土壤五种酶的测定方法

参考文献：关松荫等，编著.土壤酶及其研究法[M].农业出版社，1986.周礼凯，编著.土壤酶学[M].科学出版社关松荫等，1986蔗糖酶：比色法(1)P274-276脲酶：比色法P294-297蛋白酶：比色法9(1)P302-304磷酸酶：磷酸苯二钠法(2)P312-313过氧化氢酶：容量法P323蔗糖酶比色法试剂(1)苯甲酸溶液0.25%(2)3,5-二硝基水杨酸(3)pH5.5磷酸缓冲液(4)8%蔗糖溶液(5)甲苯操作步骤5克风干土→50mL三角瓶→15mL8%蔗糖溶液→5mLpH5.5磷酸缓冲液→5滴甲苯→摇匀放入恒温箱→37℃培养24h→取出迅速过滤→吸取滤液1mL→流水冷却3min→蒸馏水稀释至50mL→508nm比色结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。葡糖糖〔毫克〕=a×4式中a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标。Y=0.229×〔－0.0209〕R２=0.9961注意：Y值为吸光度值，相当于表中的A平均X值为根据上述公式计算的结果，相当于a值葡萄糖含量为a*4〔毫克〕蛋白酶比色法〔1〕试剂〔1〕1%酪素溶液〔2〕0.1N硫酸〔3〕20%硫酸钠〔4〕2%茚三酮液甲苯甘氨酸标准溶液操作步骤4g风干土→50ml三角瓶→20ml1%酪素液→1ml甲苯→30℃恒温箱24h2ml0.1N硫酸→12ml20%硫酸钠液→15min(6000转/min)离心→上清液2ml50ml容量瓶→1ml茚三酮→沸水浴10min→蒸馏水稀释至刻度→500nm比色结果计算蛋白酶活性，以24h后1g土壤中氨基氮的毫克数表示。NH2-N(mg)=a*5式中a—— 从标准曲线查得氨基氮毫克数b——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标。Y=2.8236x+0.011R²=0.9968X=〔y-0.011〕/2.8236过氧化氢酶容量法试剂〔1〕0.3%的过氧化氢溶液〔2〕3N硫酸〔3〕0.1N高锰酸钾溶液2.操作步骤2g风干土→100ml三角瓶→40ml蒸馏水→5ml0.3%过氧化氢溶液→复式震荡机震荡20min→5ml3N硫酸→过滤→去25ml滤液→0.1N高锰酸钾滴定至淡粉红色3.计算土壤过氧化氢酶活力以及所消耗的高锰酸钾的ml数来表示。脲酶比色法1.试剂PH6.7柠檬酸盐缓冲液苯酚钠溶液次氯酸钠溶液10%尿素液甲苯硫酸铵2.操作步骤5g风干土→50ml三脚瓶→1ml甲苯→10ml10%尿素液→20mlPH6.7柠檬酸盐缓冲液→37℃恒温箱24h→过滤取3ml滤液→50ml容量瓶→加蒸馏水至20ml4ml苯酚钠→3ml次氯酸钠液→20min后显色定容→3.计算脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。NH3-N(mg)=a×2式中a——从标准曲线查得的NH3-N毫克数z——换算成1g土的系数磷酸酶磷酸苯二钠比色法〔2〕原理：在碱性条件下，当存在氧化剂铁氰化钾时，酚被氧化成醌，醌又与4—氨基氨替比林络合成玫瑰色，颜色深度与酚量相关，通过比色测定游离酚量。试剂PH9.8氯化铵—氢氧化铵缓冲液8%铁氰化钾液体3%4—氨基氨替比林液0.5%磷酸苯二钠溶液酚的标准溶液甲苯操作步骤称5g风干土→50ml三角瓶→5滴甲苯→20ml0.5%磷酸苯二钠→37度恒温箱2h→滤液5ml→50ml容量瓶→20ml蒸馏水→0.25ml缓冲液→0.5ml4—氨基氨替比液→0.5ml铁氰化钾液→定容→15min内于510nm比色结果计算磷酸酶的活性，以2h后100g土壤中P2O5的毫克数表示。P2O5(mg)=a*80*0.32*2.29式中a——5ml滤液中酚的毫克数80——换算为100g土