人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）ELISA试剂盒说明书

第第页人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM—1）ELISA试剂盒说明书产品名称:人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM1）ELISA试剂盒英文名称:Human（sICAM1）ELISAKit检测方法双抗夹心法/酶联免疫方法规格96T/48T反应时间3.5h反应性Human样本体积100μL检测范围：12.5ng/mL–400ng/mL。特异性：不与其它可溶性结构仿佛物交叉反应。重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。有效期：6个月保管条件：28℃可检测多种生物样品，包含：血清、血浆、体液如尿液、细胞培养上清液和细胞/组织裂解液等。本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM1）的含量。【试验原理】本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人sICAM1抗体包被于酶标板上，试验时样品或标准品中的人sICAM1会与包被抗体结合。依次加入生物wu素化的抗人sICAM1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人sICAM1抗体与结合在包被抗体上的人sICAM1结合、生物wu素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物（TMB），TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加停止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波优点测OD值，sICAM1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中sICAM1的浓度。试剂盒的构成96/48微孔板（1块,已包被抗人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM1）ELISA试剂盒单抗）、样品稀释液（1瓶）、第一抗体工作液（1瓶）、酶标抗体工作液（1瓶）、底物稀释液（1瓶）、停止液（1瓶）、洗涤液（20×,1瓶）、标准品（2000pg/ml,2管,冻干粉）、OPD片（3片）、坐标纸（1张）。试验准备工作1、试剂配制:洗涤液按1:20三蒸水稀释；标准品在用前每管加入200l蒸馏水溶解即可（实在见说明书）；底物工作液应在显色前510min将OPD片放入底物稀释液中溶解,每片加5ml液。2、标本收集:手记血清或体液尽早检测,2～8℃保管一天需更长时间须冷冻（20℃）保管,避开反复冻融；组织（胎肝、胎脑等）试验前一天组织匀浆,用90%体积RIPA裂解液（PH8.0,50mMTrisHCl、1%NP40、,0.25%sodiumdeoxycholate、150mMNaCl、1mMEDTA）和10%体积的10mMPMSF进行组织匀浆（10%）,冰上裂解30min,12000×20min后取上清,4℃待用。3、器材准备:酶标仪、37℃恒温烤箱、滤纸、托盘、量筒、烧杯、各种规格的移液器、离心管、管架和废液缸等。三蒸水自备。操作步骤1、设立标准孔8孔（依据样品蛋白浓度可调整为6孔）,每孔中先各加入样品稀释液100ul,第一孔再加标准品100ul,混匀后用移液器吸出100ul,移至第二孔,如此反复作对倍稀释至第7孔,最终,从第7孔中吸出100ul弃去,使之体积均为100ul。第8孔为空白对照。2、加样:待测样品孔中每孔各加入待测样品100ul。3、将反应板置于37℃×120min。4、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤46次,向滤纸上扣干。5、每孔中加入第一抗体工作液50ul。6、将反应板充分混匀后置37℃×60min。7、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次,向滤纸上扣干。8、每孔加酶标抗体工作液100ul。9、将反应板置于37℃120min。10、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次,向滤纸上扣干。11、每孔中加入底物工作液100ul,置于37℃暗处反应5～10min。12、每孔中加入50ul停止液混匀。13、用酶标仪在492nm处测吸光值。人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM1）ELISA试剂盒计算结果与推断1、以标准品1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/ml之OD值在半对数纸上作图,画出标准曲线。2、全部OD值都应减去空白管值后再计算。依据样品OD值在该标准曲线图上查出或依据标准曲线公式换算出相应样品中TNFa含量。注意事项1、以上标准孔及待查样品均建议做复孔,每次测定均要做标准孔。2、本试剂盒宜置20℃冷藏保管。3、本人ELISA试剂盒取出的试剂在室温（20～25℃）环境下使用,溶液应轻轻摇匀后使用。4、本试剂盒含2M硫酸,不要将它与含叠氮dan化钠的废物混在一起。5、板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。6、避开交叉污染。如洗涤时向样品待测蛋白含量可能高的一侧倾倒。7、提前24h打开烤箱预热。8、底物工作液应在显色前5～10min配制。若配制时间过长,会变质。9、甩尽孔内液体,每孔加350ul左右洗涤液,静止30s后甩尽。尤其加抗体工作