敏健脾益肾丸的指纹图谱研究

健脾益肾丸的指纹图谱研究【摘要】目的：建立健脾益肾丸高效液相(HPLC)指纹图谱的方法，为健脾益肾丸的质量控制提供科学依据。方法：采用WatersXSelectHSST3(4.6×250mm，5µm)色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为220nm，柱温为25℃。采用国家药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件对10批健脾益肾丸样品的色谱图进行相似度评价并建立健脾益肾丸指纹图谱。通过与单味药材对照溶液、混合对照品溶液所得色谱峰的保留时间和紫外吸收对比，对健脾益肾丸指纹图谱共有峰进行归属与指认。结果：经过精密度、重复性、稳定性考察，健脾益肾丸指纹图谱标定的24个共有峰的相对保留时间RSD均小于2%。10批次的健脾益肾丸样品的相似度均在0.9~1.0之间，符合中药指纹图谱的要求。对标定的24个共有峰进行归属，其中2、5号峰归属于黄芪，1、10、11、13、14号峰归属于丹参，3、7、8、12、15、16、18、20、21、23号峰归属于大黄，6、17、19、22、24号峰归属于炙甘草，4、9号峰归属于酒苁蓉。通过对照品的指认，5号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6号峰为甘草苷、11号峰为丹酚酸B、13号峰为丹酚酸A、15号峰为芦荟大黄素、16号峰为大黄酸、20号峰为大黄素、21号峰为大黄酚、23号峰为大黄素甲醚。结论：本研究建立的健脾益肾丸HPLC指纹图谱方法稳定性佳、重复性好、可操作性强，可为健脾益肾丸的质量控制提供参考。【关键词】健脾益肾丸；指纹图谱；质量控制；高效液相色谱法STUDYONFINGERPRINTOFJIANPIYISHENPILLS[Abstract]Objective:ToestablishaHPLCfingerprintmethodforJianpiYishenPillsandprovidescientificbasisforthequalitycontrolofJianpiYishenPills.Method:UsingWatersXSelectHSST3(4.6×250mm,5µm)chromatographiccolumn,withacetonitrile0.1%phosphoricacidaqueoussolutionasmobilephase,gradientelution,flowspeedof1.0ml/min,detectionwavelengthof220nm,columntemperatureof25℃.ThesimilarityevaluationsystemfortraditionalChinesemedicinechromatographicfingerprintsbeingusedasaguidelinebytheNationalPharmacopoeiaCommissionwasusedtoconcludethesimilarityofthechromatogramsof10batchesofJianpiYishenPillssamplesandestablishthefingerprintofJianpiYishenPills.BycomparingtheretentiontimeandUVabsorptionofthechromatographicpeaksobtainedfromthesoleherbreferencesolutionandthemixedreferencesolution,thequotidianpeaksinthefingerprintofJianpiYishenPillswereassignedandidentified.Result:Afterinspectionofprecision,repeatability,andstability,therelativeretentiontime(RSD)ofthe24commonpeakscalibratedbythefingerprintofJianpiYishenPillswerealllessthan2%.Thesimilarityof10batchesofJianpiYishenPillssamplesisbetween0.9and1.0,whichmeetstherequirementsoftraditionalChinesemedicinefingerprint.Assignthe24commonpeakscalibrated,amongwhichpeaks2and5belongtoAstragalusmembranaceus,peaks1,10,11,13,and14belongtoSalviamiltiorrhiza,peaks3,7,8,12,15,16,18,20,21,and23belongtoRhubarb,peaks6,17,19,22,and24belongtoroastedlicorice,andpeaks4and9belongtoCistanchedeserticola.Accordingtotheidentificationofthereferencesubstance,the5thpeakisFructusAureolarisisoflavoneglucoside,the6thpeakisglycyrrhizin,the11thpeakissalvianolicacidB,the13thpeakissalvianolicacidA,the15thpeakisaloeemodin,the16thpeakisrhein,the20thpeakisemodin,the21stpeakisemodin,andthe23rdpeakisemodinmethylether.Conclusion:TheHPLCfingerprintmethodcreatedinthisstudyhasexcellentstability,repeatability,andoperability,whichcanprovidereferenceforthequalitycontrolofJianpiYishenPills.[Keywords]JianpiYishenPillsfingerprintsqualitycontrolhigh-performanceliquidchromatography目录TOC\o"1-3"\h\u1前言 [14]，通过该系统不难看出10批健脾益肾丸的相似度均在中药指纹图谱所规定的指标0.9~1.0，符合标准，因此可以得知这10批样品相似度很高，这10批样品具有较高的一致性，生产该制剂的的工艺操作良好稳定，生产质量控制稳定，无明显的生产问题。本次实验研究在于指纹图谱的建立，侧重于鉴定和定性实验，未进行含量测定相关实验，之后的实验可着重于定量问题，对健脾益肾丸进行含量测定的实验，可以为该制剂的质量控制提供更全面的标准参考。由于该研究有对色谱图中的24个共有色谱峰进行归属，并得出这24个共有色谱峰归属于黄芪、丹参、大黄、炙甘草、酒苁蓉的结论，所以本研究所建立的方法还可以用于黄芪、丹参、大黄、炙甘草、酒苁蓉五味中药的鉴定，或可以为其他含有这五味中药的中药制剂的鉴定提供一定的参考数据，具有一定的参考价值。结论本研究建立了健脾益肾丸高效液相指纹图谱的方法，经过多重条件筛选实验，确定具体色谱条件及溶液制备的方法，经过方法学考察（精密度、稳定性、重复性实验），确认该方法稳定性佳、重复性强、可操作性好，可以为健脾益肾丸在生产上的质量标准提供一定参考价值，为该制剂的质量控制提供一定科学依据。利用相似度评价软件对10批健脾益肾丸进行相似度评价，所选取的10批健脾益肾丸相似度符合标准要求，侧面反映出该制剂的生产工艺稳定良好均一。参考文献李雨彦,林韦翰,李顺民.李顺民治疗慢性肾衰处方用药分析[J].世界中医药,2020,15(02):296-300.]杨栋,李顺民,李雨彦.李顺民教授运用肾衰1号方治疗慢性肾衰思路及验案[J].世界中医药,2017,12(12):3038-3040.KimYeonBoketal.AccumulationofflavonoidsandrelatedgeneexpressionsindifferentorgansofAstragalusmembranaceusBge.[J].Appliedbiochemistryandbiotechnology,2014,173(8):2076-85.姚娜,黄燕明,李雪银等.HPLC同时测定炙黄芪配方颗粒特征图谱及毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量[J].中国现药,2019,21(06):814-816+825.GuanJiaoetal.UHPLC-MS/MSMethodforQuantifyingFangchinoline,TetrandrineandCalycosin-7-O-β-D-GlucosideofFangjiHuangqiDecoctioninRatPlasmaandItsApplicationtoaPharmacokineticStudy.[J].Journalofchromatographicscience,2022,60(5):458-464.YaoLanetal.EffectsofsalvianolicacidAandsalvianolicacidBinrenalinterstitialfibrosisviaPDGF-C/PDGFR-αsignalingpathway[J].Phytomedicine,2022,106:154414-154414.原景,杜韩,万梅绪等.丹参有效成分及丹参类制剂抗炎药理作用的研究进展[J].药物评价研究,2021,44(11):2322-2332.李娜,张晨,钟赣生等.不同品种甘草化学成分、药理作用的研究进展及质量标志物（Q-Marker）预测分析[J].中草药,2021,52(24):7680-7692.贾志鑫,刘力榕,张银环等.UHPLC-FLD法测定不同产地大黄中6种大黄蒽醌[J].药物评价研究,2022,45(05):926-931.李鑫,庄晨颖,董雪容等.大黄蒽醌物质研究与应用概述[J].青海草业,2018,27(04):49-53.聂燕,汪滢,赵璐等.