HPLC应用与维护课件

HPLC应用条件与维护技术魏少勇paul@广州菲罗门科学仪器有限公司

GuangzhouFLMScientificInstrumentCo.,Ltd目录1、液相色谱柱注意要点2、如何延长色谱柱寿命3、如何保护色谱柱广州菲罗门科学仪器有限公司

GuangzhouFLMScientificInstrumentCo.,Ltd液相色谱柱注意要点新柱子的接收确认色谱柱是您订购的吗？规格是否正确？相正确与否？在标准条件下使用标准品测试色谱柱的性能Phenomenex

每一根色谱柱都是经过单独测试的管路和接头色谱性能取决于整个系统而不仅仅是色谱柱本身管路和接头会影响系统的死体积系统死体积会导致：峰展宽峰变形柱效降低灵敏度下降

液相色谱柱注意要点

管路选择管路类型和内径泵到进样器较大内径管路（0.010“)比较合适进样器到色谱柱最小化管路内径典型使用的是（0.007“)和（0.005“)内径色谱柱到检测器最小化管路内径较大内径会减小已获得的分离度典型使用的是（0.007“)和（0.005“)内径检测器到废液口较大内径比较合适（>=0.010“)液相色谱柱注意要点

接头不是所有色谱柱的端尾接头都是一样的使用不同种类/形状的卡套不同长度的活塞（0.080“）或（0.130“)活塞长度非常重要管路必须与色谱柱的塞板齐平如果管路与色谱柱的塞板不能齐平会导致死体积的增加或流动相的泄漏手紧接头液相色谱柱注意要点液相色谱柱注意要点流动相使用新的色谱柱时,至少需用10-30柱体积HPLC级试剂使用所有的流动相前必须先过滤并脱气确认流动相中缓冲盐的溶解性确认样品在流动相中的溶解性液相色谱柱注意要点

其它注意事项pH值保持在2-8之间(A型硅胶)或1.5-10.0之间(B型硅胶)低pH值会水解你的固定相高pH值会溶解硅胶背压必须保持在3500psi以下避免压力的突变液相色谱柱注意要点保养与保存切忌用缓冲盐保存色谱柱用5倍柱体积不含缓冲溶液的流动相来冲洗，除去缓冲盐反相柱储存液：65/35有机溶液/水正相柱储存液：异丙醇或正已烷离子交换储存液：甲醇SEC或Diol储存液:0.05%NaN3水溶液或10%甲醇液相色谱柱注意要点如何延长色谱柱寿命

使用合适的流动相注射样品前的处理经常监测背压典型背压（在65/35的乙腈/水)150*4.6mm3um硅胶典型背压:980psi150*4.6mm5um硅胶典型背压:710psi250*4.6mm5um硅胶典型背压:1180psi使用合适的溶剂保存色谱柱如何延长色谱柱寿命及时清洗色谱柱(使用Phenomenex色谱柱时，我们建议反冲)反相柱用下列10倍柱体积的溶剂清洗:95%水/5%ACNTHF(可省略)95%ACN/5%水流动相正相柱用下列10倍柱体积的溶剂清洗:正已烷二氯甲烷异丙醇二氯甲烷流动相其它类型色谱柱的冲流方法请联系广州FLM公司如何保护色谱柱

保护色谱柱的原因延长色谱柱的寿命减少系统损失长期来看，可以节省时间和费用得到最优化的结果如何保护色谱柱流动相进口端使用过滤网在线过滤使用保护柱对流动相进行脱气对所有样品进行过滤处理如何保护色谱柱保护柱优点：去除强保留杂质延长色谱柱寿命保持高柱效降低分析成本如何保护色谱柱SecurityGuard通用的保护柱芯系统直接与色谱柱相连，减少死体积100%稳定，生物兼容性流径，对金属敏感样品适用专利设计使用简单价格适中固定相选择多样化如何保护色谱柱如何保护色