【宁心安神茶的有效成分含量测定探究4400字（论文）】

宁心安神茶的有效成分含量测定研究目录TOC\o"1-2"\h\u23826宁心安神茶的有效成分含量测定研究 19922关键词：宁心安神药茶薯蓣皂苷元HPLC-ELSD含量测定 145681.实验材料及试剂 2241541.1仪器 2237971.2药品与试剂 3195662.实验方法与结果 3135912.1色谱条件 3110242.2溶液的制备 3311572.3专属性试验 4314322.4线性关系考察 5298222.5方法学考察 612132.6样品测定结果 8162023.分析与讨论 9254633.1薯蓣皂苷元提取方法的确定 9313343.2流动相的选择 9282613.3建立HPLC-ELSD法含量测定的意义 9241833.4结果讨论 101730参考文献 1摘要：目的建立宁心安神药茶中有效成分-薯蓣皂苷元的含量测定方法。方法采用HPLC-ELSD法测定宁心安神茶中薯蓣皂苷元的含量，色谱柱型号为DiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%醋酸水溶液（98:2）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：203nm；ELSD漂移管温度85℃。结果：测得薯蓣皂苷元在进样量2.5～12.5μg范围内与峰面积线性关系良好，线性方程为y=125.79x-231.91（r=0.9992）。精密度，重复性，稳定性试验RSD值均<3%。测得宁心安神茶中薯蓣皂苷元的含量约为0.38mg/g。结论：所建立的HPLC-ELSD法具有高效、高速度、高灵敏度、高专属性的特点,为进一步确定宁心安神茶中有效成分的质量控制提供了有效手段。关键词：宁心安神药茶薯蓣皂苷元HPLC-ELSD含量测定宁心安神茶的配料中百合药食两用，其主要成分有皂苷类、多糖、生物碱、微量元素及蛋白质、磷脂、无机元素等[1]。药理研究表明，百合在止咳化痰，抗疲劳与耐缺氧，升高外周白细胞，降血糖及抑制迟发过敏性反应、催眠安神等方面均具有显著效果，而百合拥有的这些功效与其所含的甾体皂苷和苷元，尤其是皂苷元密切相关，甾体皂苷元是一类具有螺旋甾烷结构的化合物或其衍生物，百合药材中单一成分的甾体皂苷含量低，给百合总皂苷的含量测定的准确度带来一定难度[2]。但百合中含有甾体皂苷的皂苷元富含薯蓣皂苷元，薯蓣皂苷元具有抗血栓，改善血管功能等宁心作用[3]。利用高效液相色谱法（HPLC）来测定百合中薯蓣皂苷元的含量是目前常用的一种分析方法，其操作过程简便快速，实验结果准确，是工业生产和化学研究上检测薯蓣皂苷元含量的理想方法。因此本实验通过酸水解以薯蓣皂苷元为标准用高效液相－蒸发光散射检测器(HPLC－ELSD)测定宁心安神茶的配料百合中的薯蓣皂苷元含量，从而进一步确定宁心安神茶的质量标准。有些中药是通过抑制机体对外源性脂类的吸收和胆固醇转化物胆酸在肝肠循环中减少胆酸重吸收的数量的机制阳氏血脂川，如中药草决明、何首乌、虎杖、大黄等;有些中药通过阻断胆汁酸的肝肠循环，减少胆汁酸重吸收的数量，既能使得胆汁酸及其衍生物排泄量增加，又能触发反馈机制使胆汁酸合成限速酶活性增加，促进胆固醇转化为胆汁酸，起到阳氏胆固醇的目的，像构祀、海带、甘薯、大豆、决明子等[4];大黄、香菇等中药是通过抑制脂类合成对血脂起到降低作用;荞麦、银杏、山碴、黄答等对血脂有抗过氧化的作用;月见草、泽泻、姜黄、南瓜等是通过提高高密度胆固醇，阳氏低密度月旨蛋白、极低密度脂蛋白胆固醇水平实现调血脂作用。1.实验材料及试剂1.1仪器仪器公司L-3535型高效液相色谱仪（20164460）北京普源精电科技有限公司蒸发光散射检测器北京普源精电科技有限公司XWK-Ⅲ型空气发生器天津市津分分析仪器制造有限公司AP-9950无油隔膜式真空泵(20164341)天津奥特赛恩斯仪器有限公司FA224型电子分析天平（万分之一）上海舜宇恒平科学仪器有限公司EX125ZH型电子分析天平(十万分之一）奥豪斯仪器有限公司B-5200DTDN型超声波清洗器宁波新芝生物科技股份有限公司DZKW-D-Z电热恒温水浴锅天津市滨海新区大港红杉实验设备厂DE-100g万能粉碎机红景天万能粉碎机SY-5000旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂XMTD电热恒温干燥箱余姚工业仪表二厂1.2药品与试剂药品来源槐花（批号21050）亳州市京皖中药饮片厂玫瑰（批号210901）亳州市京皖中药饮片厂百合（批号211001）北京本草方源（亳州）药业科技有限公司薯蓣皂苷元中国食品药品检定研究院乙腈、甲醇赛默飞世尔科技（中国）有限公司无水乙醇、正丁醇、石油醚（沸点60-90℃）、浓硫酸、盐酸分析纯超纯水、蒸馏水实验室自制2.实验方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18柱（5µm,250mm×4.6mm）;流速：1.0ml/min;流动相[5]：A乙腈-B0.1%醋酸水溶液（98:2,v/v）;柱温：30℃;进样量：20μL;ELSD漂移管温度:85℃;载气：N2。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品12mg，加无水乙醇定容至10ml容量瓶中制成每1ml含1.25mg的溶液，过0.45μm微孔滤膜，转移至西林瓶中，即得。2.2.2供试品溶液的制备精密量取宁心安神茶粉末10g，于250ml圆底烧瓶中，用3*150ml70％乙醇在超声波清洗器内分别超声提取3次，温度55℃，每次45min，趁热抽滤，合并滤液，测量pH值呈中性，转移至旋转蒸发仪内减压回收乙醇至干，残渣用3*10ml水分次溶解后转移至分液漏斗中，以3*40ml水饱和正丁醇溶液萃取3次至溶液基本无色REF_Ref7806\r\h[6]，合并正丁醇液，转移至旋转蒸发仪内减压回收溶剂至干，残渣用120ml6％稀硫酸在100℃水浴锅中回流水解5h，冷却至室温后用3*50ml石油醚萃取3次合并石油醚液并水洗至pH值呈中性，回收溶剂至干，残渣用乙腈溶解并定容至10ml容量瓶中，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，转移至西林瓶中，即得[7]。2.2.3阴性溶液的制备按照宁心安神药茶制备处方工艺加入除百合外的其他药茶配方,配制成阴性样品,精密量取阴性样品粉末10g，按“2.2.2”项下样品处理方法平行处理宁心安神药茶阴性样品,得阴性样品溶液[8]。2.3专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl,在2.2项色谱条件下测定,记录色谱图，结果见图1。图1专属性试验色谱图A对照品B供试品C阴性对照品由上图可见,在2.1项色谱条件下,薯蓣皂苷元峰形良好,保留时间10.475min,阴性对照色谱在此处无假阳性峰,根据实验结果可表明此方法专属性良好，其他组分对测定无干扰[9]。2.4线性关系考察精密吸取2.2.1项下所制备的薯蓣皂苷元对照品溶液（1.25mg/ml）2μl,3μl，4μl,5μl,8μl,10μl依次注入液相色谱仪，分别进样两次，记录色谱图，以两次峰面积平均值Y（mV.s）为纵坐标，薯蓣皂苷元进样量X(μg)为横坐标，照2.1项下的色谱条件进行回归分析，结果见表1。表1线性关系考察实验结果样品编号进样量（μg）峰面积1（mV.s）峰面积2（mV.s）平均值12.5111.158105.446108.30223.75241.194232.874237.03435375.082377.994376.53846.25544.943554.834549.8885101007.0371003.7921005.414612.51376.4871349.7011363.094回归方程为：y=125.79x-231.91相关系数r=0.9992结果可表明，薯蓣皂苷元在进样量2.5～12.5μg范围内与峰面积线性关系良好，结果见图2。图2薯蓣皂苷元标准曲线2.5方法学考察2.5.1精密度实验取2.2.1项下制备的同一对照品溶液进行实验，每次进样2μL，重复进样6次，测定薯蓣皂苷元峰面积值的RSD=2.27%。结果表明，该实验仪器的精密度良好，实验结果见表2。表2薯蓣皂苷元精密度实验结果进样次数123456峰面积100.526100.618103.022104.030105.44699.549平均值102.199RSD值（%）2.27%2.5.2稳定性实验取2.2.2项下所制备的同一供试品溶液进行实验，每次进样40μL，分别在0,2,4,6,8,12h各进一针，测得薯蓣皂苷元的峰面积值的RSD=2.25%（n=6）。结果表明供试品溶液在12h内稳定性较好，实验结果见表3[10]。表3稳定性实验结果放置时间（h）0246812峰面积1774.2881744.7741706.0561718.2291792.8231801.115平均值1756.214RSD值（%）2.25%2.5.3重复性试验取同一样品5份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，用自动进样器精密吸取40μL，进样，测定薯蓣皂苷元峰面积值，计算含量。测得6次薯蓣皂苷元平均含量为0.36mg/g,RSD值为2.24%（n=5）,表明该含量测定方法的重复性较好，实验结果见表4。表4薯蓣皂苷元含量测定重复性试验结果样品编号峰面积平均值平均含量(mg/g)RSD值11774.2881748.8920.362.24%21744.77431706.05641718.22951801.1152.5.4加样回收实验取已知薯蓣皂苷元含量的药茶粉末5份，各约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，再加入相当于样品中薯蓣皂苷元含量的80%，100%和120%的薯蓣皂苷元对照品溶液，按项下方法制备供试品溶液，分别注入液相色谱仪测定，计算回收率[11]。表5薯蓣皂苷元加样回收率测定结果（n=5）样品编号平均含量(%)RSD(%)10.04151.4720.05560.6330.06860.7740.05870.7650.04390.492.6样品测定结果取宁心安神药茶粉末10g按2.2.2项下方法操作制备供试品溶液，用自动进样器精密量取供试品液40μL，注入高效液相色谱仪，在2.1项下色谱条件下进行测定，记录薯蓣皂苷元色谱峰面积值，重复2次，取2次峰面积平均值，按外标法计算含量。高效液相色谱图见图4，含量测定结果见表6。图4供试品高效液相色谱图表6薯蓣皂苷元样品测定结果样品编号峰面积平均值含量（mg/g）11864.1471832.6310.3821801.115通过以上数据可知，宁心安神茶中含有的有效成分薯蓣皂苷元的含量约为0.38mg/g。3.分析与讨论3.1薯蓣皂苷元提取方法的确定薯蓣皂苷元是一种甾体皂苷元，可溶于常见有机溶剂和醋酸，且不溶于水，故本实验选择有机溶剂乙腈（色谱纯）作为最终提取物的溶剂。薯蓣皂苷元在一般植物体内一般与鼠李糖、葡萄糖结合成薯蓣皂苷，故本实验先提取总皂苷再采用酸水解的提取方法进行提取分离。在供试品溶液的制备中本实验曾考察水浴加热回流提取法和超声提取法2种提取方法，结果以55℃超声提取时测定的含量最高且提取方式最简单便捷。3.2流动相的选择在高效液相色谱法实验过程曾采用乙腈-水、甲醇-水按一定比例作为流动相进行测定,结果显示对照品峰形较差;后采取乙腈-0.1mol/L醋酸水溶液（98:2,v/v），结果显现各峰峰形较好,且出峰时间适宜,因此,将其作为本实验研究的流动相条件。3.3建立HPLC-ELSD法含量测定的意义由于薯蓣皂苷元系异螺旋甾烷的衍生物，分子结构中没有共轭结构，在紫外测定中仅有末端吸收REF_Ref7806\r\h[1]，HPLC-UV检测采用紫外末端测定薯蓣皂苷元的含量，该法受溶剂峰及其他物质的干扰较大，蒸发光散射检测器(D)能有效地克服溶剂峰强等方面的不足，且不依赖被检测物质的光学特性和官能团，在测定皂苷类物质时具有一定优势。因此本实验采用高效液相-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定宁心安神茶中薯蓣皂苷元的含量，该方法的优点为灵敏度高、干扰少且重现性好。3.4结果讨论目前文献中对于用HPLC-ELSD法测百合中薯蓣皂苷元的含量测定研究的报道较从本实验结果看，宁心安神茶中薯蓣皂苷元含量较低，结果并不完善，且由于实验周期短，实验仪器操作经验不足等因素导致实验数据较少，色谱图峰形不佳，但是可以确认宁心安神茶中百合确实含有有效成分薯蓣皂苷元。导致实验结果含量较低的因素可能是百合药材的品种差异，实验操作过程的不准确性，以及加样回收实验的缺失。因此目前可将宁心安神茶中薯蓣皂苷元的含量测定作为宁心安神茶的质量控制标准之一，但后续实验仍需完善改进。参考文献[1]史艳霞,周日宝,童巧珍等.HPLC法测定药用百合中薯蓣皂苷元的含量[J].湖南中医药大学学报,2009,29(02):37-39.[2]文艺,王宝艺,侯响玲等.HPLC-EL