SNT 2533-2010进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法Determinationofcorticosteroidsandprogesteronesin2010-03-02发布国家质量监督检验检疫总局I本标准的附录A、附录B、附录C和附录D均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国河南出入境检验检疫局负责起草。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。1进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法1范围孕酮等11种孕激素类药物含量检测的液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)和液相色谱法(LC)检测本标准适用于膏状、乳状、水状化妆品中17种糖皮质激素和11种孕激素含量检测的液相色谱方法和液相色谱-质谱/质谱确证方法。本标准的液相色谱-质谱/质谱法为仲裁法。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究是否可使用这些文件的最新版本…凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。3试样的制备与保存方法一液相色谱-质谱/质谱法4方法提要化妆品中糖皮质激素、孕激素采用乙腈超声提取，吹于浓缩后经固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/除特殊注明外，水为GB/T6682规定的一级水。5.4甲醇-水(30+70,体积比)溶液：量取30mL甲醇与70mL水混合。5.510mmol/L乙酸胺溶液：称取0.77g乙酸胺(5.3),用水溶解并定容至1000mL。5.6乙腈-10mmol/L乙酸胺溶液(70+30,体积比):量取70mL乙腈与30mL10mmol/L乙酸胺溶液(5.5)混合。5.7标准品：标准品名称及CAS号参见附录A中表A.1,纯度大于等于99%。25.8标准储备溶液：分别称取糖皮质激素、孕激素类标准品各0.010g(5.7),用甲醇溶解并定容至5.9标准中间溶液：准确移取1.0mL标准贮备溶液(5.8),用甲醇定1.0μg/mL,该溶液贮存于0℃~4℃,可稳定1个月，7测定步骤7.1样品提取准确称取1g均匀试样(精确到0.01g)于20mL聚丙烯离心管中，加入10mL乙腈，混匀后40℃超声提取20min,每隔5min取出晃动一次，超声后涡旋混匀3min,4000r/min离心5min,将上清液转移至10mL聚丙烯离心管中，置于—18℃冰箱中冷冻30min,取出后立即于-10℃4000r/min离7.1.2水状样品超声提取20min,每隔5min取出晃动一次，超声后涡旋混匀3min,4000r/min离心5min,将上清液将样液转移至已活化过的固相萃取柱中(5.11),控制样液流速约1mL/min,待样液全部流出后持干涸，用10mL甲醇洗脱，洗脱液于50℃水浴中氮吹浓缩至干，用1.0mL乙腈-乙酸胺混合溶液7.3测定7.3.1液相色谱条件3SN/T2533—2010表1液相色谱-质谱/质谱法梯度洗脱程序时间/min流速/(mL/min)乙腈/%10mmol/L乙酸胺/%087.3.2质谱条件7.3.2.1离子化模式：电喷雾正离子模式(ESI+);7.3.2.2质谱扫描方式：多反应监测(MRM);7.3.2.3其他质谱参考条件参见附录B。7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定7.3.3.1定量测定根据样液中糖皮质激素、孕激素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中糖皮质激素、孕激素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下，糖皮质激素、孕激素参考保留时间参见附录A中表A.1。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录C中图C.1。7.3.3.2定性测定按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，如果样品与标准工作液中待测物质色谱峰相对保留时间在±2.5%范围内；糖皮质激素、孕激素的质谱两个定性离子必须同时出现，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许误差不超过表2规定的范围。表2相对离子丰度最大容许误差相对丰度(基峰)/%相对离子丰度最大容许误差/%大于20至小于等于50大于10至小于等于20士30小于等于108空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。9结果计算用数据处理软件中的外标法，或按照式(1)计算试样品中糖皮质激素、孕激素类药物含量。 (1)4SN/T2533—2010c——标准工作液中糖皮质激素、孕激素类药物的浓度，单位为纳微克每升(pg/L);V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);A,——标准工作液中糖皮质激素、孕激素类药物的色谱峰面积；m——最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。10测定低限和回收率10.1测定低限本标准中17种糖皮质激素与1|种孕激素的测定低限均为10rg/kg。本标准的添加浓度范围与回收率数据参见附录D中表D.1。11方法提要化妆品中糖皮质激素、孕激素用乙腈超声提取，吹干浓缩后经固相萃取柱净化，用配有二极管阵列检测器或双波长紫外检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。12.2标准工作溶液：根据需要用之腈一水(12.1)将标准中间溶液(5.9)稀释成适当浓度的标准工作溶13仪器和设备除特殊注明外，所用试剂和材料均同6.2～6.8。液相色谱仪：配二极管阵列检测器或双波长紫外检测器。同7.1。14.3.1液相色谱条件5表3液相色谱法梯度洗脱程序时间/min流速/(mL/min)水/%0514.3.2液相色谱测定参见附录C中图C.2。15空白试验16结果计算和表述同第9章。17.1测定低限本方法测定低限为100pg/kg。回收率实验数据参见附录D中表D.2。6(资料性附录)检测化合物和保留时间表A.1检测化合物及参考保留时间类型化合物英文名称CAS号考保留时间/minHPLC-MS/MS法参考保留时间/min糖皮质激素曲安西龙triamcinolone泼尼松龙predisolone50-24-8氢化可的松hydrocortisone50-23-7甲泼尼松龙methylprednisolone83-43-2betamethasone378-44-9dexamethasone50-02-2氟米松flumethasone2135-17-3曲安奈德triamcinoloneacetonide76-25-5氟氢松fluocinoloneacetonide67-73-2酷酸氢化可的松hydrocortisoneacetate50-03-3醋酸氟氢可的松fludrocortisoneacetate514-36-3醋酸泼尼松prednisoneacetate醋酸可的松cortisoneacetate50-04-4醋酸地塞米松dexamethasoneacetate哈西奈德halcinonide3093-35-417a-羟基醋酸去氧皮质酮17a-hydroxycorticosterone56-47-3丙酸倍氯米松checlomethasone5534-09-841.1孕激素炔诺酮norethisterone68-22-4孕酮progesterone57-83-0甲烯雌醇醋酸酯melengestrolacetate2919-66-6甲炔诺酮norgestrel797-63-7地屈孕酮dydrogesterone醋酸羟孕酮17a-hydroxyprogesteroneacetate302-23-8醋酸甲地孕酮megestrolacetate595-33-5米非司酮mifepristone84371-65-3醋酸氯地孕酮chlormadinoneacetate302-22-7醋酸甲羟孕酮medroxyprogesteroneacetate71-58-9己酸羟孕酮17a-hydroxyprogesteronecaproate630-56-844.47液相色谱-质谱/质谱法仪器参数与监测离子)仪器参数与监测离子a)雾化气GS1(NEB):310.28kPa(45psi)(氮气);b)气帘气(CUR):172.38kPa(25psi)(氮气);c)喷雾电压(IS):5000V;d)离子源温度(TEM):550℃;e)去溶剂气流GS2:310.28kPa(45psi)(氮气);f)碰撞气(CAD):34.48kPa(5psi)(氮气);g)其他质谱参数见表B.1。表B.1待测药物的主要参考质谱参数药物名称定量离子对定性离子对驻留时间/ms去簇电入口电碰撞能量CE/ev碰撞室出口电压醋酸地塞米松99倍他米松89醋酸可的松9醋酸羟孕酮85己酸羟孕酮7泼尼松龙9甲泼尼松龙6617a-羟基醋酸去氧皮质酮77醋酸甲地孕酮88醋酸氯地孕酮78表B.1(续)药物名称定量离子对定性离子对去簇电入口电碰撞能量CE/ev碰撞室出口电压CXP/V地塞米松87哈西奈德曲安西龙395.1/225.39丙酸倍氯米松521.3/5b3.2-甲炔诺酮8313.4/245.2醋酸氢化可的松氯氢轻7氢化可的松7甲烯雌醇醋酸酯孕酮6醋酸氟氢可的松氟米松9曲安奈德7醋酸泼尼松97醋酸甲羟孕酮79表B.1(续)药物名称定量离子对定性离子对驻留时间/ms去簇电人口电碰撞能量CE/ev碰撞室出口电压米非司酮430.3/134.3430.3/134.388430.3/372.479炔诺酮299.3/109.3299.3/109.3299.3/231.3地屈孕酮6ntensity/ntensity/cpsIntensity/cpsIntensity/epsIntensity/cps(资料性附录)液相色谱-质谱/质谱法与液相色谱法标准溶液色谱图t/mint/mint/mint/mint/mint/mint/minl/minl/mint/mint/mint/mint/mint/mint/mint/mint/min岳2.t/mint/minl/minl/min(/min(/mint/mint/mint/mint/mint/mmt/mmt/mint/mint/mint/mint/mint/min(资料性附录)液相色谱-质谱/质谱法与液相色谱法回收率数据药物名称添加浓度/(pg/kg)药物名称添加浓度/(μg/kg)醋酸地塞米松71.4～91.8甲炔诺酮80.5～106.474.0～92.082.1～97.640.077.0—100.240.083.5～98.5倍他米松70.8～93.8醋酸氢化可的松76.5～92.778.0～99.079.4～104.640.079.5～99.540.083.6～99.5醋酸可的松71.8～90/8氟氢轻76.8～101.576.1<102.480.4～97.340.080.3～105.740.085.8～98.8醋酸羟孕酮72.8～98.7氢化可的松79.5～10879.4～94.586.2～10640.076.8～101.340.083.4～98.7己酸羟孕酮70.6～110.5甲烯雌醇醋酸酯73.2～10879.0～91.778.1～10440.081.4～99.6/40.085.5～100泼尼松龙76.8～108'毕酮79.9～96.077.6～11082.4～94.740.040.086.5～101甲泼尼松龙醋酸氟氢可的松81.0～10279.4～10440.088.0～10340.080.0～10117a-羟基醋酸去氧皮质酮73.5～107氟米松75.8～10279.0～98.188.9～10540.089.2～10140.083.7～98.9醋酸甲地孕酮75.4～99.6曲安奈德78.3～10585.7·~10379.9-~10240.089.0～98.740.084.5～104酷酸氯地孕酮71.7～101醋酸泼尼松77.1～95.085.5~10571.5～93.840.089.0～99.740.089.0～99.7地塞米松80.0～109酷酸甲羟孕酮68.9～93.484.1～10372.5～90.240.089.0～99.540.078.6～95.8表D.1(续)药物名称添加浓度/(μg/kg)回收率/%药物名称添加浓度/(pg/kg)哈西奈德米非司酮曲安西龙炔诺酮丙酸倍氯米松70-9~89-9.地屈孕酮表D.2