自配药酒对酒精致雄性小鼠肝损伤的影响

自配药酒对酒精致雄性小鼠肝损伤的影响【摘要】目的：探究自配药酒对于市售某高度白酒和本实验基酒灌胃所致雄性小鼠的酒精性肝损伤模型是否有肝脏保护或预防作用。方法：本实验研究的药酒加入了一定量的食品级矫味剂和葛根素、薯蓣皂苷元和绿原酸等具有护肝保肝功能的中药提取物（单体）并通过超声、涡旋仪涡旋和低温水浴方法使单体溶解，以此自配药酒对比市售某高度酒精和基酒建立的小鼠酒精性肝损伤模型，采取了边造模边给药的实验方法，对比自配药酒给药组和模型组小鼠血清谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）的值、肝细胞坏死率和观察肝组织HE染色切片等从而开展实验。结果：在自配药酒对酒精致雄性小鼠肝损伤影响的研究发现，对比空白组雄性小鼠的GOT和GPT的值，模型组的GOT和GPT值高于给药组；在对肝组织HE染色切片的观察发现，给药组的肝细胞坏死率较低，而模型组的肝细胞坏死率较高。结论：用市售白酒与基酒成功建立两个雄性小鼠酒精性肝损伤模型，在此研究发现本实验自配药酒与市售白酒搭配对高度酒精诱导雄性小鼠肝损伤有减轻作用。【关键词】酒精性肝损伤；葛根素；薯蓣皂苷；绿原酸Effectofself-preparedmedicinalwineonliverinjuryinalcoholicrefinedmalemice[Abstract]Objective:Toinvestigatewhetherself-preparedmedicinalliquorhashepatoprotectiveorpreventiveeffectsonalcoholicliverinjurymodelsinmalemiceinducedbygavagewithcommerciallyavailablehighlevelBaijiuandthisexperimentalbaseliquor.Methods:Inthisstudy,acertainamountoffood-gradeorthodonticagentandChineseherbalextracts(monomers)withhepatoprotectiveandhepatoprotectivefunctions,suchasgeranin,diosgeninandchlorogenicacid,wereaddedtothemedicinalliquoranddissolvedbyultrasound,vortexandlow-temperaturewaterbath.Theexperimentwascarriedoutbycomparingtheserumglutamicoxalyltransaminase(GOT)andglutamicpropyltransaminase(GPT)values,livercoefficientsandhepatocytenecrosisratesofthemiceintheself-preparedmedicinalliquoradministrationgroupandthemodelgroup,andobservingtheHEstainedsectionsoflivertissues.Results:Inthestudyoftheeffectofself-preparedmedicinalliquoronliverinjuryinalcoholicexquisitemalemice,itwasfoundthatwhencomparingthevaluesofGOTandGPTintheblankgroupofmalemice,thevaluesofGOTandGPTinthemodelgroupwerehigherthanthoseinthedrug-administeredgroup;intheobservationofHE-stainedsectionsoflivertissues,itwasfoundthattherateofhepatocytenecrosiswaslowerinthedrug-administeredgroup,whiletherateofhepatocytenecrosiswashigherinthemodelgroup.Conclusion:TwomodelsofalcoholicliverinjuryinmalemiceweresuccessfullyestablishedusingmarketedBaijiuandbaseliquor.Inthisstudy,itwasfoundthatthecombinationofselfpreparedmedicinalliquorandcommercialBaijiuinthisexperimentcouldalleviateliverinjuryinmalemiceinducedbyhighlyBaijiu.[Keywords]AlcoholicliverinjuryPuerarinDiosgeninChlorogenicacid目录TOC\o"1-3"\h\u87271前言 前言酒精性肝病是因为长期过量摄入酒精而造成的肝脏疾病。急性酒精性肝炎的肝硬化的死亡率可达到50%，晚期肝硬化患者的生存时间可低至1-2年[1]。根据世界卫生组织《Globalstatusreportonalcoholandhealth2018》指出我国人均的酒精消费量呈增加状态，而戒酒率趋于下滑，鉴于全球酒精消费模式的时间趋势，酒精性肝炎的发病率，尤其是年轻人的发病率，预计将在未来十年内上升。2016年，酒精饮料是死亡和残疾的第七大主要风险，占男性死亡率的6.8%，占女性死亡率的2.2%[2]。大量研究表明，长期过量饮酒会导致严重的肝脏损伤，脂肪肝常见于大量酗酒的人群中，长期大量饮酒甚至会进一步发展为肝细胞癌而造成死亡[3]。而酒精性肝病的治疗大多为中医药方面的治疗，许多中药单体可以在酒精性肝病的不同环节产生药效，可以很好地防治该病，如葛根素、薯蓣皂苷元、绿原酸等中药活性提取物。葛根素（puerarin）有一定的解酒功效与预防醉酒效果，可以通过提高抗氧化酶的活性而达到保肝护肝的作用[4]。葛根素可降低由酒精导致的ALT、AST水平升高[5]，和通过调节谷胱甘肽转移酶（GST）、谷胱甘肽(GSH)、血浆抗利尿激素（ADH）、丙二醛（MDA）来抑制自由基引起的脂质过氧化并减少肝细胞损伤[6]。另外，有研究表明葛根素有抗器官纤维化的作用如心脏、肝、肺、肾、子宫[7]。而葛根素在酒精性脂肪肝方面的研究中，有实验表明了葛根素能够预防酒精性脂肪肝小鼠的肝脏脂质沉积也能够调节酒精性脂肪肝小鼠肝脏的脂质代谢[8]。薯蓣皂苷元是一种天然的甾体皂苷元，存在于各种植物家族中，如龙舌兰、蓣蓿、百合科、茄科和荆芥科。各种研究表明，薯蓣皂苷元对各种疾病如癌症、心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、神经退行性疾病等都有治疗或预防作用[9]。有研究发现，使用薯蓣皂苷元治疗LPS/D-Gal诱导的急性ALF可以通过抑制炎症和氧化应激相关过程来减少肝损伤[10]。薯蓣皂苷元有对高脂血症的潜力，用于抑制肠道对脂质的吸收、促进胆固醇转化为胆汁酸及其排泄、胆固醇转运调节、抗氧化和脂蛋白没活性、抑制内源性脂质生物合成以及调节与脂质机制相关的转录因子[11]。绿原酸是一种有机化合物，广泛存在于杜仲科、忍冬科以及菊科等植物中。据研究，绿原酸有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降压、降血糖、降血脂、改善雄性生殖问题、保肝护腰、抗菌、抗白血病、抑制肥胖等生物活性作用[12]。有研究证明了绿原酸对肝损伤的保护作用，观察到酒精诱导的脂肪变性，凋亡细胞死亡和由于氧化应激水平降低而导致的纤维化减少。这些发现表明了绿原酸可通过抑制氧化应激来减弱酒精性肝损伤[13]。目前，酒精饮料在社会交往中的消费量日趋上升，酒精也成为了部分人群不可避免的饮料，但是酒精饮料造成的各种疾病已被大量报道[14-17]，对人体产生极大伤害，尤其是肝脏损害引起酒精性肝病。所以对于本课题研究查阅了大量文献，筛选了以上三种保肝护肝的中药活性提取物——葛根素、薯蓣皂苷元、绿原酸，从发病根源酒精入手，将以上三种中药单体按合适剂量加入本实验所制药酒中，本实验所自配药酒目的是想在一定程度上有对肝脏的缓解和保护作用，本药酒保留了与茅台酒相似的风味，且吴君等[18]对茅台酒进行的回顾性流行病学研究表明，除脂肪肝外，茅台酒的的饮用人群同纤维化、肝硬化无明显的相关性。本药酒希望达到与茅台酒相似的市场欢迎程度的基础上，再加入保肝护肝的中药单体，本实验为探究所制药酒的效果而开展有效性实验，发现并确定其对肝脏损害的缓解作用，且为拓展以上三种中药活性单体在临床的应用提供实验依据。

2材料与方法2.1材料2.1.1动物表2-1本实验动物信息材料来源SPF级KM雄性小鼠广东省医学动物实验中心2.1.2试剂表2-2本实验中使用的实验试剂及固体信息试剂或固体制剂来源市售白酒北京红星股份有限公司基酒广东药科大学药理学教研室（提供）甘油广东药科大学药理学教研室（提供）食品级矫味剂广东药科大学药理学教研室（提供）GOT试剂盒南京建成生物工程研究所GPT试剂盒南京建成生物工程研究所超纯水屈臣氏0.9%生理盐水广东药科大学实验室自配多聚甲醛广东药科大学实验室自配绿原酸西安小草植物科技有限公司薯蓣皂苷元西安小草植物科技有限公司葛根素西安小草植物科技有限公司2.1.3仪器表2-3本实验种所使用的仪器/耗材信息仪器/耗材型号/规格生产公司台式高速冷冻离心机TD5K-Ⅱ东旺仪器超声波清洗仪JP-030S深圳市洁盟清洗设备有限公司雪花制冰机柯尼塔中外合资广州柯尼塔电器有限公司全自动酶联检测仪MultiskanGO赛默飞科技实验室电热鼓风干燥箱GZX-9023MBE上海博讯实业有限公司电子天平SHIMADZU梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司电子显微镜——Nikon涡旋振荡器MX-E美国安胜科技有限公司移液枪5-1000μlThermo灌胃针8号北京中科恒天科技有限公司96孔细胞培养板——FisherScientificEP管4ml、10ml、50ml广东药科大学药理学教研室（提供）移液枪枪头各种型号Servicebio2.2实验方法2.2.1药酒配制首先，在500ml基酒中加入若干食品级矫味剂，封口，放入超声仪中超声30min，再加入0.0469g绿原酸、0.1875g薯蓣皂苷元、0.1845g葛根素等中药单体，（若遇到难溶中药单体，先将单体加入10mlEP管中，将基酒加至10ml，用涡旋仪涡旋15min，若还未溶解，40℃水浴溶解30min）封口，超声30min即得到本实验所需药酒。2.2.2动物分组及给药随机选择体重在15-30g范围内的SPF级雄性健康昆明小鼠，适应性喂养一周后，随机分为空白组/K组、给药1组（给予药酒）/Y组、给药2组（给予市售白酒+药酒）/YE组、模型组1组（给予基酒）/D组、模型2组（给予市售白酒）/E组，共五组。空白组/K组10只雄鼠、给药1组（给予药酒)/Y组19只雄鼠、给药2组（给予市售白酒+药酒）/YE组18只雄鼠、模型组1组（给予基酒）/D组16只雄鼠、模型2组（给予市售白酒）/E组12只雄鼠。本研究经广东药科大学动物实验伦理委员会批准（gdpulac2023163）。2.2.3造模方法除空白组每日饮用水为纯净水，灌胃纯水，其余各组饮用水改为3%乙醇饮料，即配制400ml饮用水时混入12ml浓度为53%的基酒，同时灌服53%酒精饮料3ml/kg，每日两次，间隔12h，连续至少12周。2.2.4雄性小鼠肝组织HE染色切片[19]每组来自同一肝脏部位的肝组织用10%固定甲醛溶液。肝脏组织脱水，清除，嵌入石蜡，切片并用苏木精-伊红（HE）染色，以及在200×在显微镜下放大。在光学显微镜下观察各组雄性小鼠肝组织形态情况，例如观察肝小叶结构、纤维增生、脂肪泡的蓄积情况、炎症细胞浸润、肝细胞变性、肝细胞坏死等情况。于200×倍拍照保存分析，每组小鼠拍摄10张图片，并用imageJ软件计算坏死细胞数目，再用SPSS统计分析软件对其分析。2.2.5肝脏系数的测定造模结束后，摘取肝脏组织，将表面水分吸干，称取肝脏重量及小鼠的体重，肝脏系数[20]=肝脏重量（g）/体重（g）×100%。正常时肝脏重量与体重的比值恒定。动物肝脏受到损害后，受损肝脏重量可能会发生改变，故肝脏系数也随之改变。肝脏系数增大，说明肝脏充血、水肿或者增生肥大等；肝脏系数减小，说明肝脏萎缩及其退行性改变。2.2.6血清GOT和GPT检测[21]GOT与GPT均是反映肝脏受损的敏感指标[19]。GOT为谷草转氨酶，GPT为谷丙转氨酶。长期大量饮酒后会出现肝细胞损伤，血清内谷草转氨酶（GOT）与谷丙转氨酶（GPT）浓度升高。因此采用GOT/GPT试剂盒检测血清内转氨酶酶活力值，可以直观的探究到肝脏损伤的情况。检测步骤按照说明书进行。2.2.7给药期间记录数据雄性小鼠摄食量变化：每日定时称量小鼠摄食量，并对每一组进行对比分析，得出折线统计图。雄性小鼠饮水量变化：每日定时量取小鼠饮水量，并对每一组进行对比分析，得出折现统计图。雄性小鼠体重变化：每五日为一个周期对小鼠进行体重称量，观察小鼠的体重变化，并得出折现统计图。

3实验结果3.1小鼠一般情况及解剖整个实验期间，若有小鼠死亡，及时补充死亡小鼠空缺并记录死亡时间。动物实验前10天，给药剂量为14.4ml/kg，空白组/K组未见死亡，给药1组/Y组死亡12只，给药2组/YE组死亡8只，造模1组/D组死亡9只，造模2组/E组死亡10只。解剖观察其原因发现，小鼠酒精摄入过量导致胃出血气胀而引起死亡，于是减少给药剂量至3ml/kg，重新开始实验。更改给药剂量后至动物实验结束，空白组未见死亡；给药1组共19只，死亡11只，存活率为42.1%；给药2组共18只，死亡8只，存活率为55.6%；模型1组共16只，死亡9只，存活率为43.8%；模型2组共12只，死亡7只，存活率为41.6%，以上数据发现，给药2组即给予药酒和市售白酒组的小鼠存活率较高。实验结束对小鼠进行解剖摘取肝脏，根据观察，各组具有相似的肝脏大体观，没有肉眼可见明显的肝脏组织病变，但模型组D组、E组小鼠肝脏轻微呈黄褐色（如图3.1-1）。12周末时各组的肝/体重比率如表3.1-1，各组肝脏系数没有特别明显的差别，但给药1、2组即给予药酒和给予50%药酒+50%市售白酒组与模型1、2组即给予基酒和市售白酒组的肝脏系数都明显略高于空白对照组。本实验摄入了酒精的雄性小鼠肝脏系数增大，说明摄入了酒精的雄性小鼠的肝脏均有损伤，可能出现肝脏的水肿、充血或增生肥大。本实验摄入了酒精的小鼠肝脏系数均有轻微增大，说明小鼠的肝脏出现轻微损伤。表3.1-112周末时各组小鼠体重/肝重及肝脏指数Table3.1-1Bodyweight/liverweightandliverindexofmiceineachgroupattheendof12weeks组别数量（只）初始体重（g）最终体重（g）肝重（g）肝脏系数（%）空白组/K组824.91±1.3927.63±0.731.75±0.256.26±0.86模型1组/D组814.01±0.6224.83±0.801.70±0.106.85±0.27模型2组/E组813.38±0.4927.96±1.491.89±0.156.76±0.32给药1组/Y组1215.09±1.4122.24±2.321.58±0.147.65±1.61给药2组/YE组1220.65±6.5625.88±2.581.86±0.227.11±0.82图3.1-112周末时K组、D组、E组、Y组、YE组小鼠肝脏大体观Figure3.1-1GrossviewoftheliverofmiceingroupsK,D,E,YandYEattheendof12weeks3.2肝组织HE染色切片光学显微镜下观察结果苏木精-伊红染色法[22]，简称HE染色法（hematoxylin-eosinstaining）,是一种石蜡切片技术，苏木精hematoxylin为碱性染液，伊红eosin为酸性染液。苏木精染液主要将胞质内的核酸和细胞核内的染色质染成紫蓝色；伊红染液主要将细胞质和细胞外基质中的成分染成红色。本实验用了此法对肝脏组织进行染色，观察肝脏中细胞的整体情况，并对切片进行拍照计算肝细胞坏死率，判断肝脏是否有损伤。实验12周后，运用H&E染色对各组小鼠肝脏组织病理学观察进行了检测。在光镜下观察发现，空白组/K组的肝细胞索以放射状方式排列，肝小叶、血窦清晰；细胞核大且呈圆形，胞浆红染均匀；细胞大小适中，形态正常。与空白对照组/K组雄性小鼠对比，模型组雄性小鼠肝组织结构紊乱，有明显的炎症堆积，尤其模型2组/E组雄性小鼠肝细胞索结构消失，胞核皱缩，炎症堆积明显。与模型组雄性小鼠相比，给药组雄性小鼠肝组织形态有所改善，尤以给药2组/YE组最为明显，肝细胞索围绕中央静脉以放射状排列，细胞核轻微皱缩，但给药1组/Y组肝组织结构较紊乱。如图3.2-1所示。实验12周后，对肝脏HE染色切片进行观察，每组小鼠随机选拍10张图片并用mageJ软件对坏死细胞进行计数，得出每张图片肝细胞坏死率，再用SPSS统计分析软件对其进行分析，得出结果，与空白组/K组对比，模型1组即基酒组和模型2组即市售白酒组的肝细胞坏死率高于空白对照组，差异具有统计学意义（P<0.001），给药组的肝细胞坏死率也显著高于空白组，差异具有统计学意义（P<0.05）；与基酒组和市售白酒组对比，给药2组/YE组的肝细胞坏死率低于基酒组和市售白酒组，肝细胞坏死率显著下降，差异具有统计学意义（P<0.001）。根据结果可以认为给药组对酒精性肝损伤有一定的减轻作用，但药酒+市售白酒组较优。如表3.2-1和图3.2-2所示。图3.2-1各组雄性小鼠肝脏组织HE染色切片图（200×）（依次为：空白组、基酒组、市售白酒组、药酒组、药酒+市售白酒组）Figure3.2-1HE-stainedsectionsoflivertissueofmalemiceineachgroup(200×)（Inorder:blankgroup,basewinegroup,commerciallyavailablewhitewinegroup，medicinalwinegroup,medicinalwine+commerciallyavailablewhitewinegroup）表3.2-1肝脏HE切片中各组平均细胞坏死率Table3.2-1NecrosisrateofeachgroupofcellsinHEsectionsoftheliver平均空白组/K组模型1组/D组模型2组/E组给药1组/Y组给药2组/YE组正常细胞（个数）1557890138131坏死细胞（个数）6910311711287总细胞数224181207250218肝细胞坏死率（%）30.7256.89***56.68***44.90*#39.77##注：与K组比较，*P<0.05,***P<0.001；与D组和E组比较，#P<0.05,##P<0.01。图3.2-2肝脏HE切片中各组细胞平均坏死率Figure3.2-2NecrosisrateofeachgroupofcellsinHEsectionsoftheliver3.3血清GOT和GPT检测结果由GOT试剂盒检测结果可知，与空白对照组对比，给药组的血清GOT酶活力值均低于空白对照组，分别为26.045μ/L和28.099μ/L，差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组和给药组对比，酒精干预的模型组的GOT酶活力值均高于空白对照组和给药组，分别为50.411μ/L和55.976μ/L，均有一定程度的上升，差异具有统计学意义（P<0.05）。如表3.3-1所示，图3.3-1所示。由GPT试剂盒检测结果可知，与空白对照组对比，给药组的血清GPT酶活力值低于空白对照组，分别为17.988μ/L和6.27μ/L，尤其是YE组即给与药酒+市售白酒组，差异具有统计学意义(P<0.05)。与给药1组和给药2组相比，酒精干预的模型组血清GPT酶活力值均高于各组，分别为29.382μ/L和21.988μ/L，尤其与给药2组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。而与空白组相比，酒精干预的模型组血清GPT酶活力值无明显变化。如表4.3-1所示，图3.3-2所示。从整体来看，摄入了酒精的基酒组和市售白酒组的GOT和GPT酶活力值均高于空白对照组，说明酒精对雄性小鼠的肝脏组织造成了一定损伤，而使用了自配药酒干预后，血清谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）酶活力值均有所下降，有的甚至比空白对照组的血清转氨酶水平低，特别是50%药酒+50%市售白酒组，充分说明了自配药酒可在一定程度上缓解酒精所致的肝脏损伤。表3.3-1血清谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）酶活力值Table3.3-1Serumglutamicoxaloacetictransaminase(GOT)andglutamyltransaminase(GPT)enzymeactivityvalues(μ/L)K组D组E组Y组YE组GOT酶活力值43.05750.411*55.976*26.045*#28.099*#GPT酶活力值18.97329.382**21.988*17.988*#6.27*##注：与K组比较，*P<0.05；与D组和E组比较，#P<0.05。图3.3-1各组血清谷草转氨酶（GOT）酶活力值Figure3.3-1Serumglutamicoxaloacetictransaminase(GOT)enzymeactivityvaluesforeachgroup注：与K组比较，*P<0.05,**P<0.01；与D组和E组比较，#P<0.05,##P<0.01。图3.3-2各组血清谷丙转氨酶（GPT）酶活力值Figure3.3-2Serumglutathioneaminotransferase(GPT)enzymeactivityvaluesforeachgroup3.4给药期间数据结果3.4.1雄鼠平均每日摄食量记录每只雄鼠每日的摄食量，以每只雄鼠平均摄食量为纵坐标，以每七天一个周期为横坐标，对雄鼠平均每日摄食量变化作图（如图3.4-1所示），结果发现对比空白组，其余组别摄食量均较小，排除末段可能因误差造成的全体摄食量上升，截取后发现给药组及模型组的摄食量均呈现下降趋势，造成的原因可能是饮酒直接刺激胃黏膜，与其代谢中间产物乙醛等共同导致了胃黏膜损伤，对小鼠产生了胃肠道刺激等症状。图3.4-1雄性小鼠每日摄食量变化Figure3.4-1Variationofdailyfoodintakeinmalemice3.4.2雄鼠平均每日饮水量记录雄鼠平均每日饮水量，以雄鼠平均每日饮水量为纵坐标，以每七天一个周期为横坐标，对雄鼠平均每日饮水量作图（如图3.4-2所示），结果发现对比空白组，模型组即给予基酒与市售白酒组小鼠自由饮水较空白组多，而给药组即给予药酒+市售白酒组和药酒组稳定在空白组饮水量周围。图3.4-2雄性小鼠饮水量变化Figure3.4-2Changesindailywaterconsumptioninmalemice3.4.3雄鼠体重变化以雄性小鼠平均体重（单位：g）为纵坐标，以每五日一周期为横坐标，对雄性小鼠体重变化作折线统计图（如图3.4-3所示），结果发现实验前期，除空白组小鼠外，其余组别小鼠体重骤降，原因是，给药前期所使用的给药剂量酒精浓度过高，给药剂量过多，造成小鼠酒精性中毒，处于昏沉状态无法正常进食，体重下降，调整剂量后，小鼠体重缓慢回升，并增长趋于平缓。但是与空白组对比，体重增长速度较为缓慢。图3.4-3雄性小鼠体重变化Figure3.4-3Bodyweightchangesinmalemice整个实验期间发现，模型组雄性小鼠即给予市售白酒及基酒的小鼠存活率较低，而给药组雄性小鼠，尤其是给药2组即给予药酒+市售白酒组的小鼠存活率相对于其他组而言较高。解剖观察发现死亡原因主要是小鼠酒精摄入过多导致胃出血气胀及未知的肝损伤，即酒精性中毒。且本实验摄入了酒精的小鼠肝脏系数均有小幅增大，说明酒精导致雄性小鼠肝脏有一定的毒性作用。而前10天，由于给酒量过大而发生摄入酒精小鼠大量死亡，可能造成了急性酒精性肝损伤。通过光学显微镜下观察得出，相比于空白对照组，药酒组、药酒+市售白酒组、基酒组和市售白酒组，胞核均有皱缩现象，尤以模型组最为明显。相比于模型组，给药组雄性小鼠肝组织形态有所改善。对肝脏组织HE染色切片用mageJ软件对坏死细胞进行计数得出，模型组即给予市售白酒组和基酒组的平均肝细胞坏死率较高，分别为56.89%、56.68%；用SPSS统计软件对其进行分析，结果发现给药2组即给予药酒+市售白酒组的肝细胞坏死率相比与模型组较低，其差异具有统计学意义（P<0.01）。由GOT/GPT试剂盒对血清检测结果可知，基酒组和市售白酒组的血清转氨酶均高于空白对照组（P<0.05），而使用了自配药酒干预的雄性小鼠，相比于模型组（基酒组与市售白酒组）转氨酶各项指标均有所下降（P<0.05），说明了自配药酒可在一定程度缓解酒精所致的肝脏损伤。

4分析与讨论随着社会经济的发展，人们越来越意识到饮酒会给社会、健康和经济带来严重的负担，虽然适度饮酒有益于身体健康，使身心愉悦，但是长期过量饮酒会导致酒精性肝病。而肝脏是人体的主要代谢器官之一，酒精性肝病是因为长期大量饮酒而造成的肝脏疾病。酒精相关的肝病亚型包括单纯性和酒精性脂肪肝炎、脂肪变性、肝纤维化、肝硬化、肝细胞癌[23]。除此之外，一位成年人每日摄入酒精超过60ml的人群中有60%会发展为酒精性脂肪肝，而每天摄入超过120ml酒精的人群发展为肝硬化的概率非常高[24,25]。根据世界卫生组织《Globalstatusreportonalcoholandhealth2018》指出在过去的2018年里，随着中国经济的爆炸性增长和社会开放程度的提高，中国的酒精消费量急剧增加。所以饮酒是社会发展不可避免的社交活动，但是适度饮酒也并未有具体的研究表明其阈值，若习惯性的饮酒，在体内造成堆积也是不可估量的。所以本实验希望从酒这个发病根源入手，配出能够对酒精性肝损伤有缓解作用的药酒。对于酒精性肝损伤的治疗的药物，国内外均有大量的研究，目前西药如降脂药、抗氧化剂、抗内毒素剂等均为常用治疗酒精肝损伤的药物，还有秋水仙碱、胰岛素、丙基硫氧嘧啶也有一定的疗效。除此之外，还有几种临床常用改善肝功能药物如还原型谷胱甘肽、多烯磷脂酰胆碱[26]。虽然这几种在临床治疗酒精性肝病的使用率高，但是西药的治疗存在一定的不良反应，如胃肠道刺激反应、血糖水平升高、心肌受到伤害等[27]。而中药对于酒精性肝病治疗也日渐发展，主要是通过改善肝脏功能、减轻氧化应激反应、抗炎保肝作用、抑制细胞凋亡四个方面来治疗酒精性肝损伤[28]。例如中药活性提取物薯蓣皂苷元可以防止小鼠脂质积累、氧化应激、细胞损伤和肝脏轻度炎症，也有研究表明薯蓣皂苷元可以通过调节SIRT2相关脂肪酸的摄取来减轻糖尿病的非酒精性脂肪肝病[29]。大量实验表明肝脏疾病的发生和发展与肠道微生物群的变化，长期酗酒会改变结构和肠道菌群在体内的分布，引起粘膜损伤和细菌易位，减少有益细菌的数量，增加有害细菌数量，加重肝细胞损伤，研究有表明通过调节肠道微生物群的多样性，组成肠道微生物群可以优化，有益细菌的增加可以促进，并能抑制病原菌的生长，从而起到对酒精性肝损伤的保护作用[30]。如灵芝孢子粉可用作为益生元调节肠道微生物，从而改善身体健康。大量研究表明，灵芝孢子粉可以减少细胞损伤，促进肝细胞再生，对肝脏起到保护作用[31]。又如沙棘和膜黄芪作为中药，具有药食同源性，具有良好的肝脏保护作用，其多糖可以调节肠道菌群[32]。大量证据表明，mTOR的激活可减少与饮酒和新陈代谢相关的肝损伤，而葛根素是一种从葛根（野生）中分离出的天然生物活性黄酮化合物，可以通过抗炎、抗酒精中毒和调节雷帕霉素（mTOR）的机制靶标提供肝脏保护[33]。绿原酸是人类饮食中最丰富的多酚化合物之一，绿原酸的作用机制主要涉及通过调节肝过氧化物酶体增殖物激活的受体γ或肝脏X受体-α（PPARαγ，LXRα）在肝脏中摄取和合成脂肪酸，而异绿原酸B的抗氧化作用和抑制促纤维化因子通过Nrf2和miR-122/HIF-1α信号通路介导，以防止非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的纤维化[34]。除了上述几种中药或中药活性提取物外，还有很多可用于缓解或治疗肝损伤的中药活性提取物，如黄酮类化合物槲皮素、黄芩素、木犀草素等，多酚类化合物白藜芦醇、姜黄素、丹参酸，萜类化合物白桦酸、熊果酸等，皂苷类薯蓣皂苷、人参皂苷等，生物碱小檗碱、五味子苷等[35]。而对于药酒的配备，本实验希望做出有市场前景的药酒保健品销售，以茅台酒作为参考发现，吴君等[18]对茅台酒进行的回顾性流行病学研究表明，除脂肪肝外，茅台酒的的饮用人群同纤维化、肝硬化无明显的相关性。适量的饮用茅台酒人群比饮用其他酒人群发生肝细胞癌的风险较低。为了与茅台酒相媲美，本药酒加入了一系列食品级矫味剂以调配口感，经过反复的对比，反复的测试，经各年龄段志愿者品尝打分，最终确定了食品级矫味剂的剂量及药酒配方。综上所述，为能够配出对酒精性肝损伤有缓解或保护作用的药酒，本实验所自配的药酒加入了绿原酸、葛根素和薯蓣皂苷元三种保肝护肝中药活性提取物，对所配药酒进行了有效性实验——动物实验，将小鼠分为了五个组别，分别为空白组/K组，药酒组/Y组，药酒+市售白酒组/YE组，基酒组/D组，市售白酒组/E组。其中发现给药组尤其是药酒与市售白酒搭配的组别对肝损伤缓解作用的效果优于各组。本实验的发展前景是可观的，望在与茅台酒相似风味的基础上，又能达到缓解或预防酒精性肝损伤等酒精引起的健康问题。

5结论用市售白酒与基酒成功建立两个雄性小鼠酒精性肝损伤模型。药酒组与药酒+市售白酒搭配组均有缓解酒精性肝损伤的作用，其中以药酒+市售白酒搭配组的效果最佳。

参考文献BruhaR,DvorakK,PetrtylJ.Alcoholicliverdisease[J].WorldJHepatol.2012,4(3):81-90.BurtonR,SheronN.Nolevelofalcoholconsumptionimproveshealth[J].Lancet.2018,392(10152):987-988.Warren,KR,MurrayMM.Alcoholicliverdiseaseandpancreatitis:GlobalhealthproblemsbeingaddressedbytheUSNationalInstituteonAlcoholAbuseandAlcoholism[J].JGastroenterolHepatol,2013,28Suppl1:4-6.曾文燊,黄达荣,谢斯威,等.葛根异黄酮组成、结构及功效机制研究进展[J].食品科学,2023,44(01):353-361.CaiChen,XiaojieLi,etal.OrientaltraditionalherbalMedicine——PuerariaeFlos:Asystematicreview[J],JournalofEthnopharmacology.2023,306(116089):76-103.L.

Yue,

L.

Chen,

J.

Kou,

etal.Recentadvancesofdiosgenininitspharmacologicactivitiesandmechanism[J],Chin.J.Clin.Pharmacol.Ther.,2010,15(2):233-237.张璋,陈卫民,毛舜等.葛根素抗器官纤维化作用机制的研究进展[J].湖南中医药大学学报,2022,42(12):2128-2133.张静文.葛根素对小鼠酒精性脂肪肝保护作用的研究[D].湖北医药学院,2022.SYEed-MahdiMohamadi-Zarch,TourandokhtBaluchnejadmojarad,DavoodNourabadi,etal.ProtectiveeffectofdiosgeninonLPS/D-Gal-inducedacuteliverfailureinC57BL/6mice[J].MicrobialPathogenesis,2020,146(104243):37-44.PrajyaArya,MohonaMunshi,etal.Chemistry,extraction,quantificationandhealthbenefits[J].FoodChemistryAdvances,2023,02(100170):23-38.李望,秦佳梅.绿原酸提取分离及其生物活性研究进展[J].人参研究,2023,35(1):43-50.Hyunjin

Kim,

JeongHoon

Pan,

SungHwan

Kim,etal.Chlorogenicacidamelioratesalcohol-inducedliverinjuriesthroughscavengingreactiveoxygenspecies[J].\o"GotoBiochimieonScienceDirect"Biochimie,2018,150(14):131-138.LouvetA,LabreucheJ,ArtruF,etal.Maindriversofoutcomedifferbetweenshorttermandlongterminseverealcoholichepatitis:Aprospectivestudyofhepatology[J].Hepatology,2017,66(5):1464-1473.LacknerC,SpindelboeckW,HaybaeckJ,etal.Histologicalparametersandalcoholabstinencedeterminelong-termprognosisinpatientswithalcoholicliverdisease[J].JHepatol,2017,66(3):610-618.SingalAK,KuoYF,AnandBS.HepatitisCvirusinfectioninalcoholichepatitis:prevalencepatternsandimpactonin-hospitalmortality[J].EurJGastroenterolHepatol,2012,24(10):1178-1184.AskgaardG,LeonDA,KjaerMS,etal.Riskforalcoholiclivercirrhosisafteraninitialhospitalcontactwithalcoholproblems:Anationwideprospectivecohortstudy[J].Hepatology,2017,65(3):929-937.AdachiM,IshiiH.Roleofmitochondriainalcoholicliverinjury.FreeRadicBiolMed.2002,32(6):487-491.kagiJHSchafferA.Biochemistryofmetallothionein.Iochemistry.1988,27(23):8509-8515.宋远.穿心莲内酯对酒精性肝损伤保护作用的研究[D].吉林大学2021.中国医学百科全书编辑委员会编；张世显主编；赵易，史博之，郭万学副主编.中国医学百科全书二十七诊断学.上海:上海科学技术出版社.1984.刘士敬，王世伟，杨春霞等.转氨酶居高不下的3个治疗对策[N].医药导报,2007-05-16(B13).张晓云.苏木精-伊红染色用于临床病理诊断的价值探究[J].实用医技杂志,2021,28(2):247-248+297.KimD,CholankerilG,LiAA,etal.Trendsinhospitalizationsforchronicliverdisease-relatedliverfailureintheunitedstates,2005-2014.LiverInt,2019,39(9):1