发酵染菌原因分析

发酵染菌缘由分析第一局部：根底学问,.依据以上特点我们应得出如下结论：A,根本上是附着于灰尘、液滴等微粒的外表上。B：介质过滤除菌就是把空气中的各种微粒和极少量的游离微生物捕集起来予以除掉。因此我们通常所用的空气过滤器为什么0.3u可以保证无菌发酵生产的缘由。无菌检查与染菌的处理,,,对菌,无菌检验。Aa:无菌试验b:培育液的显微镜拉查c:无菌试验现在承受的无菌试验方法有肉汤培育法、双碟培育法、斜面培育法。其中以〔1〕,然后放入37℃恒温室〔〕内培,同时进展显微镜观看。〔2〕斜面培育法先用空白无菌试管取样,,置于37℃恒温室〔箱〕〔3〕,然后在无茵条件下在双碟培育基上面划线,〔箱〕内培育6,发酵罐培育液直接取入空白无菌试管中,于37℃下培育6小时后在双碟培育基上划线。24小时内的双碟定时在灯光下检查有无杂菌生长。24小时~48小时的双碟1天检查一次,以防生长缓,8,进展无菌检查。该方法常常用于单菌落选择，可以从染有杂菌的培育液中经屡次划线挑取单菌落进展分别无菌试验的结果一般需要8~12小时才能作出推断。为了缩短推断时间,有时向培育B:染菌的推断,染菌罐的推断方法：,以镜检为辅。每个无菌样品的2只酚红肉汤或斜面同时取样培育。要定量或用接种环蘸取法取样，,影响颜色反响和浑浊程度的观看。假设连续3,或斜面连续3个时间,3个时间,发酵培育基灭菌后应取无菌样，以后每隔812小时，确认无杂菌污染前方可弃去。无菌检查时间应每6小时观看一次无菌试验样2、染茵率的统计〔次〕为基准,〔次〕应包括染菌重消后的重复染菌的灌〔批〕〔〕,均作“染菌”论处。〔次〕染菌率〔％〕＝一一一一一一一一－－－X100%〔次〕〔〕的处理〔一〕污染杂菌的处理,,同时对所涉及种子罐染菌的处理,要准时用高压蒸汽直接灭菌后经过滤处理放下水。发酵罐染菌的处理,,;,,,可放掉局部,,可以,,一是参加,,抑制杂菌的生长。二是降低培育温度或掌握补,就要考虑提前放罐。c、染菌后的设备处理..,,,,以防渗漏。染菌后的处理尤为〔二〕污染噬菌体的处理抗生素等产品发酵过程中有时消灭噬菌体污染,轻者造成,重者造成停产。,,早期镜检觉察菌体染色不均匀,,,溶,,产物合成停顿等现象。1.,严防发酵液任意流失；2.全部停产,,断绝噬菌体的寄生根底；3.,,防止噬菌体的重复污染。,,平皿培育不,,,生产力量降低,对生产,但不易被觉察。防止温顺噬菌体污染的方法同上所述。其次局部：染菌缘由分析,不制服染菌就不能实现优质高产。在抗生素发酵生产中造成发酵染菌的缘由很多，分析染菌的缘由是很困难的。但在众多的缘由分析中，从人、机.,,实行相应措施予以制服。一、染菌缘由的分析。,,从现有的阅历可从〔一〕从染菌的规模和时间分析,,杂菌的主要来源可能是空气,如空气过滤器失效或空气管道渗漏造成的。其次考虑种子制备工序。假设只是,,,还要严格检查连消系统是否带入杂菌。,,,或接种,重点分析补料系统和加消沫剂系统，,,如罐内是否有“死角”或冷却系统有,,,要具体状况具体分析。〔二〕从杂菌类型分析,,,这,污染的杂茵是不耐,可从空气净化系统和冷却系统进展追查。二、制服染菌的要点从表5－4,空气净化系统带菌是导致染菌的主要因素。但认真分析,设备穿孔和渗漏等造成的染菌占33.85％，占第1位。染菌缘由所占百分比,％染菌缘由所占百分染菌缘由所占百分比,％染菌缘由所占百分,％1.种子带菌或疑心种子带菌9.648.接种管穿孔。0.292.接种时罐压降至大气压力3.精养基消毒不透4.总空气系统带菌·0.199.阀门泄漏1.450.79110.搅拌轴封的泄漏2.09l·.96 11.罐盖泄漏l.545.泡沫升至罐顶0.4812.其它设备泄漏10.13.6.央套穿孔12.3613.操作问题l0.15”7.蛇管穿孔5.8914.缘由不明24.91,对发酵过程中涉及的空气净化系统、设备系统、蒸汽质量、1·,,在过滤器灭菌时要,2·对蒸气的要求,,,依据不同灭茵工艺要求供给稳定的蒸汽压力,灭菌过程中蒸汽压力不行以大幅度的波动,以保证灭菌质量性。对设备的要求,无“死角”。凡与物料、空气、下水道连接,蛇管和夹层应定期试漏。连续灭菌设备要定时拆卸清洗。无,以保持无菌状态。对工艺操作的要求,,,除尽罐壁,去除罐内附件处的积存物。,配料罐和输送料液系统要定时清洗消毒。在实罐灭菌、空罐灭菌、培育基连续灭菌、各种管道的灭菌等的操作过程中,要严格执行,保证蒸汽压力与温度的对应关系。这里重点强调菌种组的工作人员要严格按工艺规程制备生产种子。对进入无菌室的全部物料、器械发酵过程的无菌检查工作,要严密取样操作,力求削减取样和平皿划线时的操作误差,,,加强无菌检查。第三局部：灭菌的对数残留定律实消灭菌的时间计算：t=2.303/klogN0/Nst----k---速度常数，1/秒与灭菌承受的温度和菌的种类有关N0开头灭菌时原有菌个数Ns---完毕灭菌时菌个数2〕连续灭菌的时间计算：t=2.303/klogC0/Cst灭菌时间秒k---速度常数，1/秒与灭菌承受的温度和菌的种类有关C0---开头灭菌时每毫升原有菌个数Cs---完毕灭菌时每毫升菌个数第四局部：空气过滤器膜的介绍⋯膜材料：醋纤—三醋纤、磺化聚砜、磺化聚醚砜、芳香聚酰胺、陶瓷⋯材料金属膜，金属合金膜，高分子膜，高分子合金膜，陶瓷膜型式板状膜，管状膜—毛细管状、多通道管状、圆管状⋯⋯⋯效率⋯材料金属膜，金属合金膜，高分子膜，高分子合金膜，陶瓷膜型式板状膜，管状膜—毛细管状、多通道管状、圆管状⋯⋯⋯效率⋯⋯25膜过滤——微滤〔MF〕MF评价膜评价内因孔构造，孔径及其分布，孔隙率外因器评价牢靠性经济性精度，效率，耐温性，耐化学品腐蚀性，亲疏水性，机械强通量，购置本钱，更换频率内因与精度、效率、通量关联，外因与使用环境关联。器无损伤制作工艺，〔3〕正确的评价方法。MF膜评价—孔径及其分布方法方法原理模型＊气泡点法，汞压入法，流速毛细管模型〔常规〕法⋯孔板模型〔YM专有技术〕算式分布类型r=4kбcosθ/pr-kб—测试液外表张力，左倾斜，对称〔正态分布〕r=4kбcosθ/5pθ—膜材料与测试液接触角，p—起泡点压力28MF膜评价—耐热性PTFEPVDFPESN6CA-CNNiSS8080807060250400142138130121121350600膜材质MF膜评价—耐化学品腐蚀性试验法：溶剂中浸泡24hr，其泡点下降＜10％，通量下20膜材质MF验破坏性试验：细菌实体试验，杂质实体试验方法对象方法对象性集中流法Fick定律间接以流经膜的气体来评价膜孔大度、效率体压力衰减法间接以膜前气体压力精度、效率体油雾法直接〔〕变化为泡点法Young方程间接以膜潮湿后冒出气度、效率不完全适用于组件MF过滤机理—气体直接阻留惯性沉积拦集截留静电截留

意义膜使全部比膜孔径大的粒子全部阻留在截留表层上微粒有足够的惯性力，使它不能随流线绕过膜而被阻留微粒惯性较小时，虽能随流线运动，但几乎完全漂浮在围绕膜体的粘性流中，由于粘性流足够的慢而使颗粒被留下微粒由于布朗运动而从流线中游离出来，经碰撞膜体而被阻留依靠微粒与膜体间实有的或诱导的静电力，使微粒撞击到膜体上被捕集图片：产品名称：

玻纤披覆氟聚物微孔滤膜(HFGF)产品特点：集纤维与膜的过...280mmF-...产品型号：F-B、E(HF)(GF)使用说明：请垂询一鸣公司也不大。99年消灭的几批染菌罐却表现出了很大特别：确定染菌后，发酵罐PH开头急借鉴作用。为找清染菌缘由，从染菌罐分别出杂菌，考察其培育特性，做耐热试验。然后依据这种菌在发酵培育基中的生长速度，推算出杂菌进入发酵罐的时间，最终确定了染菌缘由，下。一：染菌特征1：发酵罐培育至50小时左右，33小时后的无菌肉汤跟踪样开头变色，确认染菌。此后，发酵罐PH60小2：变色肉汤涂片镜检：短杆菌。3：发酵液(周期60小时左右)涂片镜检：杆菌，已经形成芽孢。二：杂菌分别、培育1：把变色肉汤接入无菌红色肉汤，37℃恒温培育。24小时后肉汤变黄，说明这种菌代谢产生酸性物质。2：向变色肉汤中参加25MNaOH溶液，摇匀〔PH10〕，放置10分钟。把该肉汤接入无菌肉汤，37℃恒温培育48小时，肉汤仍不变色。说明这种杂菌对碱性环境的耐受性较差。3：用细菌培育基对这种杂菌进展平板分别，杂菌菌落具有细菌菌落的典型特征。挑菌呈短杆状，可观看到局部菌体进展二分裂生殖。4：把杂菌接入菌种效价跟踪用的发酵瓶，培育状况与发酵罐的代谢状况类似。5：把杂菌接入空白发酵瓶，培育24小时后进展平板分别及肉汤检测，结果证明这分别接入11支无菌肉汤。取1支作比照，另10支每2支为1组，分别在100℃510分钟，15202537℃恒温培育2425〔代时〕1：制备菌体稀释液〔浓度约每毫升几百个〕〔520个/毫升〕。2：代时确实定培育时间取样量菌落数菌浓菌体数吸取1毫升稀释液接入空白发酵瓶〔30培育时间取样量菌落数菌浓菌体数小时〕 〔毫升〕 〔个〕 〔个/毫升〕 〔个〕00.516329601.50.5408024003.00.24924573504.50.2122610183006.00.1172172051600〔X=X〔

ⅹ2t?t

/T,t

〕和上表数据，计算得到代时〔T〕约2 1 〔2 1〕 2 1 2 1为1.1小时。其中，X为时间t 时的菌体数量，1 1X为时间t 时的菌体数量，2 2T为代时〔生殖一代所需的时间〕3：发酵罐染菌时间的推算50小时的染菌发酵液，进展梯度稀释、平板菌落计数，计算得到发酵罐在50小时的杂菌浓度为9.08ⅹ107个/毫升。发酵液的体积按12立方米计算1.09ⅹ1015个。以杂菌在发酵液中的代时为1.1小时计算，杂菌进入的数量与生殖到1.09ⅹ1015个所需的时间如下表，可能的染菌时间即为转运周期与杂菌生殖时间的差值。排解杂菌一次以极少数目〔几个或几十个〕进入可能性，大致的染菌时间应为10