中药制剂分析专家讲座

第十四章中药制剂分析2024/4/18中药制剂分析专家讲座第1页第一节概述中药制剂是依据药典、制剂规范和其它要求处方，将中药原料药品加工制成含有一定规格，能够直接用于防病、治病药品。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第2页注意：中药制剂必须是以中医药基础理论和用药标准为指导制成单方或复方制剂。中药成方制剂又称为中成药。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第3页一、中药制剂分析特点1.中药市场混乱同物异名同名异物贯众:30各种，止泺、贯节、贯渠、百头、虎卷、扁苻、贯来、贯中、渠母、贯钟、伯芹、药渠、黄钟、伯萍、乐藻、草鸱头、伯药、药藻、凤尾草、蕨薇菜根、贯仲、管仲、绵马贯仲

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第4页同物异名现象严重：重楼为百合科ParispolyphyllaSmith根茎,又名七叶一枝花、蚤休、草河车。拳参为蓼科PolygonumbistraL.根茎又名草河车。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第5页2.中药材质量不稳定性生长环境、采收季节及部位差异GAP

中药材生产质量管理规范麻黄东北→西北（-）麻黄碱含量↑（+）麻黄碱含量↓2024/4/18中药制剂分析专家讲座第6页丹参酮

11、12月份含量最高薄荷脑秋季叶变黄时含量最高益母草水苏碱营养期含量最高益母草碱营养期含量最低2024/4/18中药制剂分析专家讲座第7页不一样部位人参皂苷含量

重量比(%)总皂苷含量(%)周皮6.92.60韧皮46.63.04木质部46.50.312024/4/18中药制剂分析专家讲座第8页3.各种有效成份在中药中含量相差悬殊五倍子鞣质（＞70%）槐米芦丁（＞20%）长春花长春新碱（百万分之一）美登木美登木碱（千万分之一）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第9页4.成份复杂，而且大多数中药有效成份尚不十分清楚。

中药药效发挥是各种成份协同作用结果，所以应从整体上来控制中药质量。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第10页5.同一成份在不一样药材中药理作用不一样有效←→无效鞣质地榆（止血）其它（无药效）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第11页6.制剂工艺不一样，有效成份量也不一样例三黄泻心汤干浸膏有效成份与浓缩干燥方法关系(%)常压减压逆浸透成份浓缩浓缩喷雾大黄酸葡萄糖苷41.151.696.8小檗碱34.537.594.5黄连碱6.312.093.7黄岑苷77.477.698.52024/4/18中药制剂分析专家讲座第12页7.剂型繁多，辅料干扰大丸、散、片、锭、合、酒、酊、膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等2024/4/18中药制剂分析专家讲座第13页蜡丸蜂蜡蜜丸蜂蜜糊剂糯米粉、黄米粉曲剂发酵胶剂豆油、黄酒、冰糖

针对不一样剂型，采取对应方法进行分离纯化后测定2024/4/18中药制剂分析专家讲座第14页二、中药制剂分类与质量分析关键点中国药典（年版）一部（二十六种）丸剂胶剂膏药颗粒剂滴眼剂散剂合剂露剂糖浆剂软膏剂片剂酒剂茶剂滴丸剂注射剂锭剂酊剂搽剂胶囊剂滴鼻剂栓剂巴布膏剂橡胶膏剂气雾剂喷雾剂煎膏剂（膏滋）流浸膏剂与浸膏剂2024/4/18中药制剂分析专家讲座第15页(一)中药材及其炮制品中药材及其炮制品是中药制剂生产原料,是中药生产过程中质量确保首要步骤.中药材及其炮制品质量控制应严格执行国家药品标准和中药炮制规范.2024/4/18中药制剂分析专家讲座第16页(二)液体制剂用药材提取物制备液体制剂合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等（无植物组织与细胞，故无显微判别）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第17页1.合剂与口服液合剂系指药材用水或其它溶剂，采取适宜方法提取，经浓缩制成内服液体制剂。（单剂量合剂也可称为“口服液”）普通检验项目pH装量相对密度微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第18页2.酒剂与酊剂酒剂:药材用蒸馏酒提取制成澄清液体制剂酊剂:药品用要求浓度乙醇提取或溶解而制成澄清液体制剂普通检验项目含乙醇量（GC）甲醇量检验（GC）总固体装量微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第19页3.注射剂药材经提纯后制成供注入人体内溶液,乳状液粉末.注射液注射用无菌粉末注射用浓溶液2024/4/18中药制剂分析专家讲座第20页（三）半固体制剂软膏：药品、药材细粉、药材提取物与适量基质混合制成半固体外用制剂。惯用基质油脂性、水溶性乳剂型（乳膏剂）检验项目装量微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第21页

药材提取液浓缩液煎膏剂(膏滋)流浸膏剂与浸膏剂（半流体或固体）（无植物组织与细胞，故无显微判别）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第22页1.煎膏剂(膏滋)

药材用水煎煮、去渣浓缩后，加炼蜜或糖制成半流体制剂应无焦臭、异味，无糖结晶析出检验项目相对密度不溶物

装量微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第23页2.流浸膏剂与浸膏剂（半/固）药材用适宜溶剂提取，蒸去部分或全部溶剂，调整浓度至要求标准而制成制剂。1ml流浸膏——1g原药材1g浸膏——2~5g原药材检验项目装量微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第24页生产提取溶剂大多为水或稀醇检测时普通需经有机提取后分析（1）有效成份明确且有适当方法，测定有效成份含量；（2）有效成份不明或无定量方法，可测一定溶剂浸出物含量；（3）对于流浸膏，有测总固体量以控制其质量。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第25页（四）固体制剂

药材提取物、药材粉末加赋形剂、制备而成。丸剂、胶剂、颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、锭剂、胶剂、茶剂、栓剂（有植物组织与细胞，可做显微判别）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第26页1.丸剂

指药材细粉或药材提取物加适宜黏合剂或其它辅料制成球形或类球形制剂，分为蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、浓缩丸、蜡丸、微丸等。检验项目水分、重量差异(按丸或重量)装量差异(按一次剂量分装)溶散时限、微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第27页水分要求：大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸≤15.0%水蜜丸、浓缩水蜜丸≤12.0%水丸、糊丸、浓缩水丸≤9.0%装量差异：溶散时限：6丸，照崩解时限检验法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第28页重量差异:第一法（按丸服用）每次最高丸数或丸（＞1.5g）10份高低高低第二法（按重量服）每份10丸，10份高低2024/4/18中药制剂分析专家讲座第29页2.散剂

一个或各种药材混合制成粉末状制剂，分内服和外用散剂。检验项目均匀度水分装量差异微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第30页均匀度：取供试品适量置光滑纸上，平铺约5cm2，将其表面压平，在亮处观察，应展现均匀色泽，无花纹、色斑。水分：≤9.0%2024/4/18中药制剂分析专家讲座第31页3.颗粒剂

药材提取物与适宜辅料或药材细粉制成颗粒状制剂，分为可溶性颗粒剂、混悬性颗粒剂、泡腾性颗粒剂。检验项目粒度水分溶化性装量差异微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第32页粒度＞1号筛＜4号筛≤8%(左右轻轻往返3分钟)溶化装量差异单剂量包装同丸剂多剂量包装最低装量检验法(附录ⅫC)平均装量≥标示装量每个装量≥限量%

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第33页4.片剂

药材提取物加药材细粉或药材细粉与适宜辅料混匀压制而成园片状或异形片状制剂，分为浸膏片、半浸膏片和全粉片。检验项目重量差异崩解时限微生物程度原粉片≤30′浸膏片≤1h薄膜衣片≤1h2024/4/18中药制剂分析专家讲座第34页5.胶囊硬胶囊剂软胶囊剂肠溶胶囊剂检验项目水分重量差异崩解时限微生物程度2024/4/18中药制剂分析专家讲座第35页(五)气体制剂气雾剂喷雾剂2024/4/18中药制剂分析专家讲座第36页取样判别提取纯化检验含量测定三.中药及其制剂中待测成份提取分离与纯化方法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第37页（一）提取方法1.萃取法

利用溶质在两种互不相溶溶剂中溶解度不一样，使物质从一个溶剂转移到另一个溶剂中，将测定组分提取出来方法。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第38页（1）萃取溶剂选择正丁醇

——用于皂苷类醋酸乙酯

——用于黄酮类氯仿

——用于生物碱类乙醚、石油醚

——用于挥发油（2）水相pH选择酸性成份：比其pKa低1~2个pH单位碱性成份：比其pKa高1~2个pH单位2024/4/18中药制剂分析专家讲座第39页（3）仪器和提取次数分液漏斗判别——1次含量测定——3~4次（4）酒剂和酊剂——先挥去乙醇（5）预防和消除乳化2024/4/18中药制剂分析专家讲座第40页2.冷浸法

样品置溶剂里，室温下浸泡一段时间提取方法。适用范围适宜植物性粉末不宜动物性粉末特点适宜易溶出组分适宜遇热不稳定药品费时（8~24小时）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第41页亲脂性←→亲水性石油醚

苯氯仿

乙醚乙酸乙酯

丙酮乙醇

甲醇水2024/4/18中药制剂分析专家讲座第42页3.回流提取法

样品置有机溶剂中加热回流提取方法特点加紧溶出速度，省时适宜受热稳定药品适宜较难溶出组分仪器普通回流装置经过更换溶剂，使提取更完全2024/4/18中药制剂分析专家讲座第43页4.连续回流提取样品置有机溶剂中加热，蒸发溶剂经冷凝流回样品管提取方法。特点节约溶剂，提升提取效率适宜受热稳定药品费时仪器索氏提取器2024/4/18中药制剂分析专家讲座第44页5.水蒸气蒸馏适合用于具挥发性可随水蒸气蒸出组分测定。麻黄碱、槟榔碱、丹皮酚、挥发油2024/4/18中药制剂分析专家讲座第45页6.超声提取法利用超声波助溶作用进行提取超声波振荡器（超声波清洗器）简便、省时、提取率高原理：超声波在液体中以疏密相间形式向物体辐射，出现“空化”现象（气泡形成、产生及破裂现象），形成超出1000个大气压冲击力。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第46页7.超临界流体萃取（SFE法）超临界流体：当压力和温度超出气体临界点时所形成单一相态。是一个处于超临界点之上流体，是介于气体与液体之间一个物相，兼有气体与液体一些特征。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第47页SFE工艺流程2024/4/18中药制剂分析专家讲座第48页超临界流体萃取与化学法萃取相比有以下突出优点：（1）它含有与液体相同密度，因而含有与液体相同较强溶解能力；（2）溶质在流体中扩散系数与气体相同，含有传质快，提取时间短优点；（3）超临界流体表面张力为零，易渗透到样品中，带走测定组分；2024/4/18中药制剂分析专家讲座第49页（4）超临界流体在通常状态下为气体，萃取后溶剂可马上变成气体而逸出，易到达浓集目标；（5）CO2是一个不活泼气体,萃取过程不发生化学反应,且属于不燃性气体,无味、无臭、无毒，故安全性好；（6）CO2价格廉价，纯度高，轻易取得，且在生产过程中循环使用，从而降低成本；（7）该技术易与其它仪器联用实现自动化。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第50页（二）纯化方法1.萃取法利用药品与杂质溶解性能不一样进行分离。例：含生物碱样品H+H2O水层↓弃去氨水游离生物碱↓氯仿2024/4/18中药制剂分析专家讲座第51页2.柱色谱法（1）保留测定组分在柱上，洗去杂质，再用适当溶剂洗下组分（2）保留杂质于柱上惯用固定相硅胶氧化铝大孔吸附树脂2024/4/18中药制剂分析专家讲座第52页第二节中药及其制剂分析方法一、取样与样品保留中药检验，普通多采取预计取样，即将整批中药抽出一部分含有代表性供试样品进行分析、观察，得出规律性“预计”一个方法。取样代表性直接影响到检定结果正确性2024/4/18中药制剂分析专家讲座第53页1.供试品要含有一定代表性因为中药改进各不相同，有药材，有制剂，有液体、固体。即使同为固体，还有粉末状、颗粒状等形态上不一样，所以，取样时应分别对待，要考虑到取样科学性、真实性、代表性。中药材取样要符合均匀、合理标准。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第54页2.必须严格按照要求取样方法进行取样取样部位不妥，操作方法不合理，会影响所取得供试品代表性。普通从包装四角和中间五处取样，袋装可从中间直接插入，桶装可在桶中央取样，深度可达1/3~2/3处。数量最少够3次检验用量珍贵药可酌情取样。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第55页取得样品可装入清洁、干燥、具塞磨口容器中或密封塑料袋中，并标上品名、批号、数量、取样日期及取样人等.取样人员应熟悉各类中成药理化性质，对外观性状已发生改变者应分别取样，装入不一样容器内。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第56页（一）中药材取样法取样前，应注意品名、产地、规格等级及包件式样是否一致，检验包装完整性、清洁程度以及有没有水迹、霉变或其它物质污染等情况，详细统计。凡有异常情况包件，应单独检验。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第57页从同批药材包件中抽取检定用样品标准药材总包件数<100件，取样5件；100～1000件，按5％取样；>1000件，超出部分按1％取样；>5件，逐件取样；珍贵药材，不论包件多少均逐件取样。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第58页对破碎、粉末状或大小在1cm以下药材，可用采样器(探子)取样，每件最少在不一样部位抽取2～3份样品,包件少抽取总量应不少于试验用量3倍；2024/4/18中药制剂分析专家讲座第59页包件多，每一包件取样量要求普通药材100～500g；粉末状药材25g；珍贵药材5～10g；个体大药材，依据实际情况抽取代表性供试品。如药材个体较大时，可在包件不一样部位（包件大应从10cm以下深处）分别抽取。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第60页将所取样品混合拌匀，即为总样品。对个体较小药材，应摊成正方形，依对角线划“×”字，使分为四等分，取用对角两份（即“四分法”）；再如上操作，重复数次至最终剩下量足够供检验用，此为平均样品。平均样品量普通不得少于试验所需用3倍数，即1/3供试验室分析用，另1/3供复核用，其余1/3则为留样保留，保留期最少1年。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第61页（二）中药制剂取样法

各类中药制剂取样量最少够3次检测用量，珍贵药可酌情取样。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第62页粉状中药制剂（散或颗粒剂）普通取样100g，可从包装上中下三层或等间隔部位取样若干。混匀，然后按“四分法”从中取出所需供试量。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第63页液体中药制剂（口服液、酊剂、酒剂、糖浆）普通取样200ml，同时,须注意容器底部是否有沉渣，如有应彻底摇匀，均匀取样。固体中成药（丸剂、片剂）普通片剂取量200片，未成片前已制成颗粒可取100g。丸剂普通取10丸，2024/4/18中药制剂分析专家讲座第64页胶囊取样不得少于20个胶囊，倾出其中药品并仔细将附着在胶囊上药品刮下，合并，混匀称定空胶囊重量，由原来总重量减去，即为胶囊内药品重量，普通取样量100g。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第65页

注射液取样要经过两次，配制后在灌注、熔封、灭菌前进行一次取样，经灭菌后注射液须按原方法进行，分析检验合格后方可供药用。已封好安瓿取样量普通为200支。

其它剂型中药制剂可依据详细情况随意抽取一定数量，作为随机抽样。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第66页二、中药及其制剂判别试验判定有临床疗效已知成份黄连小檗碱（抗菌消炎）麻黄麻黄碱（支气管哮喘）乌头乌头碱（毒性）洋地黄强心苷（强心）延胡索延胡索乙素（镇痛）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第67页中药及其制剂定性判别指检定药材真实性方法性状判别显微判别理化判别2024/4/18中药制剂分析专家讲座第68页（一）

性状判别系指对中药外观形状、颜色、气味等特征进行描述。天南星科植物半夏干燥块茎性状描述为：本品呈类球形，有稍偏斜，直径1～1.5cm。表面白色或浅黄色，顶端有凹陷茎痕，周围密布麻点状根痕；下面钝圆，较光滑。质坚实，断面雪白，富粉性。无臭，味辛辣、麻舌而剌喉。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第69页（二）显微判别

1.显微组织判别

显微组织指用显微镜观察药材切片、粉末、解离组织或表面制片或中成药组织、细胞、内含物等特征。一样取样要求代表性，中成药应依据不一样剂型适当处理后制片，药典中有不少中成药判别都是采取粉末显微判别方法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第70页2.显微化学反应判别显微化学反应利用一些中药中所含有物质理化性质进行定性判别。可测定其理化常数和观察理化性质，也可选择适当化学反应来检验。如中药中有香豆素类成份，可用颜色反应或荧光反应进行分析。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第71页丸剂、片剂、胶囊剂、散剂快速，简便，覆盖面大选择标准：1、应选有专属性特征进行判别2、多起源药材应选择共有特征进行判别2024/4/18中药制剂分析专家讲座第72页安宫牛黄丸1、水牛角浓缩粉2、麝香3、珍珠4、朱砂5、雄黄6、黄连7、栀子8、郁金9、黄芩12134567892024/4/18中药制剂分析专家讲座第73页（三）理化判别用化学或物理方法，对药材中所含一些化学成份进行判别试验。

1.显微化学反应

2.荧光法判别，将药材（包含断面、浸出物等）或经酸、碱处理后，置紫外光灯下约10cm处观察所产生荧光。

3.微量升华法判别,适合对一些会有升华性成份药材及制剂判别，如薄荷升华物为无色针晶簇（薄荷醇）

4.颜色反应及沉淀反应法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第74页抗干扰能力差组分试剂显色、↓、↑、荧光例

二妙丸中苍术判别苍术酮苍术炔2024/4/18中药制剂分析专家讲座第75页5.色谱判别TLC法——应用最多（Rf、颜色、荧光）GC法

——适合用于含挥发性成份药品

HPLC法——常与含量测定同时进行2024/4/18中药制剂分析专家讲座第76页阴、阳对照法阳性对照：将要判别药材按制剂工艺处理，再按判别方法提取溶液。

阴性对照：把制剂中要判别药材除去，用剩下各味药按制剂工艺处理，再按判别方法提取溶液。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第77页例

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×××

阴样阳对品对2024/4/18中药制剂分析专家讲座第78页例大补阴丸黄柏TLC法判别

样品对照药材小檗碱2024/4/18中药制剂分析专家讲座第79页薄层板选择硅胶G板（可加0.3%~0.5%CMC-Na）氧化铝板——惯用于生物碱类药品聚酰胺板——惯用于黄酮类及酚类药品维生素板——惯用于氨基酸类药品2024/4/18中药制剂分析专家讲座第80页三、中药及其制剂杂质检验中药及其制剂普通可允许少许杂质存在，而中药注射剂则不允许或只允许微量杂质存在，但均要做限量检验，以控制其质量。除杂质检验外，与剂型相关普通项目检验也属此项内容。另外，还有一些普通质量检验项目和必要理化常数测定等均为检验范围。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第81页杂质检验：杂质限量检验、灰分测定、酸碱度检验、氯化物检验、特殊杂质与参伪物检验等。普通理化检验项目：浸出物及总固体测定、相对密度测定、旋光度测定、折光率测定、水分测定、干燥失重测定、乙醇含量测定等。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第82页（一）水分测定法1、烘干法适合用于不含或少含挥发油成份药品

2-5g供试品－置于扁形称量瓶中－在100至105摄氏度干燥5h－置于干燥器中放置30min－称重－再干燥1h－连续两次称重差异不超出5mg（而在常压恒温干燥法中是干燥至恒重）－依据失重计算含水百分率2024/4/18中药制剂分析专家讲座第83页2、甲苯法水与甲苯在69.3摄氏度共沸蒸出，搜集馏出液，待分层后由刻度管测出所含水量适合用于含挥发性成份样品水分测定2024/4/18中药制剂分析专家讲座第84页3、减压干燥法适合用于含挥发性成份珍贵药品减压干燥器相对于常压，减压条件下(<20mmHg)干燥温度更低，干燥时间更短。更适合用于熔点低，受热不稳定药品。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第85页4、气相色谱法无水乙醇浸提，抽提出样品中水分以纯水作为标准对照进样量：5ul载体：直径为0.25－0.18mm二乙烯苯－乙基乙烯苯型高分子多孔小球柱温：140－150摄氏度热导监测器外标法计算2024/4/18中药制剂分析专家讲座第86页水分检验法小结以药品性质分：不含或少含挥发性成份－烘干法含较多挥发性成份珍贵药品－减压干燥法普通药品－甲苯法不论是否含挥发性成份－气相色谱法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第87页（二）总灰分和酸不溶性成份检验生理灰分＋外来无机杂质生理灰分:生药本身经灰化后残留不挥发性无机盐一些中药生理灰分差异较大，总灰分不能说明外来杂质量，所以要测酸不溶性灰分。

1.总灰分2024/4/18中药制剂分析专家讲座第88页2.酸不溶性灰分测定法生理灰分－溶于盐酸碳酸盐外来杂质－不溶于盐酸硅酸盐方法：总灰分＋10ml稀盐酸－水浴加热10min－无灰滤纸滤过－将残渣和滤纸一起转入坩锅－炭化，炙灼至恒重－得酸不溶性灰分若酸不溶性灰分过高说明泥砂含量高例：海金沙酸不溶性灰分不得超出15%2024/4/18中药制剂分析专家讲座第89页（三）重金属检验

因为环境污染和使用农药原因，轻易在药材中引入重金属杂质。详细参考教材“药品杂质检验”一章

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第90页（四）砷盐检验

中药制剂原料药材因为受除草剂、杀虫剂和化学肥料影响而引入检验方法：1、古蔡法Ch.P()书上P.362、二乙基二硫代氨基甲酸银法Ch.P()Ag(DDC)法3、原子吸收分光光度法（专属、灵敏）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第91页检验前样品有机破坏碱融法－加碱后炽灼破坏，砷形成硝酸盐，可防止砷挥发损失湿法破坏－含糖量高制剂

硝酸镁乙醇溶液破坏（日本药局方）－中药制剂

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第92页（五）残留农药检验

药用植物在栽培过程中为降低虫害

，常需要喷洒农药,土壤中残余农药也可能引入药材中

接触农药不明样品－测定总有机氯量和总有机磷量

使用过已知农药样品－采取气相色谱法检验相关农药

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第93页总氯量测定

取供试品细粉适量－加约10倍量乙腈：水

(65:35)－高速搅拌后过滤－取滤液用石油醚(30℃~60℃)萃取出农药－浓缩萃取液加于不含氯化物滤纸上－待溶剂挥干后－照氧瓶燃烧法燃烧破坏－取吸收液－按硫氰酸铵呈色法测定氯量

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第94页供试品用乙腈-水提取，植物药中纤维、蛋白质、糖、淀粉、脂肪等不能被提出。农药为脂溶性,再用石油醚萃取出农药,极性和中等极性有机成份可深入除去。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第95页

氧瓶燃烧破坏后有机氯转化为无机氯,并吸收入水中。

取吸收液,加入硫氰酸汞试液,可定量生难解离氯化汞，并置换出相当量硫氰酸根离子,再加入硫酸铁铵溶液,生成红色氰酸铁配位离子，于460nm波优点有最大吸收,吸收度与氯离子量呈线性关系,故可用比色法测定含氯量。2Cl-+Hg(SCN)2

一一→HgC12+2SCN-6SCN-+Fe3+一一→[Fe(SCN)6]3-2024/4/18中药制剂分析专家讲座第96页2.总磷量测定

步骤：

取供试品细粉适量－加约10倍量乙腈：水

(65:35)－高速搅拌后过滤－取滤液用石油醚(30℃~60℃)萃取－过弗罗里(Florisil)硅土柱－用乙醚-石油醚(30℃~60℃)混合溶液洗脱－搜集洗脱液,浓缩后－用氧瓶燃烧法破坏处理－再用磷钼酸比色法测定。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第97页原理：

磷酸盐与钼酸铵试液、硫酸试液反应生成磷钼酸,再与氨基萘磺酸试液反应,被还原为钼蓝,在820nm处测定吸收度,同法制备标准曲线,按标准曲线法测定含量。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第98页气相色谱法

主要用于已知农药样品测定分离效能高,含有高灵敏度专属检测器,是对残留农药进行定性和定量分析最惯用方法。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第99页

先用非极性有机溶剂萃取出残留农药,普通需再过硅藻土或弗罗里硅土柱深入纯化。

固定液：硅氧烷类,如OV-17,OV-21,SE30等载气：氮气测定有机氯：电子捕捉检测器(ECD）测定有机磷：火焰光度检测器(FPD)火焰光度检测器是测定硫、磷化合物专用检测器。当含磷化合物在富氢火焰中燃烧时,产生HPO将发射526nm特征光,可专属性地检测磷。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第100页

比如：测定中药中有机磷农药

气相色谱条件:柱长2m,内径3mm,担体为ChromosorbW/AW-DWCS,涂布2.5%SE-30和3%QF-1混合固定液,火焰光度检测器检测,进样口温度220℃,柱温180℃,载气为氮气。对照品溶液制备:精密称取待测农药对照品适量,加苯或氯仿定量稀释成每1ml含1mg溶液,作为贮备液。临用前取贮备液适量,加二氯甲烷稀释成每lml含1ug溶液,作为对照品溶液。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第101页供试品溶液制备:精密称取中药细粉1Og,置具塞锥形瓶中,加中性氧化铝0.5g,精密加入二氯甲烷2Oml,振摇30min，

滤过,取续滤液进样。

若农药残留量过低,可取滤液浓缩至一定体积后取样。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第102页中药中有机氯类农药残留量测定方法方法:

采取在线法提取,硫酸磺化后直接测定法;选取SE－54和SPB-1701毛细管柱,经过柱程序升温伎俩,对十种农药进行分离测定。

结果:SPB-1071分离效果优于SE-54柱;十种农药在1ng/m~100ng/m1浓度范围内与峰值呈良好线性关系,其检测限范围为0.5pg-1.5pg.

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第103页

依据实际测定结果,提议中药材和中成药中总六六六、总滴滴涕、五氯硝基苯和艾氏剂允许限量分别为0.1、0.1、0.1、0.02mg/kg.本方法快速、简便、准确、含有良好通用性。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第104页

中药材农药污染现实状况

污染路径：直接污染：种植过程中农药直接喷洒间接污染：环境（水源、大气、土壤等）对药材污染采收、加工、储备、运输过程中污染2024/4/18中药制剂分析专家讲座第105页污染特点：普遍性种植药材中含量高，野生药材中痕量检出同一地域同种药材，同种药材不一样部位残留量有较大差异2024/4/18中药制剂分析专家讲座第106页对应办法和对策：制订标准抗虫药材品种选育生物防治及生物农药使用科学地使用农药采收、加工、包装质量管理药材种植环境选择大力发展有机中药材生产2024/4/18中药制剂分析专家讲座第107页四、中药及其制剂含量测定制剂中所选被测成份主要是：化学结构已经明确有效成份；能大致明确某类主要活性物质；能反应某味主要药品特征指标性成份；剧毒性成份或珍贵药材成份。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第108页惯用方法：高效液相色谱法；气相色谱法；薄层色谱法；紫外可见分光光度法；化学分析法重量分析法容量分析法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第109页（一）高效液相色谱法

内标法外标法药品分析大多采取外标法2024/4/18中药制剂分析专家讲座第110页

1.系统适应性试验包含色谱柱理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中分离度和重复性更具实用意义。

系统适应性试验即用各品种项下要求对照品和条件对色谱系统进行试验，应符合要求。不然可对色谱分离条件作适当调整。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第111页（1）色谱柱理论板数（n）考查柱效假如测得理论板数低于各品种项下要求最小理论板数，应改变色谱柱一些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填优劣等），使理论板数到达要求。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第112页

（2）分离度（R）考查分离效果在要求条件下，注入对照液或供试液，统计色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰分离度。除另有要求，分离度应大于1.5。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第113页（3）重复性考查测量精密度在要求条件下，取一定量对照液，连续进样3～5次，除另有要求外，其峰面积测量值相对标准偏差（RSD）应小于2.0％。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第114页（4）拖尾因子（T）

考查色谱峰对称性，确保测量准确度。尤其是采取峰高法测量时，应检验待测峰T是否符合要求。除另有要求外，T应在0.95～1.05之间。式中:W0.05h为0.05峰高处峰宽；d1为峰极大至峰前沿之间距离。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第115页

2.对照品溶液制备

3.供试品溶液制备

4.测定法

将上述两种溶液分别注入色谱仪，统计色谱图，按下式计算被测成份含量。（1）求出供试液中被测成份浓度C供

（2）求出药品中被测成份含量C供＝C对A对A供C供X稀释倍数含量（W/W）＝取样量2024/4/18中药制剂分析专家讲座第116页应用实例

1.牛黄解毒片中黄芩含量测定本品由牛黄、大黄、黄芩、冰片、石膏等八味中药制成。中国药典以黄芩苷为指标，采取HPLC测定其中黄芩含量。

（1）色谱条件与系统适应性试验

固定相：用十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2），流速1ml/min；检测器：紫外检测器，检测波长为315nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第117页（2）对照品溶液制备

精密称取在60℃减压干燥4小时黄芩苷对照品适量，以甲醇溶解配成每1ml中含31.2µg对照品溶液。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第118页

（3）供试品溶液制备

取牛黄解毒片20片，剥去糖衣，精密称定（6.254g），研细，精密称取1.045g，加70%乙醇30ml，超声处理20分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少许70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤于同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。

（4）测定法分别精密吸收对照品溶液与供试品溶液各10µl进样，测得对照品及供试品中黄芩苷峰面积分别为A供＝4340441，A对＝3945856。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第119页▲求算药品中黄芩苷含量黄芩苷（mg/片）=C供×稀释倍数×平均片重取样量

=34.3（µg/ml）×10×50ml×312.7mg/片1045mg

=0.51

-32024/4/18中药制剂分析专家讲座第120页

2.藿香正气水中厚朴酚与和厚朴酚总量测定本品由苍术、陈皮、厚朴（姜制）、白芷等十味中药制成液体制剂，每支装10ml（标示装量）。其中厚朴为要药之一，故《中国药典》采取HPLC，以厚朴酚及和厚朴酚总量为指标，控制厚朴含量。

（1）色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈-水（50:20:40）为流动相；检测波长294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于5000。

（2）对照品溶液制备

取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含厚朴酚0.2mg、和厚朴酚0.1mg溶液，摇匀，即得。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第121页

（3）供试品溶液制备

精密量取装量项下本品5ml，加盐酸2滴，用氯仿振摇提取3次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇溶解并精密稀释至10ml，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

（4）测定法

精密吸收上述三种溶液各10μl，分别注入液相色谱仪测定，依据对照品峰面积（AR厚AR和）以及供试品中被测成份峰面积（AS厚AS和）计算厚朴含量。本品每支含厚朴以厚朴酚（C18H18O2

）及和厚朴酚（C18H18O2）总量计，不得少于5.8mg。

2.和厚朴酚3.厚朴酚5.6.其它成份峰混合对照品.和厚朴酚厚朴酚样品2024/4/18中药制剂分析专家讲座第122页（二）气相色谱法内标法惯用于药品分析。外标法少用，因为GC进样量小，造成误差较大。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第123页

1.色谱条件和系统适应性试验

（1）色谱条件

主要包含载气、色谱柱、检测器、固定液（相）测试温度、进样量、载体等。其中检测器种类、固定液品种、以及色谱柱材质不得改变，其它如柱子内径和长度、载体种类和粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器灵敏度等可适当改变，以适应系统适用性试验要求。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第124页①载气：普通为N2，还可用H2、He。②色谱柱：玻璃柱和不锈钢柱。③检测器:

氢火焰离子检测器（氢焰检测器FID）适合有机物检测，灵敏度高，应用广泛。热导检测器（TCD）无机物、有机物均可检测，灵敏度较低，用于水分测定。电子捕捉检测器（ECD） 适合含卤素、硫、氮等电负性强元素化合物测定。用于农残测定。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第125页④柱填料：吸附剂：硅胶、氧化铝等。较少用。高分子多孔小球：惯用二乙烯苯乙基乙烯苯型。

比如甲（乙）醇量、水分测定。涂渍固定液载体（多用）：惯用经酸洗并硅烷化硅藻土⑤固定液：惯用甲基聚硅氧烷（如SE-30、OV-17等）、聚乙二醇（如PEG-20等），普通涂布浓度为5～25％。（2）系统适应性试验（同HPLC）2024/4/18中药制剂分析专家讲座第126页2.内标法（同乙醇量测定法）（1）标准液制备（2）供试液制备（3）校正因子（f）测定内标法特有参数。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第127页

应用实例

十滴水软胶囊中樟脑含量测定本品由樟脑、干姜、大黄、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中药制成，樟脑是其主成份之一，具升华性，故采取气相色谱法，以樟脑为对照品，薄荷脑为内标物，对其进行含量测定。

1.色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇（PEG）-20M为固定相，涂布浓度为10%，柱温150℃。理论塔板数按樟脑峰计算应不低于，樟脑峰与内标物质峰分离度应大于2。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第128页

2.校正因子测定精密称取樟脑对照品（r）50mg，置10ml量瓶中，精密加入薄荷脑内标物质(s)50mg，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取1～2μl，注入气相色谱仪，Ar=211948、As=215835，计算校正因子（保留四位有效数字）。

3.测定法取装量差异项下内容物，混匀，取0.8g，精密称定（0.7956g），置具塞试管中，用无水乙醇提取5次，每次4ml，分取乙醇提取液，合并，转移至25ml量瓶中，精密加入薄荷脑125mg，使溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(i＋s)。精密量取1～2μl，注入气相色谱仪测定，Ai＝108685、As＝123544，计算即得（保留两位有效数字)。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第129页（三）薄层色谱扫描法指用一定波长光照射在经薄层层析后薄层板上,对有吸收或能产生荧光或能猝灭荧光斑点进行扫描,用反射法或透射法测定光强度,以检测层析谱一个方法。本法自60年代末发展以来,迄今已成为含有灵敏、快速、分离效能高、重现性好等特点新兴仪器分析法,在中药及中成药提取分离、定性判别、含量

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第130页TLC技术应用近年来发展迅猛,仪器设备,技术水平不停提升,科学化,当代化,自动化及规范化正在不停普及。《中国药典中药薄层色谱彩色图集》已成为从事中药检验工作TLC判定主要工具书《中药薄层色谱判别》等许多相关TLC资料给我们提供了必不可少参考资料2024/4/18中药制剂分析专家讲座第131页薄层色谱扫描法系统适应性试验检测灵敏度分离度R=2(d1-d2)/(W1+W2)※R≥1.0重复性，相对标准偏差RSD≤3.0％显色后测定，RSD≤5.0％

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第132页本法为香豆素类成份惯用测定方法之一，样品经薄层分离后，于荧光灯下定位，利用香豆素类成份含有紫外吸收或能产生荧光特征，不经显色，直接进行扫描测定。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第133页健脾丸中熊果酸含量测定[含量测定]取小蜜丸或重量差异项下大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g，精密称定，加水30ml，放置使溶散，滤过，残渣用水30ml洗涤，在室温干燥至呈松软粉末状或低温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30~60℃）浸泡两次，每次10ml（浸泡约2分钟），倾去石油醚，残渣加适量三氯甲烷-无水乙醇（2:3）混合液使溶解，转移至2ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第134页另取熊果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，精密吸收供试品溶液4ul与6ul，对照品溶液2ul与4ul，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清楚，取出，在薄层板上覆盖一样大小玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，波长：λS=540nm，λR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）计，小蜜丸每1g不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第135页第三节中药中药指纹图谱研究新技术中药材或中药制剂经适当处理后，采取一定分析伎俩，得到能够标定该中药材或中药制剂特征共有峰图谱。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第136页20世纪70年代及80年代，出现薄层扫描仪，日本和我国部分学者用薄层扫描仪得到复方成药扫描图作为色谱指纹图尝试应用于药材及成药分析。

20世纪80年代及90年代，高效液相技术得到发展，同时植物药中化学成份分离判定、活性成份不停说明，高效液相广泛应用于定性、定量分析。西方普遍采取高效液相色谱法对植物药中已知及未知组分进行控制，并形成对应规范。当前高效液相色谱法已成为当前研究指纹图谱主要伎俩。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第137页一.色谱指纹图谱定义及基本属性

1、色谱指纹图谱定义及其特点中药指纹图谱判别借用了法医学指纹判定概念。

利用当代分析技术对中药化学信息以图形（图像）方式进行表征并加以描述。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第138页当代分析技术：光谱波谱色谱核磁共振X射线衍射各种技术联用。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第139页中药化学信息：植物药（包含起源于植物中药材）提取物（包含中药汤药）与化学合成药最根本区分是，它（即使是单味药材）是各种化学成份混合体。这种各种化学成份综合体组成了“中药化学信息”。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第140页因为中药疗效由各种成份协同作用或“相克作用”，中药中化学信息有一定含糊性。只有部分化学信息（包含已知活性成份、已知非活性成份、一部分未知成份）可表征于指纹图谱中。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第141页表征和描述：“表征”是将中药化学信息经过色谱图（液相色谱图、气相色谱图或薄层色谱图）等方式进行表示；“描述”是对指纹图谱经过计算、分析、比较、评价等过程，以技术参数、指纹特征等加以说明。中药指纹图谱研究须经过制备、分析、比较、评价和校验等过程。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第142页分析色谱指纹图谱要求“准确识别”，不是“精密测量”；比较供试品与对照品色谱指纹图谱要求“相同”，而不是“相同”；评价色谱比较结果，是依据色谱指纹图谱含糊属性，着眼于宏观规律性特征分析，即着重识别完整色谱“图貌”，而不是求索细枝末节。分析比较结果，是对供试品与对照品之间差异或一致性作出评价。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第143页特点经过指纹图谱特异性，有效判别样品真伪、产地有效控制样品质量.2024/4/18中药制剂分析专家讲座第144页（1）整体性：将指纹图谱作为一个整体来分析和比较它综合特征以到达判别目标。（2）含糊性：强调分析、比较指纹图谱相同性，而不是完全相同。它是一个综合、量化色谱判别伎俩。2.色谱指纹图谱基本属性2024/4/18中药制剂分析专家讲座第145页色谱指纹图谱在中药质量评价中能够尽可能多地反应中药全貌。不需要清楚每一个组分化学结构；不需要对每一个组分都进行定量；只要求不一样批号同一个药品指纹图谱保持一致。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第146页3.指纹图谱研究目标与意义

（1）对中药质量控制补充和提升。（2）控制中间体、成品一致性，降低批间差异2024/4/18中药制剂分析专家讲座第147页中药指纹图谱建立是全方面反应中药内在化学成份种类与数量，进而反应中药质量.现阶段中药有效成份绝大多数没有明确，采取中药指纹图谱方式，将有效地表征中药质量。指纹图谱已为国际社会所认可，有利于中药及产品进入国际市场。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第148页

4.建立中药指纹图谱标准以系统化学成份和药理学研究为依靠，应表达系统性、特征性、重现性三个基本标准。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第149页“系统性”是指指纹图谱所反应化学成份应包含中药有效部位所含大部分成份种类，或指标成份全部.“特征性“是指指纹图谱中反应化学成份信息（详细表现为保留时间或位移值）是含有高度选择性，这些信息综合结果，将能特征地域分中药真伪与优劣，成为中药本身化学条码。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第150页

“重现性”是指所建立指纹图谱，在要求方法与条件下，不一样操作者和不一样试验室应能作出相同指纹图谱，其误差应在允许范围内，这么才能够确保指纹图谱使用含有通用性和实用性，也是作为标准方法所必备特征之一。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第151页从整体上评价中药内在质量中药指纹图谱建立标准尽可能多覆盖全貌特征显著，专属性强，重现性好方便操作与应用2024/4/18中药制剂分析专家讲座第152页二.中药指纹图谱类型1.按测定伎俩分类中药化学(成份)指纹图谱中药生物指纹图谱2.按应用对象分类中药材指纹图谱中药原药指纹图谱中间产物指纹图谱中药制剂指纹图谱2024/4/18中药制剂分析专家讲座第153页三.中药色谱指纹图谱研究技术关键指纹图谱技术在植物药领域已应用十余年，研究方法与研究思绪相对成熟，已形成共识，普遍采取HPLC、TLC、GC或NIR（近红外技术），对植物药有效组分进行全成份质量控制，即指纹图谱技术2024/4/18中药制剂分析专家讲座第154页(一)研究思绪与内容1.研究对象确实定植物药或中药成份可分为：蛋白质、脂类、糖及衍生物、有机酸、酚类、鞣质、醌类、内酯、香豆精、黄酮类、皂苷类、生物碱类、甾体类、萜类、挥发油等。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第155页当研究某个注射剂品种指纹图谱时，首先必须调研相关文件、新药申报资料（质量部分和工艺部分）及其它研究结果，尽可能详尽地了解药材、中间体及成品中所含水量成份种类及其理化性质，经综合分析后找出成品中药效成妥或有效成份，作为成品或中间体指纹图谱研究对象，即分析检测目标。如：黄芪含黄酮、皂苷及多糖；黄芪多糖注射液是以黄芪中多糖为原料，所以对黄芪多糖注射液进行指纹图谱研究时应以多糖作为研究对象；研究其中间体时也应以多糖为研究对象；研究原药材指纹图谱时应把黄酮、皂苷及多糖作为研究对象。复方应以君药、臣药中有效成份作为主要研究对象，佐使药中成份可采取其它指纹图谱方法进行辅助、补充研究。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第156页2.研究内容依据国家药品监督管理局下发《中药注射剂指纹图谱研究技术要求》（暂行）要求，主要研究内容有原药材、中间体、注射剂指纹图谱，包括样品名称、起源、制备、测定方法、指纹图谱及技术参数等研究项。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第157页二.研究方案

主要采取色谱法。各种色谱法是互补，应依据研究对象实际需要和可能以及按照不一样色谱技术特点和优势而定，目标是确保方法重现性和确能反应产品质量主要化学成份。一个中药制剂指纹图谱应能够同时采取两种或更各种方法进行研究。指纹图谱研究方法应依据研究对象物理化学性质来选择，大多数方法可采取HPLC法。通常挥发油类采取GC。一些难以检测或采取上述方法得不到较理想分离效果时，可采取TLC或CE。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第158页1.原药材、中间体及注射剂样品选择与搜集中药是天然产物，中药活性成份都是次生代谢产物，本身有它内在不稳定性。我国药材品种多、产地广、分散度大，造成了中药材基源复杂，形成许多同名异物品种，这些品种在传统中医临床中并未加以细分，其中多数已收入《中华人民共和国药典》。对于《中国药典》收载品种，从中医角度均可入药，这种多基源药材增加了色谱指纹图谱研究难度。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第159页近年因为药材量需求增大，药材资源破坏严重，药材内在质量下降，炮制加工粗放造成有效成份流失，人为原因造成了药材质量不稳定，不利于色谱指纹图谱研究与应用。我国药材GAP工程已起步，将有利于中药注射剂及其它制剂质量控制。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第160页已生产注射剂，因生产中药材起源基本确定，在补充其指纹图谱时，原药材样品搜集应遵照以下标准：①药材尽可能固定产地（如道地药材）、采收期、炮制方法；②对已往生产使用过药材应结合临床使用情况选择搜集样品，对工艺稳定、疗效恒定、临床使用中极少出现异常医疗事故药材批次应重点选择；③另外还应搜集不一样产地、不一样采收期药材，这些药材即使含量高低不一样，组成百分比各异，但当正常使用药材一旦出现偏差时，可经过这些批次药材实施合理“勾兑”。经过对指纹图谱研究，能够对“勾兑”过程进行指导。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第161页中间体、注射剂因其生产工艺已经恒定，样品搜集标准也应重点选择工艺稳定、疗效恒定、临床使用中极少出现医疗事故批次。依据《中药注射剂指纹图谱研究技术要求》（暂行）之要求，原药材、中间体及注射剂样品最少应搜集10批次。不能够同一批次样品分散成数个批次，充当样品。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第162页2.原药材、中间体及注射剂预处理在指纹图谱研究过程中，供试品（原药材、中间体及注射剂）溶液制备过程不是关键性技术问题，但操作烦琐。原药材供试品制备最为复杂。原药材所含各种组分混杂在一起，样品制备时，应依据所含成份和物理化学性质，经过萃取、沉淀、吸附或经过化学反应，分离富集样品。

2024/4/18中药制剂分析专家讲座第163页如：黄芪药材中黄酮类成份经过碱水萃取，皂苷类成份经过大孔树脂吸附；苦参中总生物碱经过阳离子树脂吸附与解吸附。中间体是原药材经过了多步处理而得，已经滤过了大部分成份，只保留一小部分有效组分，样品制备时，可针对有效成份处理，并参考原药材制备方法。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第164页样品富集后，尚需过氧化铝预柱、C18预柱、硅胶预柱、聚酰胺预柱等，以除去色素等杂质，防止干扰或对色谱柱损耗。注射液中除少数品种添加助溶剂外，所含化学成份均含有很好水溶解性能，面且硕士产工艺时考虑到色素、生物大分子等原因，生产过程中已经过微孔滤膜、脱色等操作，所以，样品无需特殊处理，可直接分析检测。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第165页3.参考物制备依据样品化学成份性质选择2024/4/18中药制剂分析专家讲座第166页4研究方法选择色谱条件选择指纹图谱色谱条件是研究检测方法过程中最主要、关键性内容。我们以HPLC法为例，阐述各影响原因及处理路径。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第167页流动相可用作流动相溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、正已烷等。反相高效液相，以乙腈-水系统比较适合梯度洗脱。醇-水系统因为热力学和可压缩性原因，在梯度洗脱时易造成基线漂移。在流动相中可加入磷酸、乙酸、三乙胺、二乙胺、正丁基溴化胺、十二烷基磺酸钠等各种改性剂，或采取磷酸-磷酸氢二钠/磷酸二氢钠、乙酸-乙酸钠缓冲溶液，以到达改进色谱峰分离程度及改进峰形目标。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第168页样品中如有部分成份极性较小，在流动相中可加入少许异丙醇、四氢呋喃、氯仿、环糊精等，增加流动相对样品溶解性，首先改进峰形，另首先可快速洗脱。对黄酮类、酚酸类成份可参考选择乙膊-水-酸系统流动相；对皂苷类成份可参考选择乙腈-水系统流动相，生物碱类成份可参考选择乙腈-水-三乙胺等系统流动相。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第169页

检测波长选择有以下方法：①参考样品全波长紫外线吸收图，选择吸收峰值；②参考对照品全波长紫外线吸收图，选择吸收峰值；③依据君、臣、佐、使组方理论，在尽可能兼顾佐使药同时，主要选择君、臣药中有效成妥及收峰值。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第170页一个检测波长下色谱图如不能到达控制质量目标，可建立多个检测波长下指纹图谱。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第171页

柱温当色谱图某个色谱峰因溶解度差而峰形较“钝”时，可适当提升柱温（30~50℃）；如样品中组分在常温或高温下不稳定，易发生水解、分解等改变时，可降低柱温。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第172页色谱柱不一样厂家色谱柱因为采取填料不一样，柱效相差较大。即使流动相条件一致，用不一样填料色谱柱重复测试时，不但分离效果大不相同，而且保留时间迁移程度也比较显著。2024/4/18中药制剂分析专家讲座第173页因为中药样品复杂性，首先所含成份极性高低不等，另首先部分成份结构相同，极性相差不大，分离比较困难，所以选择色谱柱时应以主要成份得到分离为目标，柱效不易过高。同时要考虑填料稳定性和载样量。