实时荧光定量pcr快速检测登革热病毒

实时荧光定量pcr快速检测登革热病毒

发烧通常流行于热带和亚热带地区。这是一种通过蚊子传播的急性病毒性传染病，为《中华人民共和国传染病防治条例》规定的乙类传染病。我国的广东、福建省是登革热流行区,多为小规模流行或散发,其他地区如浙江、湖北等省也常有输入性病例发生。2007年9月3日,浙江省丽水市中心医院收治了1例疑似登革热患者,在现场流行病学调查的基础上,采用实时荧光定量PCR对登革热病毒(denguevirus,DEN)核酸的动态变化检测,迅速确认该患者为登革热实验室诊断病例,病原体为登革Ⅲ型病毒。1患者一般资料及热反应情况患者,男,22岁,学生。2007年暑期,患者赴柬埔寨(为登革热疫区)探亲,主诉有蚊虫叮咬史,未接种登革热疫苗。2007年8月27日患者回国,8月29日自觉不适,夜间体温均38℃左右,伴明显头痛,颜面潮红同时伴随肌肉痛、关节痛;无出血症状,皮疹和出血点明显。曾接受抗生素治疗,热不退,伴随症状无缓解,尿色深如浓茶水样。9月3日转到丽水市中心医院就诊。根据其临床表现和外出史(患者曾经去过登革热疫区),诊断为登革热疑似病例。2实验室检测结果1igm血清抗体患者发病第7d(9月4日)血清革热IgM血清抗体A值为0.236和0.237(临界值0.250),高度疑似阳性,第13d血清中IgM抗体阳性。2第7d病毒刑罚执行下降患者发病第2d,通用型核酸检测显示血清中登革热病毒核酸含量较多,经过治疗,于第7d病毒拷贝下降(图1)。发病第2d,登革热病毒分型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型)核酸荧光检测确定感染病毒为登革热Ⅲ型病毒(图2);发病第13d血清登革Ⅲ型病毒核酸检测阴性(图3)。3诊断根据实时荧光定量PCR结果,结合流行病学资料,该患者确诊为登革热,感染病毒为登革热病毒Ⅲ型。实时荧光定量pcr检测登革热抗体的必要性DEN属披膜病毒科黄病毒属,经白纹伊蚊和埃及伊蚊传播。血清学上根据E蛋白抗原性不同分为I、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。DEN感染人类不仅可引起登革热,还可引起登革出血热(denguehemorrhagicfever,DHF)和登革休克综合症(dengueshocksyndrome,DSS),可导致30%～40%的患者死亡。据估计,全世界每年登革热发病人数约6千万,受威胁人口约25亿,已成为世界上分布广、发病率高、危害较大的一种虫媒病毒性疾病,是全球性重要公共卫生问题。近年来由于经济发展以及国际航线的增开,使得在柬埔寨等东南亚国家感染登革热病毒的人员在归国时并无发热、头痛等明显临床症状,能轻易从空路入境并散布全国各地,发病后又因认识不足而得不到正确诊断及合理处置,若患者居住在南方热带、亚热带地区,极有可能通过当地白纹伊蚊、埃及伊蚊等传播登革热,甚至引起暴发流行,故在发病初期迅速确定病原体对于控制疫情的播散是非常重要的。本例患者入院时即已考虑登革热,在开展常规ELISA检测登革热IgM抗体的同时,对发病初期、发病中期及恢复期的血清用实时荧光定量PCR方法进行了登革热病毒的检测及分型。血清IgM抗体检测结果显示,患者发病第2d为阴性,第7d疑似阳性,第13d呈阳性。荧光PCR检验结果提示,在患者出现症状的第2d血清中检出登革Ⅲ型病毒核酸,且含量较高;经过治疗,于第7d登革Ⅲ型病毒拷贝数显著降低,第13d时血清中已检测不到病毒。表明实时荧光定量PCR方法更敏感,更适合于登革热病毒感染的早期诊断。丽水市非登革热疫区,本次对疑似病例用传统的ELISA方法检测抗体,同时采用实时荧光定量PCR方法快速确诊,为疫情的及时处理赢得了时间,未造成扩散。但该病例的发生给本地区的登革热防治工作敲响了警钟,对流行季节(3～10月份)前往疫区的务工人员和旅行者在归国入境时要观测其体温,若发现体温升高应立即隔离治疗,对归国1周内出现体温升高、发热、疼痛症状,血WBC、淋巴细胞和PLT计数低于正常者要考虑登革热的可能,要及时诊治,以防疫情的发生。*材料和方法2.1esa显示血清样的热igm抗体2.2实时荧光定量pcr检测3登革热病毒igm及igm共感染病毒检测试剂参照卫生部2001年制定的登革热诊断标准及处理原则和2005年制定的全国登革热监测方案(试行)。登革热病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒购自中山生物工程有限公司,按试剂盒说明书操作。登