替米考星对鸡慢性呼吸道病的防治试验

替米考星对鸡慢性呼吸道病的防治试验

近年来，由鸡毒霉感染的呼吸道感染不断增加。临床常用的药物已经使用多年，但它们逐渐表现出服用药物的副作用。因此,开发新型高效的动物专用抗霉形体感染药物势在必行。替米考星(Tilmicosin)是一种半合成的大环内酯类畜禽专用抗生素,为泰乐菌素(Tylosin)的衍生物,具有同泰乐菌素相似的抗菌谱,对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用,尤其对胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌及畜禽霉形体具有比泰乐菌素更强的抗菌活性,与临床常用的其他抗生素之间无交叉耐药性。另外,药代动力学研究表明,无论内服还是皮下注射,该药在畜禽体内吸收快,血中药物半衰期长,药物组织穿透力强,体内分布容积大,尤其在肺组织、乳中的药物浓度高。由于其特殊的抗菌活性和药代动力学特征,进口替米考星已被批准用于山羊、绵羊、乳牛、猪、鸡等动物感染性疾病的治疗,特别是用于泌乳动物乳腺炎疾病和一些呼吸道疾病如家畜放线杆菌胸膜肺炎、巴氏杆菌病和鸡慢性呼吸道病等的治疗。该药于20世纪80年代由英国Elanco动物保健品公司开发成功,1990年上市,现国内厂家也有生产。为了解替米考星的体外抗菌活性和其磷酸盐预混剂对人工感染的鸡慢性呼吸道病的疗效,特进行以下试验。1材料和方法1.1酸泰乐菌素替米考星:含量970g/kg,湖北武穴市龙翔药业有限公司中试生产,批号2002060015。磷酸泰乐菌素:效价909U/mg,批号0206082,由山东鲁抗兽药研发中心提供。磷酸替米考星预混剂:每1000g预混剂中含替米考星200g,由湖北武穴市龙翔药业有限公司中试生产。1.2年—菌种大肠埃希氏菌CMCC44103:浙江升华拜克有限公司惠赠。大肠埃希氏菌O8:华南农业大学药理教研组惠赠。大肠埃希氏菌O2、鸡毒霉形体MGS6:江苏省农业科学院畜牧兽医研究所惠赠。猪、鸭大肠埃希氏菌地方分离株和禽巴氏杆菌:本校微生物教研组提供。金黄色葡萄球菌CMCC26112:东南大学医学院微生物教研组惠赠。1.3日本组成KM2培养基:用于MGS6的培养,江苏省农业科学院畜牧兽医研究所提供。普通肉汤培养基、血平板、M-H肉汤、M-H琼脂:均按常规方法制备。1.4试验动物AA肉鸡购自南京迈皋桥鸡场,试验前经血清学检测鸡毒霉形体血清学阴性反应。1.5外抗菌活性测定1.5.1mic的测定将培养好的各菌液稀释为1×105~1×106/mL,按常规2倍稀释法测定MIC。药物临用前配制成一定浓度。替米考星水溶性差,可用恒温震荡器30℃震荡15min,以助于溶解。每菌重复3次。1.5.2磷酸泰乐菌素检测细胞试验前将药物配成一定浓度,过滤除菌后备用。取24h能在KM2培养基中达到对数生长期的霉形体培养物作为本试验用菌液(CFU为1×105/mL)。取15支无菌试管,第1管中加入KM2培养基0.9mL,其余各管加0.5mL。将0.1mL药物加入第1管,按2倍稀释法稀释至最后一管。然后在各管中加入等量的0.5mL菌液,37℃培养。重复3次,每次同时设培养物、培养基和磷酸泰乐菌素对照。当培养物对照管培养基由红色变为橘黄色时(pH由7.5变到6.8以下)判定一次结果;3~5d后,待所有试管的培养基颜色不再发生变化时,再判定一次结果。1.6磷酸预混合对鸡慢性呼吸道疾病的治疗效果是人工的1.6.1动物的集体处理从没有受鸡毒霉形体感染的15日龄鸡群中随机抽取180只健康雏鸡,试验雏鸡随机分为6组,分组情况及处理方式详见表1。1.6.2感染和治疗1.6.2.鸡分组及感染情况所选用AA肉鸡经2周适应后,于第15d进行试验。试验前每只鸡进行鸡毒霉形体血清学检测,阴性者作为试验鸡,并对鸡进行称重。试验鸡的分组情况见表1。制备MGS6菌液,经测定菌液CFU为3.5×109/mL。除健康对照组外,各感染组(见表1)鸡左右胸气囊各注射MGS6培养物0.4mL,滴鼻0.5mL。疾病模型指征如下:①临床症状;②气囊、气管、肺的病理变化情况;③平均增重;④死亡率;⑤病原分离、鉴定。1.6.2.观察指标及方法接种后24h按表1方式给药,连续给药7d,每日换料1次。观察期为初次给药后20d,每日观察鸡的各种临床表现并记录鸡发病死亡情况;对死鸡剖检,观察气囊、气管及肺的病理变化。试验结束时,分别对鸡称重、气囊病变记分和血清抗体检测。1.6.3疗效评估指标1.6.3.1死亡率凡在试验期间试验鸡出现鸡慢性呼吸道病症状并死亡,剖检时气囊和肺有典型的病变特征,则判断为感染死亡,计算死亡率。1.6.3.2相对沉降率根据试验开始及结束时每只鸡的体重,计算每组鸡的平均增重,并计算相对增重率。1.6.3.根据每侧氮气病变评分剖检后凡出现气囊膜增厚、浑浊,内有奶酪样分泌物者均属气囊病变,按病变轻重对其评分。每侧气囊病变分为4级,损伤越重则分值越高。按下列公式计算气囊损伤减少率:气囊损伤减少率=(对照鸡平均气囊损伤分值-试验鸡平均气囊损伤分值)÷对照鸡平均气囊损伤分值。1.6.3.4.抗虫试验的阳性率测定鸡血清中鸡毒霉形体抗体,计算抗体反应阳性率。1.6.4数据分析所得试验数据中,对增重指标进行t检验,其余指标均进行卡方检验。2结果与分析2.1磷酸泰乐菌素替米考星和磷酸泰乐菌素的体外抗菌活性结果见表2。磷酸泰乐菌素对大肠埃希氏菌不十分敏感,对鸡毒霉形体、金黄色葡萄球菌及巴氏杆菌虽有一定作用,但效果较替米考星差。2.2死亡鸡剖检变化鸡群接种24h后普遍精神不振,呆卧不动,48h后少数鸡有罗音,张口呼吸,流鼻液,开始出现死亡;死亡鸡剖检时可见气囊膜增厚、浑浊,大部分气囊内有奶酪样分泌物,部分鸡的肺坏死、出血或淤血,气管壁有不同程度的充血和出血,内有黏稠分泌物。健康对照组鸡临床观察正常,剖检无肉眼可见病变。表明该试验感染模型是成功的,符合试验需要。2.3各组鸡毒霉形体感染情况比较鸡感染病原后,每日记录发病死亡鸡数(至感染后第21d),结果见表3。由表3可见,各用药组与感染对照组比较,均能显著(P<0.05)降低雏鸡由于鸡毒霉形体感染引起的死亡。磷酸替米考星各剂量组与磷酸泰乐菌素对照组比较,能使存活率提高10%~30%,表明其疗效较磷酸泰乐菌素强。2.4鸡的平均增重测定试验结束后,即感染后第21d,对试验鸡进行称重,结果见表4。由表4可见,各治疗组鸡的平均增重均低于阴性对照组;各用药组与感染对照组比较,均能明显地提高鸡的相对增重率;而磷酸替米考星各剂量组与磷酸泰乐菌素组相比较,仅高剂量组与之差异较大,大约使相对增重率提高27%,中、低剂量组与之差异不大,只有13%~17%。2.5比较磷酸替米考星与磷酸泰乐菌素的降低烟气损伤效果感染后第21d,每组抽检5只鸡,进行剖检,检查、记录气囊病变,比较各组鸡气囊损伤减少率,结果见表5。由表5可见,各用药组气囊损伤减少率显著高于感染对照组(P<0.05),并且磷酸替米考星高、中剂量组也均显著高于磷酸泰乐菌素组(P<0.05);但低剂量组与之比较,无显著(P<0.05)差异。这说明使用一定剂量的磷酸替米考星在降低气囊损伤方面作用较好,效果优于磷酸泰乐菌素;若剂量降低到一定的程度,则与磷酸泰乐菌素的疗效相当。2.6结果表1试验结束后,即感染后第21d,每组抽检5只鸡,进行抗体检测,结果见表6。由表6可见,与阳性对照组比较,各用药组在降低鸡体内的鸡毒霉形体抗体方面均有较好的效果,尤以磷酸替米考星高、中剂量组在降低抗体检出率方面效果较显著,但低剂量组与磷酸泰乐菌素对照组效果相当。3替米考星预混剂体外试验结果表明,替米考星对鸡毒霉形体MGS6株、巴氏杆菌及金黄色葡萄球菌均有强大的抑菌作用,较磷酸泰乐菌素的作用强。同时,本研究提示,在治疗由MGS6株引起的鸡慢性呼吸道病时,可考虑选用替米考星。若盲目选用其他药物,不仅会延误治疗时机,而且容易造成耐药性在病原菌中的传播