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过氧化氢酶(CAT)活性的测定过氧化氢酶（CAT）活性的测定：紫外吸收法目的与要求：测定植物中过氧化氢酶的活性，了解其与植物代谢强度、抗寒、抗病能力的关系。原理：过氧化氢酶是一种含铁的血红蛋白酶，能催化过氧化氢分解为水和分子氧，并在此过程中起传递电子的作用。过氧化氢既是氧化剂又是还原剂，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在240nm波长下，过氧化氢有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液的吸光度（A240）随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。材料、仪器设备及试剂：材料：小麦或其他叶片。仪器设备：研钵、紫外分光光度计、离心机、恒温水浴、容量瓶。试剂：0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液、0.1mol/LH2O2（30%的H2O2溶液稀释至1000ml）。实验步骤：1.酶液提取：取新鲜植物叶片或其他组织0.5g，加入2-3ml4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀，将容量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上清液在4000r/min下离心15min，上清液即为过氧化氢粗提液，5℃下保存备用。2.测定：准备3支试管，其中2支为样品测定管，1支为空白管。按表1-1顺序加入试剂。25℃预热后，逐管加入0.6ml0.1mol/L的H2O2，每加完1管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，260nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测完后，按式（1-1）计算酶活性。表1-1：紫外吸收法测H2O2样品测定液配制表管号粗酶液（ml）pH7.8磷酸缓冲液（ml）蒸馏水（ml）S10.43.02.0S20.43.02.0S00.4（失活酶液）3.02.0空白0.4（磷酸缓冲液）3.02.0结果计算方法如下：在1分钟内，如果A240减少了0.1，则表示酶量减少了1个酶活单位（μ）。过氧化氢酶活性（μ.g-1min-1）=ΔA240*Vt/(0.1*Vl*FW)。其中ΔA240表示加入失活酶液的对照管吸光值和样品管吸光值的平均值。Vt表示粗酶提取液的总体积（ml），Vl表示测定时所用的粗酶提取液的体积（ml），FW表示样品的鲜重（g），0.1表示A240每下降0.1就表示酶活单位（μ）减少1个。t表示过氧化氢到最后一次读数时的时间（min）。为了计算过氧化氢酶活性，需要按照以下步骤进行操作。首先，在1分钟内，如果A240减少了0.1，则表示酶量减少了1个酶活单位（μ）。其次，计算ΔA240，即加入失活酶液的对照管吸光值和样品管吸光值的平均值。接下来，根据公式过氧化氢酶活性（μ.g-1min-1）=ΔA240*Vt/(0.1*Vl*FW)进行计算。其中，Vt表示粗酶提取液的总体积（ml），Vl表示测定时所用的粗酶提取液的体积（ml），FW表示样

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