医学院医学细胞生物学实验教案

教案2011~2012学年第2学期课程名称医学细胞生物学实验授课对象授课教师医学院教案授课日期：教案编号：001课程名称医学细胞生物学实验年级专业、层次教师地点学时3教学安排课型：理论实验√见习其它教学方式：讲授讨论指导√示教其它教学资源多媒体√模型标本实物音像其它授课题目（章、节）实验一：光学显微镜的使用与细胞化学成分的分析显微镜的结构及使用方法2.细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示3.细胞内DNA和RNA的显示教材和主要参考书教材：细胞生物学与遗传学实验指导，浙江大学出版社金龙金等编，2005年8月第一版参考书：1.细胞生物学实验，辛华主编.科学出版社，2004年2月第二版2.细胞生物学，翟中和，等编.高等教育出版社，2000年8月出版3.细胞生物学实验，杨汉民主编.高等教育出版社1998年05月第二版教学目的与要求：1、练习正确使用光学显微镜。2、掌握正确的生物学实验绘图方法。3、了解细胞化学方法的基本原理。4、掌握DNA和RNA、酸性蛋白和碱性蛋白在细胞内分布的检测方法。教学内容与时间安排，教学方法：（一）检查学生人数（点名）5分钟（二）交待生物实验规则，生物实验成绩考检办法，本次实验目的要求5分钟（三）实验内容：30分钟1、多媒体讲授光镜的构造，使用方法及注意事项注意：A、集光器（聚光镜、光阑）的使用B、装片C、粘调镜台上→下D、低倍清楚→高倍清楚2、讲解蟾蜍血涂片的制备和观察注意：A、载玻片干净B、蘸少量稀释血C、保持一定角度3、介绍什么是细胞化学的方法：4、讲解酸性蛋白和碱性蛋白的显示（1）原理细胞化学（CellularChemistry）的方法，是在保持细胞结构的基础上，利用某些化学试剂与细胞内的一些物质发生化学反应，并使其最终的反应产物成为有色的沉淀，从而可定性地指出某种化学成分在细胞中的位置。由于不同蛋白分子中所带有的碱性基团和酸性基团的数量不同，在不同的pH溶液中，整个蛋白所带正负电荷也不同，如在生理条件下，整个蛋白带负电荷多，则为酸性蛋白质（等电点偏向酸性）；若带正电荷多，则为碱性蛋白质（等电点偏向碱性）。据此，可将标本经三氯醋酸处理（除去核酸，消除影响因素）后，用不同pH的固绿染色液（为一种弱酸性染料，本身带负电荷）予以染色，可使细胞内的碱性蛋白质分别显示出来。（2）步骤：①第1、2张血涂片。②固定：将晾干的二张血涂片浸于70%乙醇中固定5分钟，清水冲洗。③三氯醋酸处理：将已固定的二张涂片浸在90℃的5%三氯醋酸（放置在恒温水浴锅中）处理15分钟，清水冲净（注意一定要反复冲，不要在涂片上留下三氯醋酸痕迹，否则酸性蛋白和碱性蛋白的染色将无法区分）。④染色和观察：将一张涂片浸入0.1%酸性固绿染液中染色3分钟，清水冲洗，晾干。另一张涂片在0.1%碱性固绿染液中染色30分钟，清水冲洗后晾干，然后置于显微镜下观察。血涂片1#、2#晾干→70%乙醇固定5′→冲洗→90℃，5%三氯醋酸处理15′→冲净→固绿染色；1#0.1%酸性固绿染色3′2#0.1%碱性固绿染色30′）→冲洗晾干→高位镜观察；5、讲解DNA和RNA的显示（1）原理：核酸分为DNA和RNA两类，利用DNA和RNA聚合程度的不同，对碱性染料有不同的亲和力而进行选择性染色。由于甲基绿分子上有两个相对的正电荷，它对聚合程度高的DNA有强的亲和力。而派罗宁分子只有一个相对的正电荷，它仅和聚合程度较低的RNA相结合。因此DNA和RNA可被分别染色。（2）步骤：①第三张血涂片，在70%乙醇中固定5-10分钟后晾干。②将甲基绿一哌罗宁混合染液滴于涂片上，使之覆盖血膜，染色20分钟。③清水冲洗，并用吸水纸吸去多余水份（注意，血膜处不可吸得过干）。3#血涂片晾干→70%乙醇固定5′晾干→甲基绿一哌罗宁染色20′→冲洗晾干→高倍镜观察；（3）注意点：A、覆盖染液B、背面擦干6、介绍生物学绘图要求注意：A、总体安排、按比例放大或缩小B、尖细的2H或HB铅笔，平滑的单线，颜色深线用小圆点密疏表示C、图各部分名称（引线法），实验名称7、布置作业（四）学生操作巡回指导1、指导血涂片制作2、指导1#、2#、3#片处理，督促抓紧3#片处理3、抽查1#、2#、3#片染色结果，动员大家看典型结果4、提醒显微镜操作注意点，纠正明显错误，布置思考题5、提醒生物学绘图注意点，纠正明显错误（五）检查各实验用品整理及桌面清洁情况，督促值日生工作重点和难点：1.酸性蛋白和碱性蛋白的细胞化学显色原理酸性固绿、甲基绿－哌洛宁的染色方法复习思考题，作业题:怎样调节视野的明暗？为什么在进行高倍镜观察时，必须从低倍镜开始？在装片时，应注意什么？4．1#片、2#片细胞哪些部位分别是绿色。5．3#片细胞哪些部位分别是绿色、红色？6．显示酸性蛋白、碱性蛋白、DNA和RNA的染料分别是什么？7．用不同pH的固绿染色液染色显示细胞内碱性蛋白和酸性蛋白时，为什么标本事前需要经过三氯醋酸处理？8.用甲基绿-哌洛宁混合染液染色，为什么可使细胞内DNA与RNA分别显示出来？教研组意见:负责人签名：年月日实施情况及分析：教案授课日期：教案编号：002课程名称医学细胞生物学实验年级专业、层次教师地点学时3教学安排课型：理论实验√见习其它教学方式：讲授讨论指导√示教其它教学资源多媒体√模型标本实物音像其它授课题目（章、节）实验二：细胞的基本生理活动1.小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察2.溶血作用与红细胞的通透性教材和主要参考书教材：细胞生物学与遗传学实验指导，浙江大学出版社金龙金等编，2005年8月第一版参考书：1.细胞生物学实验，辛华主编.科学出版社，2004年2月第二版2.细胞生物学，翟中和，等编.高等教育出版社，2000年8月出版3.细胞生物学实验，杨汉民主编.高等教育出版社1998年05月第二版教学目的与要求：1、加深理解细胞膜的通透性和吞噬活动。2、培养学生观察细胞生理活动的能力。3、熟悉小鼠腹腔注射和颈椎脱臼处死方法。教学内容与时间安排，教学方法：（一）清点学生人数，分发实验报告，点评上次实验报告的优缺点5分钟（二）实验内容讲授要点25－30分钟1、本次实验目的要求2、讲解小白鼠腹腔巨噬C吞噬活动的观察①预备实验：在实验前二天，每日给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1ml（由教师完成）。②实验时，每组取上述小白鼠一只，腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，25分钟后在腹腔注射1ml生理盐水，3分钟后，用颈椎脱臼法（一手拇、食指夹住头部、另一手夹住尾巴，用力一拉即可）处死小鼠。③剖开小鼠腹腔，用注射器取腹腔液1-2滴滴于载玻片上，盖上盖玻片，进行观察。④观察：在高倍镜下可见许多体积较大的圆形或形状略不规则的巨噬细胞，其胞质中含有数量不等的淡兰色小颗粒（即是吞入含台盼兰的淀粉颗粒），还可见一些黄色椭圆形有核的鸡红细胞。慢慢移动标本，仔细观察视野中的巨噬细胞，可看到巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程的不同阶段（有的鸡红细胞紧附在巨噬细胞表面，有的红细胞已被巨噬细胞部分吞入，有的红细胞整个被吞入，形成吞噬泡）。腹腔注射6%淀粉肉汤1ml×2（教师）→1%鸡红细胞悬液1ml25′后→处死→腹腔液制片→高倍观察。注意点：A、载玻片倾倾斜B、区别巨噬C和鸡红3、讲解溶血作用与红C的通透性（两人一组）（1）原理：红细胞通过细胞膜能与周围环境进行有选择性的物质交换。将红细胞置于各种等渗溶液中，根据红细胞对各种物质的透性不同，有的溶质分子可以透入，有的溶质分子则不能透入；即使能透入的溶质，其透入速度也不同。当溶质分子透入红细胞质内溶质浓度增加，结果导致水分的摄入，当红细胞膨胀到一定程度时细胞膜破裂，发生溶血（溶血就是浓密的不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液的过程）。此法已被广泛用于测量各种分子相对通透速度的指标。（2）步骤：以二人为小组进行以下实验，在实验过程中要注意查看实验台上各种试剂的标签，取样用的移液管，切勿混淆；所有的试管应编号，以保证实验结果准确。①先轻摇一下盛有制备好的10%兔血细胞悬液的试管，观察悬液的特点，为一种不透明的红色液体。②观察溶血现象：取试管一支加1ml兔红细胞悬液，再加3ml蒸留水，注意观察溶液的颜色变化，可见溶液由不透明的红色变为透明的澄清液（此时透过溶液可读出书报上的字）即已发生溶血。1ml10%兔红C悬液+3ml蒸馏水、0.17M氯化钠、0.17M氯化铵、0.17M硝酸钠、0.12M草酸铵、0.32M葡萄糖、0.32M乙醇注意点：A、试剂与移液管配套使用B、试管标号C、先做蒸馏水观察溶血现象4、布置作业（三）学生操作巡回指导1、指导小白鼠抓拿、注射、处死2、提示区别巨噬C和鸡红C，找到巨噬C，大家看看认识3、督促学生各号试剂、移液管、试管配套，指导观察溶血现象4、注意显微镜使用规范5、注意生物学绘图规范（四）检查各组实验用品及桌面清洁情况，督促值日生工作。重点和难点：区别巨噬细胞和红细胞小鼠腹腔注射和颈椎脱臼处死方法学会观察细胞的生理活动掌握溶血作用的原理、分析溶血产生的原因复习思考题，作业题:1．列表总结红C通透性实验结果（编号、溶液种类、是否溶血、溶血时间）2．绘制小白鼠腹腔巨噬C吞噬鸡红C过程图3．细胞吞噬活动对动物和人体有何意义？教研组意见:负责人签名：年月日实施情况及分析：教案授课日期：教案编号：003课程名称医学细胞生物学实验年级专业、层次教师地点学时3教学安排课型：理论实验√见习其它教学方式：讲授讨论指导√示教其它教学资源多媒体√模型标本实物音像其它授课题目（章、节）实验三细胞组分的分离和鉴定教材和主要参考书教材：细胞生物学与遗传学实验指导，浙江大学出版社金龙金等编，2005年8月第一版参考书：1.细胞生物学实验，辛华主编.科学出版社，2004年2月第二版2.细胞生物学，翟中和等编.高等教育出版社，2000年8月出版3.细胞生物学实验，杨汉民主编.高等教育出版社1998年5月第二版教学目的与要求：1、了解通过细胞匀浆和差速离心的方法，分级分离细胞组分的原理及过程。2、熟悉离心机，匀浆器的使用方法。教学内容与时间安排，教学方法：（一）清点学生人数，分发实验报告，点评上次实验报告的优缺点（5’）（二）实验内容讲授（30’）1、提问后进述：①细胞内各组分如何分离？根据什么原理来分离？②此方法主要分为哪几个步骤？（匀浆、分级分离、分析三个步骤）③常用分级分离法有哪几种？两法有何不同？（差速离心法与密度梯度离心法）。2、指出：本实验采用差速离心法来分离细胞核与线粒体。3、按屏幕步骤讲解实验方法，并结合演示，说明使用注意点：①匀浆器使用方法②低速离心机使用方法③高速台式离心机使用方法④吹打方法4、总要求5、布置作业：用表格描述你的实验结果，分析所分离的细胞核与线粒体的纯度情况。（三）学生操作与巡回指导（80’）指导学生鼠肝的采取指导匀浆器的使用指导低速离心机操作指导高速离心机操作随时关照与提醒学生按步骤进行（四）检查各组清洁整理情况，督促值日生打扫，关好水电、门窗。重点和难点：重点：分级分离细胞组分的原理及过程离心机和匀浆器的使用方法难点：分级分离细胞组分的过程复习思考题，作业题:复习思考题:细胞内各组分分离根据什么原理？主要分为哪几个步骤？常用分级分离法有哪几种？两法有何不同？各步骤制片的理论预期结果？作业题:比较分析各步骤制片的理论预期结果和实际观察结果教研组意见:负责人签名：年月日实施情况及分析：教案授课日期：教案编号：004课程名称医学细胞生物学实验年级专业、层次教师地点学时3教学安排课型：理论实验√见习其它教学方式：讲授讨论指导√示教其它教学资源多媒体√模型标本实物音像其它授课题目（章、节）实验四细胞器的微观及亚微观结构教材和主要参考书教材：细胞生物学与遗传学实验指导，浙江大学出版社金龙金等编，2005年8月第一版参考书：1.细胞生物学实验，辛华主编.科学出版社，2004年2月第二版2.细胞生物学，翟中和，等编.高等教育出版社，2000年8月出版3.细胞生物学实验，杨汉民主编.高等教育出版社1998年05月第二版教学目的与要求：1、熟悉光学显微镜下细胞器的形态结构2、掌握显示线粒体、高尔基复合体的超活染色原理3、了解电镜下细胞各部亚微结构特点教学内容与时间安排，教学方法：（一）检查学生人数（点名）5分钟（二）交待生物实验规则，生物实验成绩考检办法，本次实验目的要求10分钟（三）实验内容：25-35分1、析题（提问）①什么是细胞器？（广义是指细胞中具有一定形态结构执行一定生理功能的小体）；②什么是微观及亚微观？（这是指观察的分辨能力等级，共分四级，用肉眼观察只能分辨出大于0.1mm结构的物体称大体现；用光镜观察能分辨出100-0.2μm结构的物体称为微观；用电镜观察能分辨出2000A-10A的结构或物体，称为亚微观；用高级电镜观察能分辨出小于10A的结构或物体，称为超微观。③指出本次实验主要是用光镜观察部分细胞器的微观结构，至于亚微观，超微观，限于条件，只能通过录像和照片予观察。2、讲解线粒体制片与观察①按板书步骤讲述制片方法②指出注意点：A、用牙签大头刮；B、要刮口腔粘膜部位，不是牙龈部位（示范）；C、用力轻重要适当；D、加盖玻片要有一定方法；E、先低倍镜观察，再转高倍观察；③提问：A、观察结果如何？（呈浅绿色颗粒状、棒状、线状体——表示）；B、为什么用詹纳斯绿能显示浅绿色？（由于线粒体内存在细胞色素氧化酶，使呈氧化状态而显色）；C、这种用活体细胞或组织进行染色的方法叫什么？（超活染色法）。3、讲解高尔基复合体制片与观察①按屏幕步骤讲述制片方法（每二人做一只蟾蜍）②指导：A胸骨剑突所在部位及取材方法；B、软骨细胞形态（椭圆形、致密排列，淡红色）；C、观察对光线要打暗些易看到。③提问：A、观察结果如何？（核上方有被染成玫瑰红色大小液泡即是）；B、原理怎样？（中性红分子表面带有阳离子，入胞后被高尔基复合体吸附，堆积于液泡内而被染色）。4、讲解细胞器大小的测量方法（见实验指导第10内容）在低倍镜或高倍镜下测量口腔上皮细胞、软骨细胞大小。5、布置观察电镜照片，示教标本（强调每人一定要看）6、布置作业与思考题1）绘人口腔上皮细胞图（示线粒体）2）绘蟾蜍软骨细胞图（示高尔基复合体）（三）学生操作与巡回指导1、指导取材部位（线粒体、高尔基复合体制片）2、指导观察效果，先选择制片较好的，形态典型的作为示教，动员大家看3、注意学生使用显微镜是否规范？及时予以纠正4、注意学生绘图是否规范，及时予以纠正5、对早完成实验者进行考核后放行（四）检查各组仪器及桌面清洁情况，督促值日生打扫实验室重点和难点：1.线粒体制片2.高尔基复合体制片复习思考题，作业题:1.如何测量细胞及细胞器的大小？2.如何观察电镜照片联想超微结构功能？教研组意见:负责人签名：年月日实施情况及分析：教案授课日期：教案编号：005课程名称医学细胞生物学实验年级专业、层次教师地点学时4教学安排课型：理论实验√见习其它教学方式：讲授讨论指导√示教其它教学资源多媒体√模型标本实物音像其它授课题目（章、节）实验五细胞分裂和实验考查观察植物细胞的有丝分裂——洋葱根尖纵切片观察动物细胞的有丝分裂——马蛔虫子宫切片。观察蝗虫精巢小管纵切片，雄性蝗虫2n=23，性染色体，XO，雌性蝗虫2n=24，性染色体XX。教材和主要参考书教材：细胞生物学与遗传学实验指导，浙江大学出版社金龙金等编，2005年8月第一版参考书：1.细胞生物学实验，辛华主编.科学出版社，2004年2月第二版2.细胞生物学，翟中和，等编.高等教育出版社，2000年8月出版3.细胞生物学实验，杨汉民主编.高等教育出版社1998年05月第二版教学目的与要求：掌握动、植物细胞分裂及生殖细胞减数分裂的基本过程实验理论考查和显微镜操作考查教学内容与时间安排，教学方法：（一）清点学生人数，分析上次实验报告，总结上次实验情况（5´）（二）实验内容讲授引题：细胞生长到一个阶段，在一定条件下就要进行分裂产生新的细胞。根据细胞分裂时核的变化情况不同，可以分为三种分裂方式（启问：那三种方式）：无丝分裂、有丝分裂、减数分裂。本实验就是用制片在显微镜下观察有丝分裂与减数分裂各期变化特点。1、实验内容要点、注意事项（讲解）（20´）2、实验观察（巡回指导）观察植物细胞的有丝分裂——洋葱根尖纵切片（20´）观察动物细胞的有丝分裂——马蛔虫子宫切片（15´）观察蝗虫精巢小管纵切片（25´）3、布置观察有丝分裂模型与减数分裂照片。（启发讲解）（10´）4、作业：（巡回观察指导）（25´）①绘制洋葱根尖有丝分裂中期后期图象。②绘制蝗虫精巢精子形成的减数分裂前期I的粗线期和终变期图像。（三）实验考查