高效液相色谱仪确认

高效液相色谱仪验证报告验证类别：口首次验证□再验证设备名称:高效液相色谱仪设备型号：设备编号:1、概述高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是使用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。2、目的检查并确认型高效液相色谱仪运行性能符合要求。3、职责验证小组：包含使用部门、设备工程部、质量保证部、质量控制部。负责仪器验证方案的起草及方案的培训。负责制定符合实际及有效的设备操作规程。负责对仪器验证的方案及报告审核。负责仪器验证检测方法的建立，并对取样和分析方法进行验证。负责样品的采集、分析及报告。负责仪器验证的执行及操作记录的填写。参与仪器验证中的偏差调查。起草验证报告，并由验证委员会审核、批准。验证委员会负责验证方案的审核。负责资源的调配。负责验证报告的审核和批准。质量保证部:负责对验证过程进行监督检查和验证文件的存档。4、相关文件文件名称/文件存放位置文件编码/文件版本号高效液相色谱法操作规程操作说明书、安装手册和维修手册中华人民共和国药典2010年版二部5、验证方法和步骤验证方法整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。验证步骤5.2.1输液泵泵流量设定值误差S、流量稳定性误差S的检定SR将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。按式(1)、式(2)计算S和S。SR表1流量设定值(mL/min)0.51.02.0测量次数333流动相收集时间(min)1055S=(F—F)/FX100%……(1)S mSSS=(F—F)/FX100%……(2)Rmaxmin式中：S――流量设定值误差(％)；SS——流量稳定性误差(％)；RF=(W—W)/p・t,流量实测值(mL/min)；m2 1 TW——容量瓶+流动相的重量(g)；2W 容量瓶的重量(g)；1F——流量设定值(mL/min)；Sp 实验温度下流动相的密度(g/cm3)；Tt 收集流动相的时间(min)；F——同一组测量中流量最大值(mL/min)；maxF——同一组测量中流量最小值(mL/min)；minF——同一组测量值的算术平均值(mL/min)。输液泵泵流量设定值误差S、流量稳定性误差S的检定记录见附件一SR由测试结果可知：输液泵泵流量设定值误差S、流量稳定性误差S均符合规定SR5・2・2柱温箱柱箱温度设定值误差AT和控温稳定性T的检定SC将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35°C和45°C进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为△T,7次读数中最大值与最小值之差为控温稳S定性T。C柱温箱柱箱温度设定值误差△T和控温稳定性T的检定原始记录见附件二。SC由测试结果可知：△T为0°C ,T值为0.1°CSC结论：符合规定自动进样器进样量准确度误差的检定取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50卩1。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度。自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录见附件三。由测试结果可知：进样量准确度为0.36%。结论：符合规定检测器的检定5.2.4.1检测器基线噪声和基线漂移的测定取C色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0m1/min，检测器波长设定为254nm,18开机预热，待仪器稳定后(约60min)记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。检测器基线噪声和基线漂移的测定记录见附件四由测试结果可知：基线噪音为0.265X10—5AU，基线漂移为0.312X10-4AU/h结论：符合规定检测器最小检测浓度的测定取C色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为l.Oml/min，检测器波长设定为254nm,18开机预热，待仪器稳定后取1X10-7g/ml的萘/甲醇溶液进样20pl,记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度C。公式如下：LC=（2XNXC）/HLd式中C——最小检测浓度，g/ml；LN——基线噪声峰峰高，mm；dC——标准溶液浓度，g/ml；H——标准溶液峰峰高，mm。检测器的检定原始记录见附件四。由测试结果可知：检测器最小检测浓度为：0.0925X10—7g/mL（萘的甲醇溶液）整机性能的检定取C色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm（当18选用萘时）或272nm（当选用咖啡因时），柱温设定为40°C。开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液进样10》1，连续进样6次，记录其峰面积和保留时间，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。整机性能的检定原始记录见附件五。由测试结果可知：定性测量重复性误差为：0.3%定量测定重复性误差为：0.1%结论：符合规定

验证结果分析和综合评价验证部件验证项目合格标准验证结果结论输液泵流量设定值误差SS0.5ml/min:V5%l.Oml/min:V3%2.0ml/min:V2%0.04%0.3%0.02%符合规定符合规定符合规定流量稳定性误差SR0.5ml/min:V3%；l.Oml/min:<2%；2.0ml/min:<2%0.6%0.4%0.04%符合规定符合规定符合规定柱温箱柱箱温度设定值误差ATS<±2°C0.0C符合规定柱箱控温稳定性TCW1°C0.1C符合规定自动进样器进样量准确度误差W±2%0.36%符合规定检测器基线噪声W2X10-5AU0.265X10-5AU符合规定最小检测浓度<1X10-7g/mL（萘的甲醇溶液）0.0925X10-7g/mL符合规定基线漂移W5X10-4AU/h0.312X10-4AU/h符合规定整机性能定性测量重复性误差RSDW0.5%0.3%符合规定定量测量重复性误差RSDW1.O%0.1%符合规定结论：该仪器经验证，泵、柱温箱、自动进样器、检测器及整机的性能均符合规定。可用于日常检验。检定人：复核人：检定日期：高效液相色谱仪验证报告7/7

附件一：泵流量设定值误差S、流量稳定性误差S的检定原始记录SR液相色谱仪型号及编号：LC-20AT(QC-EM-096)泵型号：LC-20AT流动相：甲醇色谱柱:C18-011检定检定日期：复核人：FS0.5ml/min1.0ml/min第一次第二次第三次第一次第二次第三次W123.230123.242122.990023.794223.056223.52342W227.170527.187526.913527.746426.993227.47143t101010101010T262626262626PT0.786960.786960.786960.786960.786960.786960F=(W-W)/p・tm 2 1 T0.5007120.5013470.4985641.0044221.0005591.0033552.S=(F-F)/FX100%S m S S0.142320.269391-0.287180.4422080.0559110.3354680.平均SS0.04%0.3%F=(F+F+F)/3ml m2 m30.5002081.002779Fmax0.5013471.004422Fmin0.4985641.000559S=(F-F)/FX100%R max min0.6%0.4%此项检定结论：

附件二：柱温箱柱箱温度设定值误差厶T和控温稳定性T的检定原始记录SC液相色谱仪型号：LC-20AT 柱温箱型号：CTO-lOASvp数字温度仪型号：DT300-41T设定35°C45C时间读数时间读数稳定时08：4035.009：5045.0第1次08：4235.009：5245.0第2次08：5235.110：0245.0第3次09：0235.010：1245.1第4次09：1235.010：2245.0第5次09：2235.110：3245.0第6次09：3235.010：4245.0第7次09：4235.010：5245.1T平均35.045.0T最大35.145.1T最小35.045.0△T=T-TS 平均 设定0.00.0T=T—T C 最大 最小 0.10.1此项检定结论：检定人： 复核人： 检定日期：附件三：自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录液相色谱仪型号：LC-20AT自动进样器型号：SIL-20AC；进样前进样瓶加水的总重：W=4.4704g；进样后进样瓶加水的总重：W=3.9702g；2 检定温度：26°C,水的密度p0.9968g/ml；进样量准确度误差二[(W「W)-(50X10X10-3Xp)]/(50X10X10-3Xp)X100%=[(4.4704-3.9702)-(50X10X10-3X0.9968)]/(50X10X10-3X0.9968)X100%=0.36%此项检定结论：检定人： 复核人： 检定日期：附件四：检测器的检定原始记录液相色谱仪型号：LC-20AT检测器型号:SPD-M20A流动相：100%甲醇流速：l.Oml/min色谱柱：C18-011萘甲醇标准溶液浓度C:1.012X10-7g/mL配制人：配制日期:基线噪声:N=0.265X10-5AU基线漂移:H=0.312X10-4AU/h最小检测浓度的计算C=(2XNXC)/HLd=(2X0.0265X1.012X10-7)/0.580=0.0925X10-7g/mL此项检定结论：检定人： 复核人： 检定日期：附件五：整机性能的检定原始记录仪器型号及编号：LC20AT（QCEM096）流动相：甲醇色谱柱：C18011检测波长：254nm标准溶液类型：萘/甲醇溶液浓度：0.1012mg/ml配制人：配制时间：定性测定（保留时间）定量测定（峰面积）第一次3.8041331751第二次3.7841333788第三次3.7801333684第四次3.7781333291第五次3.7771333124第六次3.7771332713平均值3.7831333059测量误差的RSD0.3%0.1%备注：RSD采用EXCEL函数表丿格计算此项检定结论：检定人：复核人：检定日期：

验证结论及