TBWDP 0001-2022 北京市酒庄葡萄酒中生物胺限量及检测方法

ICS67.160.10CCSX62团 体 标 准T/BWDP0001-2022北京市酒庄葡萄酒中生物胺限量及检测方法LimitanddeterminationofbiogenicaminesinBeijingWinerywines2022-10-28发布 2022-10-28实施北京酒庄葡萄酒发展促进会 发 布T/BWDP0001-2022T/BWDP0001-202211前 言GB5009.208-2016标准相比，缩短了生物胺含量的检测时间，提高了其检测限和定量限，满足了酿酒过程调控及生物胺含量测定的需求。GB/T1.11部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件参考GB/T5009.208—2016，主要变化如下：——（率；——（用；——修改了检测仪器（检出限从2-5mg/L提高到1.5-4.2µg/L，定量限从5-10mg/L提514.1µL；——35mn缩短到6mn。建立了更加快速、高效的检测葡萄酒中生物胺的超高效液相色谱方法，缩短了分析时间（6in，提高了分析灵敏度和准确度（最低检测限为1.54.2μL，最低定量限为514.1/L。本文件所规定附录为资料性附录。请注意本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由北京酒庄葡萄酒发展促进会提出并归口。本文件主要起草人：游义琳、黄卫东、战吉宬、韩冰、周慧、伍天阳、谢一丁、李礼、刘雪玮、郝越、王明飞。本标准于2022年10月28日首次发布。T/BWDP0001-2022T/BWDP0001-2022PAGEPAGE1北京市酒庄葡萄酒中生物胺限量及检测方法范围本文件规定了北京市酒庄葡萄酒中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺含量的测定方法和限量标准的要求。本文件适用于北京市酒庄葡萄酒中生物胺的限量控制和测定方法。规范性引用文件(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T5009.208-2016食品安全国家标准食品中生物胺的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。限量要求1（此限量标准的提出仅针对本标准中的检测方法。表1 生物胺限量标准生物胺种类限量mg/L色胺—β-苯乙胺3腐胺10尸胺3组胺8酪胺10亚精胺—精胺—原理色谱柱分离，超高效液相色谱—紫外检测器检测或二极管阵列检测器检测试剂和材料试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。（NaOHAS号：131-732。6..2 （11NO2：99%，AS号：605652。（H3OONHAS号：6361-。（NaHO3：AS号：144558。乙腈（HNAS号：7505-。6..6 丙酮（HOAS号：6764-。6..7 （HOAS号：14178-。6..8 盐酸（H，37%AS号：764-010。6..9 氨水（5NO，2528：AS号：133-216。试剂配制100g6.1.10mg/mL的衍生剂使用液。置4℃冰箱避光储存，有效期为3个月。1mol/L8.6mL盐酸（6.1.8）100mL容量瓶中，用水定容至刻度。0.1mol/L1mol/LmL100mL容量瓶中，用水定容至刻度。2mo/L8g6.1.，加入100mL饱和碳酸氢钠溶液：称取15g碳酸氢钠（6.1.，加入100mL水溶解，取上清液即为饱和溶液。0.01mol/L0.77g乙酸铵（6.1.3）1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。标准品C1H1NAS6154-97%准物质证书的标准物质。-CHNAS6404099%标准物质证书的标准物质。腐胺（4H12N2AS号：60-1）（纯度＞98%标准物质证书的标准物质。尸胺5H14N2，AS号：46-94）（97%标准物质证书的标准物质。组胺5H9N3，AS号：5145-标准品纯度＞97%准物质证书的标准物质。酪胺（8HNO，AS号：5167-2）标准品（纯度＞98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。亚精胺7H19N3AS号：12420-标准品纯度＞99%予标准物质证书的标准物质。精胺10H26NAS号：7144-）（99%标准物质证书的标准物质。6..9 1,7-二氨基庚烷7H18N2，AS号：64-195）标准品（纯度＞98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标准溶液配制10mg各种生物胺标准品，10mL0.1mol/L盐酸溶液（6.2.3）10mL容量瓶中，定容至刻度，1000mg/L（以各种生物胺单体计）的标准储备溶液。置-20℃存，有效期为６个月。1.0mL各生物胺单组分标准储备溶液，置10mL0.1mol/L盐酸溶液（6.2.3）稀释至刻度，混匀，配制成生物100m/L。置-20，0.10mL0.25mL0.50mL1.0mL1.50mL、2.0L5.0mL100m/L6.4210mL0.1mol/L（6.2.3）1.0mg/L2.5mg/L5.0mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L，临用现配。10mg内标标准品10mL容量瓶中，0.1mol/L盐酸溶液（6.2.3）1000mg/L的内标标准储备溶液。置-20冰箱储存，有效期为６个月。1.0mL1000m/L（6.4.于10L0.1moL6.2.100m/L，临用现配。注6.5流动相配制6..1流动相A（10%/v6.1.。6.5.2mol/L乙酸铵0.77g1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。仪器和设备（UC离心机：转速≥5000r/min。涡旋振荡器。水浴装置。氮吹仪。0.01g0.0001g。超纯水器。有机滤膜针头滤器：0.22µm。分析步骤试样制备10200µL（100与样品充分混0.3g30min，5000r/min10min，滤纸过滤，上清液待衍生。试样的衍生准确量取1.0mL上清液于10mL塑料离心管中，依次加入1.0mL饱和碳酸氢钠溶液6.2.450µL2moL6.2.550µL10m/mL6.2.，1min60℃45min100μL氨水256.1.1mn15mn，再加入3L6.1.2min，静置分层后，转移上层有机相（乙酸乙酯层）10mL离心管中，水相（下层℃1mL振荡混匀，使残留物溶解，0.22µm有机滤膜针头滤器过滤，待测定。8.2。超高效液相色谱参考条件18100mm2.1mm1.7µm210nm，1040AB0.01mol/LmL/min。梯度洗脱程序见表１。表2 梯度洗脱程序表组成时间min02346流动相A/%4040809040流动相B/%6060201060标准曲线的制作10µLA.1。试样溶液的测定稀释至标准曲线浓度范围再行测定。结果计算和表述试样中生物胺各组分含量按标准曲线法或按公式（1）计算获得，计算结果应扣除空白值，并保留两位有效数字。式中：

푋=퐶∙푓 （1）X—试样中生物胺的含量，单位为毫克每升（mg/L);C—从标准曲线得到的试样中溶液生物胺的浓度，单位为毫克每升（mg/L);ƒ—样品稀释倍数。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。检出限和定量限检出限色胺2.2µg/L、β-苯乙胺3.1µg/L、腐胺2.8µg/L、尸胺2.3µg/L、组胺4.2µg/L、酪胺1.5µg/L、亚精胺1.5µg/L、精胺2.8µg/L。11.2 定量限色胺7.2µg/L、β-苯乙胺10.4µg/L、腐胺9.5µg/L、尸胺7.7µg/L、组胺14.1µg/L、酪胺4.9µg/L、亚精胺5.0µg/L、精胺9.2µg/L。附 录 A8种生物胺标准溶液及内标衍生物液相色谱图图A.18种生物胺标准溶液及内标衍生物液相色谱图。图A.1 8种生物胺标准溶液及内标衍生物液相色谱图附 录 B各国家和地区