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文档简介
实验项目七
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
教学目的： 一、掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理、操作和血清醋酸纤维薄膜电泳的实验结果。
二、熟悉血清蛋白质的常见种类及含量。
三、了解分离测定血清蛋白质的方法及醋酸纤维素薄膜电泳定量蛋白质的方法原理：
以醋酸纤维薄膜为支持物，将血清点于薄膜上，在pH为8.6的巴比妥电极缓冲液中，血清蛋白质带负电荷，向正极泳动。电泳结束后，将薄膜置于染色液中使蛋白质固定并染色，用漂洗液洗去多余染料，可见到清晰的电泳条带，将个区带剪开，使染料溶于碱性溶液中进行比色分析，可计算出各种蛋白质的相对百分数。
操作步骤
一、每人领取2×8cm醋酸纤维素薄膜一张，用铅笔在无光泽面、距离边缘约1.5cm处，轻轻画一条线。
二、将薄膜无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液上，使薄膜自然浸湿下沉。
三、将充分浸透（膜上无白色斑痕）的薄膜取出，无光泽面向上，平放于滤纸上，再用一片滤纸吸去多余的缓冲液。
在薄膜无光泽面约边缘1.5cm处用铅笔轻轻画一条线1.5cm操作步骤
四、用宽约1.5cm的盖玻片（或有机玻璃片）在盛有血清的表面皿（或载玻片）上蘸一下，使玻片下方均匀附着一薄层血清，然后垂直在薄膜点样线上按一次，待血清渗入薄膜内，移开玻片。注意点样均匀（是实验成败的关键）
操作步骤
五、将点好样的薄膜无光泽面向下，点样线靠近阴极（注意不要贴到纱布上），平衡5分钟后通电电泳。电压为10V/cm，电泳约60分钟后关闭电源。
六、染色：用镊子将薄膜取出，浸入含氨基黑10B的染色液中，染色3~5分钟。
七、漂洗：染色结束后，用漂洗液反复漂洗，直至背景清晰为止。用滤纸吸干薄膜。操作步骤
八、定量：选择条带较清晰的薄膜，用剪刀剪开各条带，浸入事先放好0.4mol/L氢氧化钠4mL的试管中，选择空白区剪下一片平均大小的薄膜做空白对照。反复摇动，20-30分钟后，用分光光度计在650nm处，以空白管为0测定其它管的A值，读出白（清）蛋白A，α1、α2、β、γ球蛋白的吸光度。结果（供参考）
点样线清（白）蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白结果（供参考）
清（白）蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白0.4430.0190.0450.0940.143总T=0.744吸光度值结果（供参考）
清（白）蛋白α1球蛋
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