有机物定量分析

关于有机物定量分析2024/4/11有机定量分析12024/4/11有机定量分析2

pro是复杂的含氮有机化合物，它的溶液是典型的胶体分散体系，由两性氨基酸通过肽键结合在一起的大分子化合物，它主要含的元素是C、H、O、N、S、P另外还有一些微量元素Fe、Zn、I、Cu、Mn。对于不同的pro，它的组成和结构不同，但从分析数据可以得到近似的pro的元素组成百分比。元素组成百分比：元素

C

H

O

N

S

P

百分比50

7

23

16

0-3

0-3一般来说，pro的平均含氮量为100/16，所以在用凯氏定氮法定量pro时，将测得的总氮%乘上pro的换称参数K=6.25即为该物质的pro含量。但当测定的样品其含氮的系数与上面100/16相差较大时，采用6.25将会引起显著的偏差。一蛋白质的定量分析方法

第2页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析3

对于氮含量换算成pro含量的等数，历来采用6.25，这个数值是以pro平均含氮而导出的数值，但是食品中含氮的比例，因食品种类不同，差别是很大的，我们在测定pro时，应该是不同的食品采用不同的换算等数，一般手册上列出了一部分换称等数：蛋=6.25，肉=6.25，牛乳=6.38，稻米=5.95，大麦=5.83，玉米=6.25，小麦=5.83，麸皮=6.31，面粉=5.70。如果手册上查不到的样品则可用6.25，一般在写报告时要注明采用的换算等数以何物代替。近几年，国际组织认为6.25的换算等数太高，特别是对蛋品、肉品及鱼类，贝类等动物性食品，根据以氨基酸组成总量计算的比6.25要低的多。关于氮-pro换算等数第3页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析4pro的测定方法分为两大类：

一类是利用pro的共性，即含氮量，肽链和折射率测定pro含量.另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定pro含量。但是食品种类很多，食品中pro含量又不同，特别是其他成分，如碳水化合物，脂肪和维生素的干扰成分很多，因此pro的测定通常利用经典的剀氏定氮法是由样品消化成铵盐蒸馏，用标准酸液吸收，用标准酸或碱液滴定，由样品中含氮量计算出pro的含量。根据食品中pro含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它们的基本原理都是一样的。第4页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析5

这种方法是1883年Kjeldahl发明，当时凯氏只使用H2SO4来分解试样，来定量谷物中的pro，他只知用H2SO4分解试样，而不能阐明H2SO4分解有机氮化合物生成氨的反应历程，所以只使用H2SO4分解试样，需要较长时间，后来由Gunning加入改进，他改进的办法是在消化时加入K2SO4使沸点上升，这样加快分解速度，因为温度由原来硫酸沸点的330上升到400℃，所以速度也就加快了，凯氏定氮法至今仍在使用。我们在检验食品中pro时，往往只限于测定总氮量，然后乘以pro核算等数，得到蛋白质含量，实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物，故称为粗pro。(一)凯氏定氮法第5页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析6首先第一个步骤是消化：（1）消化：样品与硫酸一起加热消化，硫酸使有机物脱水。并破坏有机物，使有机物中的C、H氧化为CO2和H2O蒸汽逸出，而pro则分解氮，则与硫酸结合成硫酸铵，留在酸性溶液中。在消化过程中添加硫酸钾可以提高温度加快有机物分解，它与硫酸反应生成硫酸氢钾，可提高反应温度，一般纯硫酸加热沸点330℃，而添加硫酸钾后，温度可达400℃，加速了整个反应过程。此外，也可以加入硫酸钠，氢化钾盐类来提高沸点。其理由随着消化过程硫酸的不断地被分解，水分的逸出而使硫酸钾的浓度增大，沸点增加。加速了有机的分解。但硫酸钾加入量不能太大，否则温度太高，生成的硫酸氢铵也会分解，放出氨而造成损失。为了加速反应过程，还加入硫酸铜，氧化汞或硒粉作为催化剂以及加入少量过氧化氢，次氯酸钾作为氧化剂。但为了防止污染通常使用硫酸铜。

第6页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析7（2）蒸馏：样液中的硫酸铵在碱性条件下释放出氨，在这操作中，一是加入氢氧化钠溶液要过量，二是要防止样液中氨气逸出。

(3)吸收与滴定：蒸馏过程中放出的氨可用一定量的标准硫酸或标准盐酸溶液进行氨的吸收，然后再用标准氢氧化钠溶液反滴定过剩的硫酸或盐酸溶液，从而计算出总氮量。半微量或微量定氮通常用硼酸溶液吸收后，再用标准盐酸直接滴定，硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂变色反应，它有吸收氨的作用。

第7页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析8MRMOMR(凯氏定氮法)NaOHHCl第8页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析9凯氏定氮装置1.安全管2.导管3.汽水分离器4.塞子5.进样口6.冷凝管7.吸收瓶8.隔热液套9.反应管10.蒸汽发生器消化样品浓H2SO4CuSO4·5H2OK2SO4样品空白2.蒸NH3第9页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析10计算：

N（V2-V1）14.01

总氮量%=

-----------------------------

×

100

W

pro%=总氮%×K

乳制品K=6.38（N=15.7%）

小麦粉K=5.79（N=17.6%）

动物胶K=5.6（N=18.0%）

冰蛋K=6.7（N=14.8%）

大豆制品K=6.0（16.7%）

K=6.25则（N=16%）

K-换称等数第10页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析11

(1)消化时间一般约4小时左右即可，消化时间过长会引起氨的损失。如样品中含赖氨酸或组氨酸较多时，消化时间需延长1—2倍。因为这两种氨基酸中的氮在短时间内不易消化完全，往往导致总氮量偏低。注意事项

(2)若样品中脂肪或糖较多时，消化时间要长些。还应注意发生的大量泡沫，防止它溢出瓶外。须时时摇动，并减小火焰，甚至停止加热半小时底再用小火消化。第11页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析12

在消化过程中为了加速分解过程，缩短消化时间，常加入下列物质：样品的分解条件功用是提高溶液的沸点。K2SO4

在消化过程中，随着硫酸的不断分解，水分的不断蒸发，K2SO4的浓度逐渐增大，则沸点升高，加速了对有机物的分解作用。

K2SO4与硫酸的用量比值不宜过大，因温度过高，生成的硫酸氢铵也会分解，放出氨，使氮损失。第12页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析13

Cu2SO4为红色沉淀，当C完全消化后，反应停止，红色消失，变为兰色，即为消化达到完全，兰色为CuSO4的颜色催化剂CuSO4:氧化汞和汞:氧化汞和汞是良好的催化剂

氧化汞和汞都是剧毒物质，使用时必须有安全可靠的通风设备，还会污染环境，而且价格昂贵。第13页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析14硒粉催化效能可大大缩短消化时问。第14页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析15

(1)次氯酸钾和高锰酸钾一般不宜使用这类强氧化剂。次氯酸钾的催化作用强，由于其氧化性强，可将一部分氨进一步氧化成氮而损失。若试样富含碳时，可使用高锰酸钾。

(2)过氧化氢具有消化速度高，操作简便的优点，近常推荐采用这种氧化剂。但在使用时要特别注意，须待消化液完全冷却后再加入数滴过氧化氢。氧化剂

添加氧化剂可帮助有机物消化，但要防止氨进一少氧化为氮。一般说来，若有足够量的其他还原剂，如碳，则添加氧化则不致使测定结果偏低。第15页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析16一、原理

考马斯亮蓝G-250以两种不同颜色存在即红色与蓝色，当染色剂与蛋白质结合时，红色就转变为蓝色。这种蛋白质染色剂复合物有较高的消光系数。因此，用这种方法测定蛋白质含量灵敏度比较高，染色剂和蛋白质的结合过程迅速，大约2分钟，而且蛋白质—染色剂复合物能在溶液中保持稳定1小时之久。(二)可溶性蛋白质的测定（考马斯亮蓝G-250法）第16页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析17CoomassieDye-Based蛋白质定量PROTEIN+Amax=595nmBLUEAcidCoomassieG-250Protein-DyeComplexOCH2CH3NHCCH3CH3NCH2SO3-CH3CH2NCH2CH2CH3SO3Na+第17页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析18二、材料、仪器与试剂（一）材料：绿豆芽、马铃薯。（二）仪器：分光光度计，分析天平，容量瓶、移液管、具塞刻度试管。（三）试剂1．考马斯亮蓝G-250蛋白试剂：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml90%乙醇中，加入85%正磷酸100ml，最后加蒸馏水至1000ml，此溶液可在常温下放置一个月。

试剂2．蛋白质标准液：称取100mg牛血清蛋白，溶于100ml蒸馏水中，制成100μg·ml-1

贮备液。再按下表比例配制成每毫升分别含200μg，400μg，600μg，800μg，1000μg蛋白标准液及每毫升分别含20μg，40μg，60μg，80μg，100μg蛋白的标准液。表1高浓度蛋白质标准液的配制蛋白浓度(μg·ml-1)2004006008001000加贮备液(ml)0.40.81.21.62.0加蒸馏水(ml)1.61.20.80.40

第18页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析19表2低浓度蛋白质标准液的配制蛋白浓度(μg·mL-1)20406080100加贮备液(mL)0.20.40.60.81.0加蒸馏水(mL)9.89.69.49.29.0

三、操作步骤（一）标准曲线的制作1．100~1000μg·ml-1

蛋白标准曲线：准确吸取含有200μg，400μg，600μg，800μg，1000μg的牛血清蛋白标准液0.1ml,分别放入10ml刻度试管中，加入5.0ml考马斯亮蓝G-250蛋白试剂，将溶液混匀，2分钟后在595nm处测其消光值，空白以蒸馏水代替标准液，其它操作同上。第19页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析202．0~100μg·ml-1

蛋白标准曲线：准确吸取0.5ml含20μg，40μg，60μg，80μg，100μg牛血清蛋白标准液，分别放入10ml具塞刻度试管中，加入5.0ml考马斯亮蓝G-250蛋白试剂，其它操作同上。以消光值为纵坐标，蛋白含量为横坐标，作标准曲线。（二）样品中蛋白质浓度的测定：样品中蛋白质浓度的测定除加入标准溶液作为样品液外，其余操作完全相同，通过标准曲线即可查得每毫升溶液中蛋白质的含量。四、注意事项1在配制不同浓度蛋白质溶液时，比色管一要事先干燥。

2在分别吸取蛋白质溶液后应立即盖上塞子，避免水分蒸发影响测定的结果。

第20页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析211原理：

pro及其降解产物的芳香环基，在紫外区内对某一波长具有一定的光选择吸收，在280nm下，光吸收与pro浓度（3~8mg/ml）成直线关系，因此，通过测定pro溶液的吸光度，并参照事先用K氏定氮法分析的标准样品，从标准曲线查出蛋白质的含量。(三)紫外分光光度法第21页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析222

试剂：

（1）0.1mol/l柠檬酸水溶液。（2）8mol/l脲[（NH2）2CO]的2NNaOH溶液。脲的2N氢氧化物（3）

95%乙醇（4）无水乙醚3

仪器（1）

紫外分光光度计（2）

离心机4

操作方法（1）标准曲线的绘制：

准确称取样品.2.00g，置于50ml烧瓶中，加入0.1mol/l柠檬酸水溶液30ml，搅拌30分钟使其充分溶解，用四层纱布过滤于玻璃离心管中。第22页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析23

以每秒钟3000~5000转的速度离心10分钟，分别吸出上清液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于6个10ml容量瓶中，每个容量瓶，8mol/l脲的氢氧化钠溶液充分摇2分钟（如果浑浊再次离心），取透明液于比色皿中，在280nm下测定其吸光度。（做参比值）以事先用K氏定氮法测定的样品中蛋白质的含量为横坐标上面的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（2）样品测定准确称取试样1.00g→于50ml烧杯中→加0.1mol/l柠檬酸溶液30ml→搅拌10分钟→四层纱布过滤到离心管中→用8mol/L脲的NaOH溶液定容，摇匀后于280nm下测吸光度，从标准曲线上查出pro的含量。说明：a.此法运用于糕点，牛乳和可溶性pro样品，测定糕点时，应把表皮颜色去掉。

b.温度对pro水解有影响，操作温度应控制在20~30℃。第23页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析24

原理：

双缩脲在碱性条件中，能与CuSO4结合成红紫色的络合物。pro分子中含有肽链与双缩脲结构相似，也呈此反应。本法直接用于测定像小麦粉等固体试样的pro含量。但作为铜的稳定剂，酒石酸钾钠比甘油好些。(四)双缩脲法-皮尼克法

准确称样→0.5g→于80ml离心管→加1mlCCl4→混合→加50ml酒石酸钾钠稳定剂→盖上盖子离心10min（4000转/分）→放置1小时→吸混合液15ml→于20ml离心管中→离心到完全透明→取上清夜5ml于→10ml容量瓶→加水定容→于550nm处测定吸光度，从标准曲线上查出pro含量。

计算：蛋白质%=C/W×100C----从标准曲线上查得得pro含量（mg）W----测定样液时相当于样品重量（mg）第24页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析25

pro经水解或酶解可由大分子变成小的pro成分，如水解后的产物经胨，肽等最后成为氨基酸，氨基酸是构成pro最基本的物质。水解后的pro和水解前的pro在物理特性，化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的，其差别与水解的程度有密切关系，分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度，也就可以评价食品的营养价值。二氨基酸总量测定

氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸（仪器价格昂贵，不能普遍使用），对于食品来说有时有很多种氨基酸可以同时存在于一种食品中，所以需要测定总的氨基酸量，它们不能以氨基酸百分率来表示，只能以氨基酸中所含的氮（氨基酸态氮）的百分率表示，当然，如果食品中只含有一种氨基酸，如味精中的谷氨酸，就可以从含氮量计算出氨基酸的含量。第25页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析26一、原理氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用，生成蓝色化合物（除脯氨酸外均有此反应），可用吸光光度法测定。该蓝紫色化合物的颜色深浅与氨基酸含量成正比，其最大吸收波长为570nm，故据此可以测定样品中氨基酸含量。茚三酮法测定氨基酸总量二、主要仪器分光光度计三、试剂2%茚三酮溶液：称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解，加入40mg氯化亚锡（SnCl2·H2O）,搅拌过滤（作防腐剂）。滤液置冷暗处过夜，加水至50mL，摇匀备用。

pH8.04磷酸缓冲溶液：准确称取磷酸二氢钾（KH2PO4）4.5350g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀备用。准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.9380g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀备用。取上述配好的磷酸二氢钾溶液10.0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH8.04的磷酸缓冲溶液。第26页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析273.氨基酸标准溶液：准确称取干燥的氨基酸（如异亮氨酸）0.2000g于烧杯中，先用少量水溶解后，定量转入100mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。准确吸取此液10.0mL于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀。此为200μg·mL-1氨基酸标准溶液。四、操作方法

1.标准曲线绘制准确吸取200μg·mL-1的氨基酸标准溶液0.0mL，0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL，2.5mL，3.0mL（相当于0μg，100μg，200μg，300μg，400μg，500μg，600μg氨基酸），分别置于25mL容量瓶或比色管中，各加水补充至容积为4.0mL，然后加入茚三酮和磷酸缓冲溶液各1mL，混合均匀，于水浴上加热15分钟，取出迅速冷至室温，加水至标线，摇匀。静置15分钟后，在5570nm波长下，以试剂空白为参比液测定其余各溶液的吸光度A。以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。第27页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析282.样品的测定吸取澄清的样品溶液1~4mL，按标准曲线制作步骤，在相同条件下测定吸光度A值，用测得的A值在标准曲线上即可查得对应的氨基酸微克数。

说明及注意事项

1.通常采用样品处理方法为：准确称取粉碎样品

5~10g或吸取液体样品

5~10mL，置于烧杯中，加入50mL蒸馏水和5g左右活性炭，加热煮沸，过滤，用30~40mL热水洗涤活性炭，收集滤液于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀备测。2.茚三酮受阳光、空气、温度、湿度等影响而被氧化呈淡红色或深红色，使用前须进行纯化，方法如下：取10g茚三酮溶于40mL热水中，加入1g活性炭，摇动1分钟，静置30分钟，过滤。将滤液放入冰箱中过夜，即出现蓝色结晶，过滤，用2mL冷水洗涤结晶，置干燥器中干燥，装瓶备用。

3.空气中氧气干扰显色一步，抗坏血酸保护可以提高灵敏度。4.温度超过80℃容易褪色；适当延长温热时间效果较好。第28页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析29碳水化合物的测定

碳水化合物是生物界三大物质之一（Pro,Fat）,是自然界最丰富的有机物质。碳水化合物主要存在于植物界，如谷类食物和水果蔬菜的主要成分是(CH2O)n。碳水化合物统称为糖类，它包含了单糖、低聚糖及多糖，是大多数食品中重要组成成分，也是人和动物体的重要能源。单糖、双糖、淀粉能为人体所消化吸收，提供热能，果胶、纤维素维持人体健康具有重要作用。第29页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析30常用的混合糖的分离纯化方法一.提取常用溶剂有：水和乙醇，在提取糖类时，先将样品磨碎浸泡成溶液，若有脂肪的样品用石油醚提取，撤去其中的脂肪和叶绿素。1.

水作提取剂用水作提取剂，温度控制在45-50℃，利用水作提取剂时，还有pro、氨基酸、多糖、色素干扰，影响过滤时间，所以用水作提取剂应注意：1）温度过高：是可溶性淀粉及糊精提取出来。2）酸性样品：酸性使糖水解（转化），所以酸性样品用碳酸钙中和，提取但应控制在中性。3）萃取的液体：有酶活性时，同样是使糖水解，加二氯化汞可防止（二氯化汞可抑制酶活性）2.乙醇（水溶液）作提取液乙醇作提取液适用于含酶多的样品，这样避免糖被水解。乙醇的浓度70-80％。浓度过高，糖溶在乙醇中，用乙醇的目的，降低酶的作用，避免糖被酶水解。第30页,共78页，2024年2月25日，星期天31二.澄清剂1.

作用：

沉淀一些干扰物质，使提取液清亮透明，达到准确的测量糖类。（常用澄清剂来澄清）2.

对澄清剂的要求：1）除干扰物质完全，不吸附被测物质糖2）过量澄清剂不影响糖的测量3）沉淀颗粒要小，操作简便4）不改变糖类的比旋光度及理化性质3.

实验室常用的澄清剂1）中性醋酸铅：适用于植物性的萃取液，它可除去蛋白质、丹宁、有机酸、果胶。缺点：脱色力差，不能用于深色糖液的澄清，否则加活性炭处理。

2）碱性醋酸铅适用深色的蔗糖溶液，可除色素，有机酸，蛋白质缺点：沉淀颗粒大，可带走果糖。（3）醋酸锌和亚铁氰化钾

用于富含蛋白质的提取液，常用于沉淀蛋白质，对乳制品最理想。主要是生成的亚铁氰酸锌（白色沉淀）与蛋白质共同沉淀。所以使动物性样品的沉淀剂。（4）Al(OH)3乳剂是辅助澄清剂。（5）CuSO4-NaOH这种澄清剂用于牛乳等样品。第31页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析324．澄清剂的用量在一般操作时，加澄清剂量多少一定要恰当，用量太少，达不到澄清的目的，用量太多使分析结果产生误差，不同的物质，因干扰物质种类和含量的不同，所以添加量也不同。过量以后，糖液中有Zn2+,

Pb2+,等。过量的Pb2+还原糖生成铅糖。这样使测得糖量降低。所以要加除铅剂，防止生成铅糖，降低糖的浓度。三．常用的除铅剂

K2CrO4(苯酸钾)；Na2CrO4(苯酸钠)；Na2HPO4(磷酸氢二钠)；Na2SO4(硫酸钠)；[使用时可加少量固体即可]第32页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析33糖的测定方法对于糖的测定方法有很多，大致可分为三类1.物理法，（1.旋光法,

2.折光法,

3.比重法,）2.物理化学法,(1.点位法,2极普法,3.光度法,4.色谱法)3.化学方法,(1.斐林氏法.2.高锰酸钾法.3.碘量法.4.铁氰化钾法.5.蒽铜比色法.6.咔唑比色法)共计三大种，在测定其他碳水化合物时，往往是使其水解为糖再进行测定。第33页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析34

还原糖是指具有还原性的糖类。葡萄糖分子中含有游离醛基、果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的潜醛基，它们都是还原糖。其他双糖（如蔗糖）、三糖乃至多糖（如糊精、淀粉等），其本身不具还原性，属于非还原性糖，但都可以通过水解而生成相应的还原性单糖，测定水解液的还原糖含量就可以求得样品中相应糖类的含量。因此，还原糖的测定是一般糖类定量的基础。还原糖的测定方法很多，其中最常用的有直接滴定法、高锰酸钾滴定法、萨氏法、碘量法等。(一)还原糖的测定第34页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析35一．原理将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。各步反应式(以葡萄糖为例)如下：直接滴定法第35页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析36

从上述反应式可知，1mol葡萄糖可以将6molCu(2+)还原为Cu(+1)。实际上两者之间的反应并非那么简单,实验结果表明．1mol葡萄糖只能还原5mol多点的Cu(2+)，且随反应条件而变化。因此，不能据上述反应式直接计算出还原糖含量，而是用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方法，或利用通过实验编制出的还原糖检索表来计算。第36页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析37二、试剂

1.碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释到1000mL。

2．碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡皮塞玻璃瓶中。

3.乙酸锌溶液：称取21.9乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）,加3mL冰醋酸，加水溶解并稀释到100mL。

4.10.6%亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O],溶于水中,稀释至100mL。5.0.1%葡萄糖标准溶液：

准确称取1.0000g经过98-100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后移入1000mL容量瓶中，加入5mL盐酸（防止微生物生长），用水稀释到1000mL。第37页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析38三、测定方法

1.样品处理

取适量样品研细，加水提取样品中的还原糖，提取液转移至100ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静置30分钟。用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。

2.碱性酒石酸铜溶液的标定

准确称取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒。加热使溶液沸腾后，从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖溶液的总体积。平行测定3次，取其平均值，按下式计算。

F=C×V式中：F——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg；

C——葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml；

V——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，ml。

第38页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析393.样品溶液预测

吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加水10mL，加玻璃珠3粒，加热使其在2分钟内至沸，准确沸腾30秒钟，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。待溶液蓝色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品液消耗的体积。

4.样品溶液测定

取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加玻璃珠3粒，加热至溶液沸腾后，从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少1mL的样品溶液，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行测定3次，取平均值。第39页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析40四、结果计算还原糖（葡萄糖计%）=F×100/[m×(V/100)×1000]式中：m——样品质量，g;F——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg;V——测定时平均消耗样品溶液的体积，mL；100——样品溶液的总体积，mL。适用范围及特点本法又称快速法，它是在蓝一爱农容量法基础上发展起来的，其特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时，因色深干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。第40页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析41

高锰酸钾滴定法

1．原理将一定量的样液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜，经过滤，得到氧化亚铜沉淀，加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶解，而三价铁盐被定量地还原为亚铁盐，用高锰酸钾标准溶液标定所生成的亚铁盐，根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜的量，再从检索表中查出与氧化亚铜量相当的还原糖量，即可计算出样品中还原糖含量。各步反应式如下：

由反应式可见，5molCuSO4相当于2摩尔KMnO4故根据高锰酸钾标准溶液的消耗量可计算出氧化亚铜量。再由氧化亚铜量查检索表得出相当的还原糖量。第41页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析42

2．测定方法

(1)样品处理取适量样品，根据样品的组成、性状按前述原则进行提取，提取液移入250ml容量瓶中，慢慢加入10ml碱性酒石酸铜甲液和4m11mol氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀，静置30分钟、用干燥滤纸过滤，弃去初滤液．滤液供测定用。（此步骤目的是沉淀蛋白）

(2)测定吸取50m1处理后的样品溶液于400m1烧杯中，加碱性洒石酸铜甲、乙液各25m1，盖上表面皿，置电炉上加热，使其在4分钟内沸腾，再准确沸腾2分钟，趁热用铺好石棉的坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱性反应为止。将坩埚放回原400mI烧杯中，加25ml硫酸铁溶液及25m1水，用玻璃棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以高锰酸钾标准溶液滴定至微红色为终点。记录高锰酸钾标准溶液消耗量。同时吸取50m1水代替样液，按上述方法做试剂空白试验。记录空白试验消耗高锰酸钾溶液的量。第42页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析43结果计算

3．适用范围及特点本法是国家标准分析方法，适用于各类食品中还原糖的测定，有色样液也不受限制。方法的准确度高，准确度和重现性都优于直接滴定法。但操作复杂、费时，需使用特制的高锰酸钾法糖类检索表。第43页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析44一、原理淀粉是食品中主要的组成部分，也是植物种子中重要的贮藏性多糖。由于淀粉颗粒可与碘生成深蓝色的络合物，故可根据生成络合物颜色的深浅，用分光光度计测定消光度而计算出淀粉的含量。

二、材料、仪器与试剂

材料：马铃薯、栗子、山药等。仪器：分光光度计、小台秤、分析天平、烧杯（100mL）、研钵、容量瓶（100mL）、洗瓶、漏斗、滤纸、具塞刻度试管（15mL）、恒温水浴、移液管（1mL,2mL）。

试剂:1．碘液：称取20.00g碘化钾，加50mL蒸馏水溶解，再用小台秤迅速称取碘2.0g，置烧杯中，将溶解的KI溶液倒入其中，用玻棒搅拌，直到碘完全溶解，若碘不能完全溶解时，可再加少许固体碘化钾即能溶解，碘液贮存在棕色小滴瓶中待用，用时稀释50倍。

2．乙醚A.R。

3．10%乙醇A.R。淀粉含量的测定（碘量法）第44页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析45三、操作步骤

（一）标准曲线的制作：用分析天平准确称取1.000g精制马铃薯淀粉，加入5.0mL蒸馏水制成匀浆，逐渐倒入90mL左右沸腾的蒸馏水中，边倒边搅拌，即得澄清透明的糊化淀粉溶液，置100mL容量瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯。定容，此淀粉溶液浓度为10mg/mL（A液）。吸取A液2.0mL置100mL容量瓶，定容，此时淀粉浓度为200μg/mL（B液）。取具塞刻度试管8支，按下表加入淀粉及碘液，再加蒸馏水使每支试管溶液补足到10mL，摇匀，待蓝色溶液稳定10min后，用分光光度计于660nm波长处测其消光值。以消光值为纵坐标，已知淀粉溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。试管编号12345678

标准淀粉溶液

(μg·mL-1)/mL

00.51.01.52.02.53.04.0

碘液/mL0.20.20.20.20.20.20.20.2蒸馏水/mL9.89.38.88.37.87.36.85.8

淀粉含量

/μg·mL-10100200300400500600800第45页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析46（二）样品处理：马铃薯洗净，去皮，用擦子擦成碎丝，迅速称取马铃薯碎丝300g，置研钵中磨成匀浆。将匀浆转移到漏斗中，用乙醚50mL分5次洗涤，再用10%乙醇洗涤3次，以除去样品中的色素，可溶性糖及其它非淀粉物质，然后将滤纸上的残留物转移到100mL烧杯中，用蒸馏水分次将滤纸上的残留物全部洗入烧杯，将烧杯置沸水浴中边搅拌边加热，直到淀粉全部糊化成澄清透明。将此糊化淀粉转移到100mL容量瓶中，定容，混匀（C液）。

（三）测定：吸取C液2.0mL，置1，000mL容量瓶中，用蒸馏水定容，混匀。准确吸取2mL样品溶液（吸取量依样品中淀粉浓度而变），置15mL具塞刻度试管，加入碘液0.2mL，直至溶液呈现透明蓝色，用蒸馏水补足到10mL，混匀，静置10min，于660nm波长处测定消光值。由标准曲线查出样品中淀粉含量（g/100g鲜重）。第46页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析47淀粉含量的测定一、原理

淀粉测定可先除去样品中的脂肪及其中的可溶性糖、再在一定酸度下，将淀粉水解为具有还原性的葡萄糖。通过对还原糖含量的测定，乘上一换算系数0.9，即为淀粉含量，反应式如下：(C6H10O5)n+nH2O→nC6H12O6

n×162.1n×180.2根据反应公式，淀粉与葡萄糖之比为：162.1∶180.12=0.9∶1，即0.9g淀粉水解后可得1g葡萄糖。

二、材料、仪器与试剂

材料：马铃薯、苹果、葡萄等。仪器：滴定管(15mL)、移液管（5mL）、烧杯、三角瓶（150mL）、容量瓶（500mL,250mL,100mL）漏斗、研钵、酒精灯、铁架台、滴定管夹、水浴锅、分析天平。第47页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析48试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、氢氧化钠A.R、盐酸A.R、次甲基蓝A.R、醋酸铅A.R、硫酸钠A.R、酚酞A.R。1．菲林试剂甲A.R：称取硫酸铜34.639g加入蒸馏水溶解后，置于500mL容量瓶中，加水稀释到刻度，混匀。

2．菲林试剂乙A.R：称取酒石酸钾钠173g及氢氧化钠50g，加蒸馏水溶解后置于500mL容量瓶中，加水稀释到刻度，混匀，过滤后待用。

3．蔗糖标准液的配制A.R：用分析天平准确称取1g蔗糖，溶解后移入250mL容量瓶中定容，混匀后吸取50mL放入100mL容量瓶中，加2.5mL12mol/LHCL，在沸水中煮10min，取出迅速用冷水冲洗冷却至室温，加1%酚酞2-3滴，加6mol/LNaOH中和至微红，定容，混匀，用此标准液滴定菲林试剂，求出标准蔗糖液1mL中糖含量。第48页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析49三、操作步骤

（一）样品处理：称去皮切碎的苹果肉2g，置研钵中磨成匀浆，用蒸馏水冲洗转移入100mL容量瓶中，加2.5mL12mol/LHCl在沸水浴中煮10min，取出2冷却，此时样品中的蔗糖水解成还原糖。对含蛋白质较多的样品，可滴加10%Pb(Ac)2到溶液不再产生白色絮状沉淀时为止，加饱和Na2SO4除去多余的铅离子，然后加1%酚酞2-3滴，加6mol/LNaOH中和至微红，定容到100mL，摇匀后过滤待测。（二）测定：吸取5mL菲林试剂甲和5ml菲林试剂乙，放入150mL的三角瓶中。加入1-2滴次甲基蓝，置酒精灯上加热至沸腾，用竹制试管夹夹住三角瓶，边摇动边滴定，真至样品提取液将菲林试剂滴定至上清液变为无色（同时出现红棕色的氧化亚铜沉淀）记录下样品滴定用量的毫升数，重复一次，求两次读数的平均值为样品滴定用量四、计算

淀粉（%）=

标准蔗糖1mL中含糖量×滴定用量———————————×稀释倍数×100×0.9

样品重量×1000

第49页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析50五、注意事项

（一）如样品含糖量高时需适当加大稀释倍数。（二）掌握滴定终点标准时，需用白色做背景，便于观察溶液从蓝色转变为无色，且必须在沸腾时观察，否则易氧化成蓝色不易判别终点。（三）总糖的测定亦可用此法，但需用HCl将多糖水解，转化成还原糖并适当稀释后测定。（四）样品中含有可溶性糖时，可先用乙醇溶解除去可溶性糖再测淀粉含量。第50页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析51四植物叶子叶绿素含量的测定原理：绿色植物色素主要是叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素。在用丙酮提取的植物色素中选择叶绿素a、b单色光波长的最大吸收峰633nm和645nm的波长测吸光度。又知叶绿素a、叶绿素b分别在633nm的吸收系数为82.04和9.27在645nm波长下的吸收系数为16.75和45.60。根据吸光度加和性原理有：A663=82.04Ca+9.27

CbA645=16.75Ca+45.60Cb求出叶绿素a、b的含量就可以求出叶绿素总量CT。

CT=Ca+Cb。注意：不同溶剂的提取物最大吸收波长和吸收系数不同。

第51页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析52材料、仪器设备仪器：分光光度计，电子天平，研钵、小漏斗、棕色容量瓶，定量滤纸，吸水纸，檫镜纸，滴管。试剂：80%的丙酮，石英沙，碳酸钙粉末。取新鲜绿色叶片，檫净叶片表面污物，（去掉中脉）剪碎，混均匀。试验步骤称取碎叶片3份，每份0.2克。分别放入研钵中，加入少量石英沙和碳酸钙粉末及2.5毫升80%丙酮，研成匀浆，再加10毫升丙酮继续研磨直至组织变白。静置3—5分钟。过滤，用少量丙酮淋洗残渣和玻璃棒数次，直至残渣无色为止。洗液一起转入25毫升棕色容量瓶，摇匀，定容。用1cm比色皿，80%丙酮为空白，在663nm和645nm处测吸光度。注意：为了避免叶绿素在强光下分解，试验应该在弱光下操作。叶绿素提取液不能浑浊，可在710或750nm处测量其吸光度，其值应小于波长为叶绿素a吸收峰处的5%，否则应该重新过滤。对波长要求精确度高，否则误差大。第52页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析53一、原理

β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在各种动植物体中，所以可直接用有机溶剂提取后进行检测。利用反相色谱法分析。

二、材料、仪器与试剂

（一）材料：胡萝卜、绿色蔬菜等。（二）仪器：高效液相色谱仪、记录仪或积分仪、分析天平、组织捣碎机、研钵、抽滤瓶、布氏漏斗、分液漏斗（250mL2个）、容量瓶(100mL)、漏斗、移液管（2mL）小试管、滤纸等。（三）试剂：正已烷、甲醇、无水硫酸钠、乙酸乙酯、BHT（叔丁基羟基甲苯）（以上均为分析纯试剂）、氮气。

20%氢氧化钾的甲醇溶液：称20g氢氧化钾溶于100mL甲醇溶液中。

β-胡萝卜素标准液：准确称取标样5.000mg，乙酸乙酯溶解并定容50mL。冰箱中保存，上机前再稀释50倍。五β-胡萝卜素含量的测定（HPLC法）第53页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析54三、操作步骤

（一）样品处理：取样品的可食部分洗净切碎，置组织捣碎机中捣碎成浆状，于天平上称5-10g样品，放入研钵中，同时加少量甲醇、已烷研磨.然后倒入布氏漏斗抽滤，并不断用甲醇、已烷冲洗研钵及残渣，直至残渣为白色。将含有样品的溶液倒入事先装有50mL已烷的分液漏斗中，用蒸馏水冲洗抽滤瓶2-3次，洗液并入分液漏斗，振摇分液漏斗后静止分层，将下层溶液放入装有30mL正已烷的另一分液漏斗中，向第一分液漏斗中加10mL20%氢氧化钾的甲醇溶液，振摇后分层，上层为黄色溶液。将下层放入另一分液漏斗中，处理同上。合并二次正已烷提取液，用蒸馏水洗至中性，pH试纸测试为6左右，然后用无水硫酸钠脱水，提取液转移到100mL棕色容量瓶中，加0.1gBHT，并用正已烷冲洗分液漏斗数次，最后定容至刻度。上机前取1-2mL提取液于小试管中，氮气吹干，用1.0mL乙酸乙酯溶解后上机。第54页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析55（二）色谱条件：色谱柱：μ-BondapakC-18(300×3.9mm)；流动相：100%甲醇；流速：1.2mL/min；检测器：可见光450nm；衰减：0.08AT；纸速：0.4cm/min；柱温：室温：进样量：20μL。四、计算根据标准样品的保留时间定性，根据标准样品的峰高或峰面积与样品峰的比较而定量。五、注意事项

β-胡萝卜素遇光和氧都会迅速破坏，所以样品应避光保存，所有标准β-胡萝卜素必须临时配制。第55页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析56一、原理

脂肪的测定可用有机溶剂提取样品中的脂肪，蒸发溶剂后得到的剩余物称为脂肪，除脂肪外，还含有色素、蜡质、挥发油、磷脂等，所以又称粗脂肪，在大多数食品中，这些杂质含量极少，可以忽略。二、材料、仪器与试剂（一）材料：谷物、豆类等。（二）仪器：索氏提取器（如图）、烧瓶（150mL）、恒温水浴（三）试剂：（1）无水乙醚；（2）海砂。所用试剂均为国产分析纯或化学纯。六粗脂肪的测定（索氏抽提法）第56页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析57三、操作步骤精确称取充分研碎的干燥样品2.00-5.00g，在105℃烘箱中烘干，置于已称重的滤纸筒内（半固体或液体样品取5.0-10.0g于蒸发皿中，加入海砂20g，于水浴上蒸干，在100-150℃烘干，研细，全部移入滤纸筒内，蒸发皿及附有样品的玻璃棒用蘸有乙醚的棉花擦净，棉花也放进滤纸筒内。将滤纸筒封好后小心放入索氏提取器的提取筒内，应使滤纸筒高度低于虹吸管上端弯曲部位。连接已恒重的蒸发烧瓶。加入无水乙醚至烧瓶中，乙醚量为瓶的2/3体积，于水浴上加热，乙醚开始回流后，仔细调整水浴温度，使虹吸回流速度控制在8-12次/h，一般抽提6-12h。（如乙醚挥发过多，可从冷凝管上端补充）。取下接收瓶。回收乙醚至瓶内剩1-2ml时，在水浴上蒸干，再于100-105℃干燥40-60min，取出于干燥器中冷却30min，称提取瓶及内容物的重量，所增加的重量即脂肪的重量。四、计算粗脂肪%=

W1—W0×100

W式中：W——样品重（g）

W0——接收瓶重（g）

W1——接收瓶和脂肪重（g）第57页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析58

二氮氧喹喔啉类化合物是研究较早的具有抗菌活性的物质。二氮氧喹喔啉甲醛—酰腙类化合物不但具有抗菌活性，而且可以作为除草剂使用。但是由于腙类化合物极难溶于一般溶剂，故未见有关该类酰腙化合物定量分析的报道。二氮氧喹喔啉甲醛—水杨酰腙是黄色固体，但由于极难溶解，其DMSO的饱和溶液只显淡黄色，且随着浓度降低迅速趋于无色；用KOH与之反应后显出鲜明的橙黄色。利用这一性质建立了该化合物的分光光度测定法。七二氮氧喹喔啉甲醛—水杨酰腙定量分析第58页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析59水杨酰腙钠盐酰基氮原子上的氢原子有酸性，可以与烯醇式形成平衡。KOH在非水溶剂DMSO中的碱性比在水溶液中大约强104倍，而且浓度比酰腙的烯醇式大得多，故可以将酰腙全部转变成烯醇式负离子而显色。二氮氧喹噁啉甲醛—水杨酰腙是二元酸，首先酚羟基与氢氧化钾反应生成钠盐。显色机理如下:第59页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析60仪器与试剂722分光光度计；

高效液相色谱仪检测纯度为99.5%）；恒温油浴锅；所用玻璃仪器均需无水；1，4—二氮氧喹喔啉甲醛—水杨酰腙（自合成，DMSO中三次重结晶至熔点不变；KOH的DMSO溶液（将分析纯的KOH溶于DMSO中配称成饱和溶液,浓度约4%）。

第60页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析61分析方法二氮氧喹喔啉甲醛—水杨酰腙的标准溶液吸光度的测定称取纯度为99.5%的二氮氧喹喔啉甲醛—水杨酰腙20mg置于150mL具塞瓶中，加入约90mL的DMSO，塞好塞子（注意，DMSO极易吸潮！）50℃恒温油浴溶解。然后转入100mL容量瓶，用8mLDMSO分两次洗涤具塞瓶，洗液转入容量瓶，摇匀，DMSO定容后作为标准样品溶液(0.2mg/mL)。取8个10mL容量瓶，每个容量瓶中用移液管分别加入5mL饱和KOH的DMSO溶液,再依次加入0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、1.2、1.5mL标准溶液，摇匀，DMSO定容。5min显色，用试剂空白对照，1cm比色皿在波长440nm处测其吸光度。平行实验三次，取其平均值作定量分析。第61页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析62结果与讨论用最小二乘法处理表1的数据得如下回归方程：A=0.0563C－0.019，r=0.999；在1.00—30.0×10-4mg/mL的浓度范围内符合朗伯—比耳定律。显色剂浓度

用氢氧化钾显色,由于KOH在DMSO中溶解度有限，浓度选择范围不大。在显色液中氢氧化钾浓度为0.5%时，较高浓度的酰腙（20—40×10-4mg/mL）能够较好的服朗伯—比耳定律；KOH浓度接近于4%时，较低浓度的酰腙（0.5—20×10-4mg/mL）能够较好的服从朗伯—比耳定律。取KOH浓度为1~2%时比较适宜。显色温度和时间

用氢氧化钾显色,温度越高色度越深,显色越快,但是吸光度波动性也越大。在室温下化合物可以5min内充分显色，故无须升温。但是DMSO的凝固点较高（19℃）故分析温度不能低于20℃。显色液在室温时4h内吸光度稳定

用1~2%氢氧化钾溶液显色，在1.00—30.0×10-4

mg/mL浓度范围内服从朗伯—比耳定律，浓度太高或太低都会偏离朗伯—比耳定律。本试验必须在无水的条件下操作，如大量水分进入DMSO溶液，会大大降低样品的溶解性和KOH的碱性，使样品析出或不能很好的转变成烯醇式负离子。第62页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析63八:药物普马嗪、氯丙嗪、异丙嗪

分离与鉴定原理：普马嗪、氯丙嗪、异丙嗪都属于吩噻嗪类药物，与氯化钯反应生成蓝色络合物。三者混合液用乙酸乙酯萃取，普马嗪不转入乙酸乙酯中。故可用分光光度法测定普马嗪、氯丙嗪和异丙嗪。又异丙嗪与硫酸汞生成红色物质，普马嗪和氯丙嗪呈负反应，故可以测定异丙嗪。试剂PH=2的缓冲溶液，10g三水合醋酸钠溶于50mL水，加入80mL1N的盐酸，加水至200毫升。氯化钯溶液：5克氯化钯溶解于50毫升1N的盐酸中；硫酸汞溶液：5克氧化汞溶于80毫升和20毫升水中。第63页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析64普马嗪、氯丙嗪、异丙嗪的测定操作：取含有样品50—150ug的水溶液1毫升，加入5毫升缓冲溶液和0.5毫升氯化钯溶液，加水成7毫升混匀，显色15分钟。以试剂为空白，在500nm波长处测吸光度。用同样方法测试标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。折算样品含量。氯丙嗪和异丙嗪的测定与50毫升漏斗中加入5毫升缓冲溶液，0.5毫升氯化钯溶液，加入含有500微克/毫升氯丙嗪和异丙嗪的样品，加水1毫升混匀。加入10毫升乙酸乙酯，萃取。用1N的盐酸5毫升洗涤乙酸乙酯，5分钟后在440nm波长处测吸光度用同样方法测试标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。折算样品含量第64页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析65异丙嗪的测定取含50—100毫克的样品1毫升加入1毫升硫酸汞溶液，水浴加热10分钟，冷却；加水至50毫升，10分钟后显色。以1毫升试剂加4毫升水为空白对照，在500nm波长处测吸光度。用同样方法测试标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。折算样品含量。吩噻嗪基本结构式：第65页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析66农药有效成分含量分析农药有效成分含量分析一般用气相色谱或液相色谱分析法。如杀虫剂久效磷的含量分析用液相色谱法。如右旋反式烯丙菊酯的含量用气相色谱法。第66页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析67久效磷分析方法提要：试样用甲醇溶解。以甲醇/水为流动相，在LichrosorbRP18柱上对式样中的久效磷进行分析。紫外检测器检测，外标法定量。分析条件色谱柱：250mm×4.6mm不锈钢柱，填充LichrosorbRP18；保护柱20mm×2.0mm不锈钢柱，PellicularODS；流动相：甲醇+乙腈+水=80+10+10（V/V）；已脱气。流速：1.5mL/

min监测器灵敏度：0.1AUFS；检测波长：230nm

温度：室温；进样体积：10uL；保留时间：5.8nim。第67页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析68右旋反式烯丙菊酯的含量分析方法提要试样用丙酮溶解，一邻苯二甲酸二丁酯为内标物；在OV—101/chromosorbW-HP色谱柱上分离。用带有氢火焰离子化检测器的气象色谱仪对试样中的右旋反式烯丙菊酯进行测定。分析条件色谱柱：1.2m×4mm，内填5%OV—101/chromosorbW-HP(150—200um)；温度：柱室160，气化室230，检测室230；载气（氮气）流速：125mL/min；进样体积：3uL右旋反式烯丙菊酯保留时间7min,内标物保留时间4min。第68页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析69九：有机物中水分的检验和测定

水分虽然不是有机化合物，但是在分析有机物时，经常要检测有机物中的水分。这是因为水分是有机物中经常存在的杂质之一。由于水的存在:一，影响有机物的纯度、品质及性质；二，影响有机反应的正常进行。有机合成反应中的F—C烷基化反应，要在无水的条件下．以三氯化铝作催化剂，才能使烷基化顺利进行。又如，格氏试剂的制备，必须在无水乙醚介质中进行。水分的存在，将直接影响反应的效率，甚至使反应失败；三，影响有机分析结果的正确性和灵敏度。例如，在非水溶剂中，测定弱酸或弱碱的含量时，水分的存在，将使测定终点不够敏锐。又如，在有机功能团的测定中，有时是根据测定反应中所消耗的水分或生成的水分的含量来进行定量分析的，有机物中水分的存在必然影响分析结果。综上所述，有必要检验有机物中的水分。第69页,共78页，2024年2月25日，星期天2024/4/11有机定量分析70水分的检验

在有机化合物中检出水分，目前还没有一种简便通用的方法，应根据试样的性质选择适当的方法。

水分的检出:化学方法:氯化钴、四乙酸铅、二苦胺、硫化铝、乙醇镁、碳