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1口蹄疫O型病毒时分辨荧光微球免疫层析检测方法本标准规定了口蹄疫O型病毒时分辨荧光微球免疫层析检测方法的试剂与耗材、技术原理、操作步NYT541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输时间分辨荧光微球（Time-resolvedfluorescencemicr）：4缩略语25.1口蹄疫O型病毒时间分辨荧光定量试纸条，按—三维划膜喷金仪—数控高速斩切机—磁力搅拌器—硝酸纤维素膜—玻璃纤维纸—PVC背衬板—试纸卡壳本方法采用时间分辨荧光免疫层析技术和双抗体夹心法结合技术，检测口蹄疫O型病毒抗原。通过样本与荧光微球标记物沿层析膜移动，样本中口蹄疫病毒与荧光微球标记物、检测线（T线）上的抗原），3未破裂水泡中的水泡液用灭菌注射器吸出后装入灭可直接作为待检样品。离心10min，离心后的最下层的病毒抗原作为待检样品。分钟。将反应15分钟的试纸条插入荧光分析仪，填写对45毒种，按维持液5～10%的量接种生长良好的BH（100IU/mL），病毒液用2mmolr/min离心30min，取上清（O/MYA98/JSCJ/2010灭活制苗病毒抗原液），45min，弃上清；③PB缓冲液（0.2mol/LNa2HPO4,0.2mol/LNaH2PO4，pH7.4）悬浮步骤②获得的沉乙烯于密闭容器中，剧烈振荡充分乳化，然后2～8℃、8000r/min离心30min，收集上层液；⑤将步骤④获得的上层液，45000r/min离心3h，弃上清抗原。（3）蔗糖密度梯度离心：配制50%蔗糖母液；用50%蔗糖配制45%、35%、25%、15%四种浓mL，制备6个蔗糖梯度柱，2～8℃静止平衡过夜；次日），集的级分进行顺序编号，共收集22个级分。其余5支离心管重复并至22个级分管中。用紫外分光光度计测定至30µg/mL）与等量弗氏完全佐剂按浓度抗原与等量弗氏不完全佐剂按充分混合后，取6体积的pH7.4、0.02mol/L流洗至流出液OD280nm不高于0.1，用注射器将病毒抗体浓度，含量不低于2.0mg/mL。A.2.1含检测线和质控线硝酸纤维素膜（NC膜）的制备A.2.2时间分辨荧光微球标记兔抗口蹄疫O7A.2.3试纸条的组装1-8分别代表卡壳、PVC板、吸水纸、NCA.3标准曲线的建立A.3.1定量阈值A.3.2标准曲线的建立8含量/0.7

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