实验五大肠杆菌与沙门氏菌

关于实验五大肠杆菌与沙门氏菌实验原理各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。第2页,共28页，2024年2月25日，星期天一、目的要求学习常用的生化实验方法；掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。第3页,共28页，2024年2月25日，星期天个体为杆状散在或成对G－二、背景知识介绍大肠杆菌中等大小0.4-0.7×2-3μm大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；与广泛的兽医临床病征有关，如：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；狗的尿道感染；鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。

第4页,共28页，2024年2月25日，星期天第5页,共28页，2024年2月25日，星期天第6页,共28页，2024年2月25日，星期天个体为杆状散在或成对G－沙门氏菌是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，G－，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；人类食物中毒的主要病原之一。第7页,共28页，2024年2月25日，星期天第8页,共28页，2024年2月25日，星期天伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌除雏沙门和鸡沙门氏菌外，其余各菌具有周生鞭毛。第9页,共28页，2024年2月25日，星期天三、实验材料常规接种工具：接种棒、酒精灯等革兰氏染色液、玻片、滴管等菌种:大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。培养基：三糖铁斜面（1支/人）生化管：葡、乳、麦、甘、蔗、H2S、尿、枸（1套/人）试剂：吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂等第10页,共28页，2024年2月25日，星期天四、实验内容观察大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；记录结果。第11页,共28页，2024年2月25日，星期天三糖铁琼脂接种挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；置37℃培养。第12页,共28页，2024年2月25日，星期天生化管接种培养糖发酵试验：葡乳麦甘蔗H2S试验；尿素酶试验；枸橼酸盐利用试验。葡乳麦甘蔗H2S尿枸第13页,共28页，2024年2月25日，星期天葡乳麦甘蔗H2S尿枸大肠杆菌沙门氏菌大肠杆菌沙门氏菌置37℃培养第14页,共28页，2024年2月25日，星期天吲哚试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37℃培养3-5d；静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL；上层变为红色者为阳性反应。乙醚混匀分层吲哚试剂阳性阴性第15页,共28页，2024年2月25日，星期天吲哚试验原理蛋白质中的色氨酸有些细菌如大肠埃希氏菌吲哚对位二甲基氨基苯甲醛+玫瑰吲哚红色①试剂配方一：对二甲基氨基苯甲醛 1g无水乙醇 95mL浓盐酸 20mL②试剂配方二：对二甲基氨基苯甲醛5g戊醇（或异戊醇）75mL浓盐酸 25mL先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。第16页,共28页，2024年2月25日，星期天M.R试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）；于培养物中加入几滴试剂；变红色者为阳性反应，桔红到黄色则为阴性。M.R试剂阳性阴性第17页,共28页，2024年2月25日，星期天V-P试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）；于培养物中加入0.5mLV-P甲液；随后加V-P乙液0.5mL，轻摇；静置10-15min。15min内变红者为阳性。V-P甲液V-P乙液阳性阴性第18页,共28页，2024年2月25日，星期天M.R与V-P试验原理M.R试验：甲基红是一种pH指示剂：当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。pH4.4-6.2

红→黄葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二烯醇某些细菌能发酵二乙酰碱V-P试验：+胨中的胍基化合物注意：通常M.R和V-P试验是密切相关：如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。粉红色化合物+第19页,共28页，2024年2月25日，星期天M.R试剂V-P试剂甲基红0.02g95％酒精60mL蒸馏水40mL甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g无水乙醇100mL）乙液：KOH溶液（KOH40g，水100ml）将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。第20页,共28页，2024年2月25日，星期天五、结果观察大肠杆菌的生长表现普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；麦康凯：琼脂上形成红色菌落较大的菌落。第21页,共28页，2024年2月25日，星期天三糖铁琼脂斜面产酸（黄色）底部产酸（黄色）产气＋H2S－反应模式表示：A／A＋；－第22页,共28页，2024年2月25日，星期天沙门氏菌的生长表现普通琼脂：生长不良；麦康凯：琼脂上形成灰白色菌落。第23页,共28页，2024年2月25日，星期天三糖铁琼脂斜面产碱（红色）底部产酸（黄色）产气－H2S＋反应模式表示：K／A＋(－)；＋(－)第24页,共28页，2024年2月25日，星期天细菌的染色、镜检大肠杆菌沙门氏菌G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm，无芽胞，两端钝圆，散在或成对。第25页,共28页，2024年2月25日，星期天生化管接种培养葡乳麦甘蔗H2S尿枸葡乳麦甘蔗H2S尿枸大肠杆菌沙门氏菌⊕⊕⊕⊕⊕/-－－－⊕－⊕⊕－＋

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