第四节沙门氏菌

一大群人与动物肠道中的寄生菌菌群菌型甚多，仅少数对人致病第三节沙门氏菌(Samonella)其中许多为人畜共患病DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第一位兽医学博士。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词，就是为纪念他而以他的名字命名的。沙门菌（Salmonella）

大多数为人和动物肠道正常菌群少数有致病性伤寒、副伤寒、肖氏、沙氏沙门菌——肠热症鼠伤寒、肠炎、鸭、猪霍乱沙门菌（动物源）

——食物中毒、败血症沙门菌的种类沙门氏菌生物学特性是一大群寄生于动物肠道内生化反应和抗原结构相似的革兰氏阴性杆菌。大小0.6～1.0×2～3um，无芽胞，一般有鞭毛(鸡沙门菌除外)，无荚膜，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性厌氧。生物学性状-形态特征生物学性状-培养特性最适生长温度为35～37℃，最适pH值为6.8～7.8。营养琼脂平板上：菌落大小一般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。血平板上：中等大小的灰白色菌落。生物学性状-生化特性分解葡萄糖产酸产气－除伤寒沙门菌产酸不产气外不分解乳糖－EMB培养基呈无色半透明菌落多数产生H2S，不产生靛基质，不液化明胶，不分解尿素，不产生乙酰甲基甲醇，多数能利用枸橼酸盐，在氰化钾培养基上不生长。明胶液化试验明胶是一种动物蛋自质，高于24℃时可液化成液体，低于20℃时凝固成固体。某些细菌能产生明胶液化酶(一种蛋白酶)，分解明胶后使明胶分子变小，虽低于20℃亦不再凝固。利用此特点，用来鉴定某些微生物，即能产生明胶液化酶的微生物，能使明胶液化，无此酶的微生物则不能液化明胶。尿素酶试验尿素酶能够使尿素分解释放出氨气和二氧化碳，氨溶于水使加有酚红酸碱指示剂的营养琼脂由中性变成碱性，从而产生颜色变化（由黄色变成深粉红色）硫化氢产生试验有些细菌能分解含硫的有机物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物，用于鉴别肠道细菌氰化钾试验氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂，可与呼吸酶作用使酶失去活性，抑制细菌的生长，但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长，以此鉴别细菌。赖氨酸脱羧试验试验培养基中含有赖氨酸和葡萄糖，酸碱指示剂为溴甲酚紫（中性和碱性时紫色，酸性黄色），未用时为紫色。如果待测细菌将赖氨酸脱羧，则产生胺，为碱性，溴甲酚紫保持紫色，如果不脱羧，肠杆菌科的细菌都能分解葡萄糖，产酸，溴甲酚紫变为黄色。

赖氨酸脱羧试验

ONPG:邻硝基酚-β-D-半乳糖苷。具有半乳糖苷酶的细菌，能使其水解，从而释放黄色的邻硝基酚ONPG试验左为阳性（黄）右为阴性对照β-D-半乳糖苷酶（ONPG）的测定沙门氏菌——致病性潜伏期一般6-72小时，症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热等。病程一般1-2天或更长。感染剂量为15-20个菌，死亡率达1-4%。污染源为人和动物粪便目前至少有67种0抗原和2000以上血清型，所致疾病称沙门菌病。致病性-沙门菌病(salmonellosis)肠热症

-----伤寒病和副伤寒病总称，由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。两次菌血症。急性肠炎（食物中毒）——最常见的沙门杆菌感染，多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。败血症——常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌等引起。带菌者——占患者的1-5%，胆囊可持续带菌大于1年，传染源。TYPHOIDMARY抵抗力耐冷不耐热,水中存活2~3W冰冻土壤中可越冬粪便种可以存活1~2月胆盐、煌绿抗力较其他肠道杆菌强-可用选择培养基（SS）进行分离鉴别毒素特征不产外毒素，但菌体裂解时，可产生毒性很强的内毒素，内毒素是类脂、糖类和蛋白复合物。此种毒素为致病的主要原因，可引起人体发冷、发热及白细胞减少等症。1.O抗原：为LPS（脂多糖）是分组的依据，为每个菌株均有的成分。A~E组对人致病，刺激机体产生IgM抗体

2.H抗原：为蛋白质，是分型依据刺激机体产生IgG抗体

3.Vi抗原：是表面抗原，与毒力有关，有抗吞噬作用，检测出低效价抗体即有诊断意义。抗原结构分类与命名分类：依据生化反应和DNA同源性,将沙门菌分为：2种(species):

肠道沙门菌邦戈沙门菌6个亚种(Subspecies):命名：依据所致人/动物疾病命名如伤寒沙门菌/鼠伤寒沙门菌依据分离地命名如上海沙门菌--沙门氏菌传统检测方法1.前增菌-使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加工食品均应经过前增菌。2.选择性增菌-此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食品直接增菌。3.选择性平板分离-采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品前增菌法25g＋BPW225mL36℃

±1℃一般4h，干蛋品18h～24h10mL＋MM（或TTB）100mL10mL＋SC100mL直接增菌法25g＋灭菌生理盐水25mL检样匀液25mL＋MM（或TTB）100mL检样匀液25mL

＋SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/AH2S－结果），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸沙门氏菌血清学试验甘露醇山梨醇H2S＋靛＋尿－KCN－赖＋H2S－靛－尿－KCN－赖＋/－非如左述的各种反应结果沙门氏菌血清学试验ONPG－沙门氏菌非沙门氏菌42℃18h～24h36℃

±1℃18h～24h42℃18h～24h36℃

±1℃18h～24h36℃

±1℃40h～48h36℃

±1℃18h～24h

微生物学检验沙门氏菌检验中华人民共和国国家标准GB/T4789.4-2003BPW:缓冲蛋白胨水MM：氯化镁孔雀绿增菌液TTB：四硫磺酸钠煌绿增菌液SC：亚硒酸盐增菌液SS培养基成分牛肉膏粉5g蛋白胨5g

三号胆盐3.5g乳糖

10g

柠檬酸钠

8.5g

硫代硫酸钠

8.5g

柠檬酸铁1g

中性红

0.025g

煌绿0.00033g硫代硫酸钠：提供硫，检测产生硫化氢的能力，抑制肠道正常菌群，缓和胆盐对沙门菌的伤害作用；细菌分解乳糖后使硫游离出来，利用菌落着色。沙门氏菌在SS琼脂上典型特征沙门氏菌在37℃培养18-24小时后，无色透明菌落有黑色中心；志贺氏菌呈无色透明菌落。沙门氏菌在胆硫乳琼脂(DHL琼脂)上典型特征沙门氏菌在37℃培养22-24小时后，无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。有些菌株无色半透明。蛋白胨20g

牛肉膏粉3g

乳糖

10g

蔗糖10g

去氧胆酸钠1g

硫代硫酸钠2.3g

柠檬酸钠1g

柠檬酸铁铵

1g

中性红0.03g去氧胆酸钠和柠檬酸钠：抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌。沙门氏菌在亚硫酸铋琼脂(BS琼脂)上典型特征沙门氏菌在37℃培养24-48小时后，棕褐色或灰色至黑色，有时有金属光泽，周围培养基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰绿色,周围培养基不变或微变暗。蛋白胨10g

牛肉膏5g

葡萄糖5g

硫酸亚铁

0.3g

磷酸氢二钠4g

煌绿0.025g

柠檬酸铋铵2g

亚硫酸钠6g沙门氏菌在（木糖赖氨酸脱氧胆盐）XLD琼脂上典型特征沙门氏菌在35℃培养24-48小时后，无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。志贺氏菌为无色透明菌落。大肠杆菌为黄色菌落，其外围有黄色环。酵母膏粉3g

L-赖氨酸5g

木糖

3.75

g

乳糖

7.5

g

蔗糖7.5

g

氯化钠5

g

硫代硫酸钠6.8

g

去氧胆酸钠2.5

g

柠檬酸铁铵0.8

g

苯酚红0.08

g

沙门氏菌在海克顿肠内（HE）琼脂上典型特征在37℃培养18-24小时后，沙门氏菌、亚利桑那菌和变形杆菌为蓝绿色至蓝色、有或无黑色中心的菌落；大肠杆菌和大肠菌群为粉红色菌落，有沉淀环；无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。志贺氏菌和普罗菲登斯菌为绿色、湿润而隆起菌落。

蛋白胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水杨素2g胆碱20g氯化钠5g0.4%溴麝香草酚蓝3031

反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，按下表判定结果：反应序号Bl：补做ONPG。若ONPG（＋），为大肠埃希氏菌，若ONPG（－），为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸（＋），但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸（－）。32以抗体为基础的检测方法利用抗原-抗体反应的显著特异性，来进行细菌的鉴别和血清型定型。细菌菌体或鞭毛抗原的特异性抗体的存在，是建立食品快速检测方法的基础。酶标抗体（ELISA），荧光抗体染色（免疫荧光法），同位素标记抗体（放射免疫试验）全自动免疫分析仪已建立的免疫学检测方法有：以核酸为基础的方法以细胞核酸DNA和RNA作为