来中和肝素。交叉配血第37页,共60页，星期六，2024年，5月38交叉配血实验中，离心力、离心时间不当，可造成假阴性或假阳性结果。恒温水浴箱温度不正确也会造成错误结果。对于高效价O型血清出现前带现象时，应当用EDTA盐水适当稀释，以阻止补体C1引起的凝集。出现溶血或部分溶血应判为阳性结果（标本本身溶血例外）。交叉配血第38页,共60页，星期六，2024年，5月39含有冷凝集素的患者交叉配血时可采用37℃生理盐水洗涤3次，如还显弱凝集，再用42℃或45℃盐水洗1次再配血。温抗体型的自身免疫性溶血性贫血患者血清中的游离抗体有时很难吸收完全，导致配血困难。在排除同种抗体的情况下可选择凝集反应弱的同型血液输注，亦可输注O型洗涤红细胞。交叉配血第39页,共60页，星期六，2024年，5月40某些紧急情况下需要快速配血，建议血清（血浆）与细胞比例为2:1，细胞悬液浓度为2%～3%。同时离心前孵育2～5min，有利于检测弱的ABO抗体。婴儿输注O型血或ABO同型血，应当采用母亲的血清（血浆）进行交叉配血。交叉配血第40页,共60页，星期六，2024年，5月41在任何情况下，一定要选择ABO和Rh（D）同型的血液。如果同型血不够用，可以输注O型相合的添加剂红细胞（红细胞悬液、悬浮红细胞），这种红细胞所含血浆量很少。AB型血液不能满足供应，可选择A型或B型红细胞，尽量不用O型，O型红细胞以备它用。交叉配血第41页,共60页，星期六，2024年，5月42Rh（D）阴性血不够用，可以选择Rh（D）阳性血，但有生育能力的妇女不能用。在大量输血时如果输的是同型相合的添加剂红细胞（未输全血），供者之间可以不做交叉配血试验。若是输了ABO不同型的相合红细胞，以后要尽快输注与患者同型的红细胞，不要坚持一直应用ABO不同型的相合红细胞。交叉配血第42页,共60页，星期六，2024年，5月43交叉配血不合分析及处理主侧（+）、自身（-）、抗体筛选（-）患者或供者ABO血型错误：重新定型，患者血清可能含ABO抗体：检查患者亚型、输血史及移植史患者血清中有抗体，但筛选细胞上无相应抗原：对患者进行抗体鉴定供者红细胞已被致敏：对供者做直接抗球蛋白试验第43页,共60页，星期六，2024年，5月44主侧（+）、自身（-）、抗体筛选（+）：患者血清中的同种抗体与供者红细胞上相应抗原起反应：对患者进行抗体鉴定，选择无对应抗原的血液输注。交叉配血不合分析及处理第44页,共60页，星期六，2024年，5月45主侧（+）、自身（+）、抗体筛选（+）患者血清中可能同时存在自身抗体和同种抗体；对患者血清自身吸收及抗体鉴定，用吸收后血清配血白/球蛋白比值不正常：盐水添加法解决缗钱状假凝集）血浆扩容剂（如右旋糖酐）的影响；洗涤细胞或重新抽取标本）污染:使用洁净的器具和符合要求的试剂交叉配血不合分析及处理第45页,共60页，星期六，2024年，5月46交叉配血中的疑难问题次侧交叉配血不合受血者红细胞被致敏：对受血者做直接抗球蛋白试验献血者存在不规则抗体：第46页,共60页，星期六，2024年，5月47双侧交叉配血不合多见于自身免疫性溶贫患者高冷凝集素患者或供血者交叉配血中的疑难问题第47页,共60页，星期六，2024年，5月48交叉配血不合的处理复核受血者和供血者血型鉴定结果抗体筛选试验和抗体鉴定试验抗人球蛋白试验吸收放散试验自身交叉反应试验试剂问题第48页,共60页，星期六，2024年，5月49患者女，李×芝，39岁，农民，因子宫肌瘤行子宫全切除术。术前定血型为A型，Hb110g/L。术中失血约400mL，手术结束时输A型新鲜全血400mL。输完血后，回病房约10分钟，患者寒战、腰痛、发热39℃，1.5小时后排出酱油色尿，手术切口渗血不止，即按急性溶血反应治疗，再次核定血型为B型。2天后出现急性肾功能衰竭。3天后，死于转院途中。病例讨论1第49页,共60页，星期六，2024年，5月50调查发现

采集标本的医护人员误将39岁看成39床，错用39床的血标本测定血型并作配血试验。39床血型为A型，女，李×兰。实际上，患者为28床，血型为B型。问题：该患者是什么输血不良反应？病例讨论1第50页,共60页，星期六，2024年，5月51急性溶血输血反应

1、原因：主要为ABO血型不合2、症状与体征开始输血10～30min内①意识清楚患者：寒战、高热、呼吸困难、腰背酸痛、头痛、胸闷、血红蛋白尿。②麻醉中的病人：最早症状为伤口渗血与低血压。导致休克、DIC和急性肾功能衰竭病例讨论1第51页,共60页，星期六，2024年，5月52急性溶血输血反应

3、应留取哪些标本？①献血者的配血标本②血袋残留的献血者血液③病人输血前、输血后血液标本④病人发生反应后第一次尿液病例讨论1第52页,共60页，星期六，2024年，5月53王某，女，44岁，因乳腺癌1年前作根治术。手术期间患者输A型全血400ml，无不良反应。术后曾化疗8次。此次入院进行第9次化疗。血常规：红细胞4.12×1012/L，血红蛋白125g/L，白细胞3.3×109/L，血小板60×109/L。血型“A”。因白细胞和血小板偏低，为了能顺利进行第9次化疗，给病例讨论2第53页,共60页，星期六，2024年，5月54患者输当天新鲜全血400ml，输血过程无任何反应。化疗顺利。输血后第7天血红蛋白降为90g/L。再输新鲜全血400ml，输后约20分钟，患者觉腰痛，继而出现畏寒、头痛、恶心、体温39℃，尿呈酱油样。经及时抢救，患者转危为安。病例讨论2第54页,共60页，星期六，2024年，5月55复查血型及交叉配血试验患者血型“A”（CCDee)；供者血型“A”(CCDEe)交叉配血试验：盐水介质不发生凝集反应；抗球蛋白和酶介质中，主侧发生强凝集反应,次侧无凝集反应。抗体鉴定:患者血清中存在抗E抗体，效价:512。问题:该患者是什么输血反应？

病例讨论2第55页,共60页，星期六，2024年，5月56迟发型溶血输血反应

1、原因：多由ABO以外血型不合引起，RhD、RhE、Kidd、Duffy等血型不合较多见。2、症状与体征输血后3～7天发热（多为低热）、黄疸、贫血、网织红细胞增加，多数无血红蛋白尿（血管外溶血）。一般不重，易漏诊。病例讨论2第56页,共60页，星期