细胞复苏、传代、冻存过程

汇报人：XX细胞复苏、传代、冻存过程单击此处添加副标题Catalog目录01单击此处添加目录标题02细胞复苏03细胞传代04细胞冻存05注意事项01添加章节标题02细胞复苏准备所需试剂和设备添加标题添加标题添加标题添加标题细胞复苏所需的设备：显微镜、细胞计数板、离心机、培养箱等细胞复苏所需的试剂：培养基、胎牛血清、细胞因子等细胞复苏前的准备工作：检查并确保所有试剂和设备都已准备好并处于良好状态细胞复苏过程中所需的辅助工具：吸管、移液器、细胞刮刀等从液氮中取出细胞冻存管注意事项：取出后立即用毛巾裹住冻存管，避免温度变化过快对细胞造成伤害细胞复苏液：选择适当的细胞复苏液，加入到细胞冻存管中离心：将细胞离心后，将上清液去除，加入适量的培养基操作步骤：将细胞冻存管从液氮中取出，用毛巾裹住，轻轻摇晃使细胞均匀分布快速将细胞冻存管放入37℃水浴中快速将细胞冻存管放入37℃水浴中加入适量培养基，将细胞悬液转移至培养瓶中取出细胞冻存管，用吸管吸去上清液轻轻摇晃冻存管，使其中的细胞快速且均匀地悬浮轻轻摇动冻存管，使其快速融化轻轻摇动冻存管，使细胞从静止状态快速回到生长状态快速融化可以减少细胞受损的风险摇动时需注意力度，避免对细胞造成机械损伤摇动频率和时间需根据具体情况而定，一般建议快速摇动几分钟至十几分钟将细胞悬液转移到离心管中，离心后去上清将细胞悬液转移到离心管中离心后去上清将细胞重悬于适量的培养基中细胞计数并接种到培养瓶中用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中将培养瓶置于恒温培养箱中，保持温度在37℃用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布观察细胞生长情况，适时更换培养基03细胞传代观察并记录细胞的生长状况细胞传代后，需要定期观察细胞的形态、密度和生长情况观察细胞是否出现异常形态或生长停滞等现象及时调整培养条件，确保细胞生长状态良好记录细胞的生长曲线，了解细胞生长速度和倍增时间吸除旧的培养基，用PBS洗涤细胞两次添加标题添加标题添加标题添加标题加入适量的胰酶，放入37℃培养箱中静置30秒，使细胞从贴壁状态变为悬浮状态吸除旧的培养基，用PBS洗涤细胞两次加入新的培养基，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布将细胞悬液按比例分到新的培养瓶中，放入培养箱中继续培养用胰酶消化细胞，轻轻吹打细胞使其分散成单个细胞胰酶的作用：分解细胞间的蛋白质，使细胞从培养瓶表面脱落吹打细胞的技巧：用吸管轻轻吹打细胞，使其分散成单个细胞传代比例：根据细胞生长情况，调整胰酶消化和吹打的时间和力度注意事项：胰酶的作用具有专一性，避免对细胞造成损伤将细胞悬液转移到离心管中，离心后去上清加入适量培养基轻轻吹打细胞沉淀将细胞悬液转移到离心管中离心后去上清用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中目的：使细胞从静止状态进入生长状态，进行传代培养步骤：将细胞从原培养瓶中吹散，加入适量新鲜培养基，轻轻混匀注意事项：避免过度吹散细胞，以免影响细胞活性结果：细胞重新悬浮在新鲜培养基中，接种到新的培养瓶中继续培养04细胞冻存准备所需试剂和设备细胞冻存液：包含DMSO、血清、培养基等成分，用于保护细胞免受冰晶损伤。细胞冻存盒：用于存放细胞冻存管，便于管理和标识。液氮罐：用于储存液氮，维持细胞冻存的低温环境。细胞计数板和显微镜：用于细胞计数和观察，确保细胞数量和活力符合要求。将细胞从培养瓶中取出，用胰酶消化并收集细胞悬液将细胞从培养瓶中取出，用胰酶消化并收集细胞悬液离心后去除上清液，用细胞冻存液重悬细胞将细胞悬液分装到细胞冻存管中，标记好细胞名称和冻存日期放入-80℃冰箱或液氮中冻存在细胞悬液中加入适量的冷冻保护剂，调整细胞密度细胞悬液制备：将细胞从培养瓶中吹散，制备成细胞悬液。细胞计数：对细胞悬液进行计数，确保细胞密度符合要求。加入冷冻保护剂：在细胞悬液中加入适量的冷冻保护剂，以保护细胞免受冷冻损伤。调整细胞密度：根据需要，调整细胞悬液的密度，以便于后续的细胞复苏和传代。将细胞悬液分装到细胞冻存管中，标记好细胞类型和日期将细胞悬液分装到细胞冻存管中定期进行复苏和传代放入-80℃冰箱中保存标记好细胞类型和日期将细胞冻存管放入液氮罐中进行长期保存细胞冻存管：用于存储细胞，通常由特殊材料制成，能够承受极低的温度。液氮罐：用于存储液氮，为细胞冻存提供低温环境。长期保存：细胞在液氮罐中可以保存数年甚至数十年，保持细胞的活力和特性。复苏：冻存的细胞可以随时复苏，用于实验或治疗。05注意事项在进行细胞操作时，要严格遵守无菌操作原则，防止污染注意细胞生长状态和密度，及时进行传代或冻存遵循细胞来源的伦理和法规要求，确保细胞来源合法合规严格遵守无菌操作原则，防止污染掌握正确的细胞复苏、传代、冻存方法和技术在使用胰酶时要注意安全，避免溅到皮肤或眼中戴手套和护目镜缓慢添加胰酶及时冲洗避免长时间暴露在进行细胞冻存时，要确保冷冻保护剂的质量和浓度，以保证细胞的存活率