基于ctDNA的无创检测在肿瘤临床治疗中的应用

基于ctDNA的无创检测

在肿瘤临床治疗中的应用ctDNA的生物学特性用于解决哪些问题

ctDNA临床应用其他常见的靶基因检测ctDNA(循环肿瘤DNA)

ctDNA的含量总游离DNA上皮组织5-10%肿瘤0.01-10%胃肠道5-10%血细胞80-90%largely<1.0%

ctDNA存在部位血浆

•

水91%

•

蛋白

7%

•

代谢物(微量)

•

Cell-freeDNA(微量)细胞层

•

白细胞2-3%

•

血小板块

2-3%

•

红细胞90%

•

CTC(微量)

ctDNA(cfDNA)的片段分析

ctDNA半衰期短（2小时）ctDNA的生物学特性用于解决哪些问题

ctDNA临床应用其他常见的靶基因检测1、部分晚期患者无手术机会

2、无足够的组织标本进行基因分型3、重复活检患者依从性差

作为金标本的组织靶基因检测也存在局限性

一、取材困难二、肿瘤异质性：同一肿瘤组织中，各部位的细胞突变情况不一样三、无法对疗效进行监测组织标本无法用于动态检测基于血液的靶基因检测可惠及每一位患者指导用药匀质标本实时监测作为无法获取组织标本的补充，无创检测结果指导临床用药循环而匀质的ctDNA标本，在一定程度克服了异质性实现实时动态监测，提高全程管理水平ctDNA的生物学特性用于解决哪些问题

ctDNA临床应用其他常见的靶基因检测ctDNA的临床意义——液体活检14指导靶向治疗肿瘤疗效动态监测-靶向治疗终点-化疗疗效的动态监测术后复发/转移监测预后评估肿瘤筛查和早诊ctDNA的临床意义——液体活检15指导靶向治疗肿瘤疗效动态监测-靶向治疗终点-化疗疗效的动态监测术后复发/转移监测预后评估肿瘤筛查和早诊ctDNA和肿瘤组织的一致性？106patientsTissueBloodKRASandBRAFV600E

mutationRoutinegold-standardmethodsIntplex

100%concordance(BRAFmutation)96%concordance(KRASmutation)ThierryARetal.NatMed2014,20;430-5.液体活检：ctDNA和肿瘤组织的比较转移性结直肠癌16First-linegefitinibinCaucasianEGFRmutation-positiveNSCLCpatients:aphase-IV,open-label,single-armstudy

推动EGFR突变血液检测的重要文献BritishJournalofCancer(2014)110,55–62|doi:10.1038/bjc.2013.721共入组1060位高加索人群非小细胞肺癌患者，来自5个国家652例患者同时具有肿瘤组织和血液样本，采用Qiagen试剂盒进行检测这两者EGFR突变状态吻合率为94.3%，敏感性为65.7%，特异性为99.8%。文章简介：IRESSA药品说明书更新中国Gefitinib说明书更新（2015年2月13日cFDA批准更新）第4页<注意事项>

当考虑本品用于晚期或转移性NSCLC患者的一线治疗时，推荐对所有患者的肿瘤组

织进行EGFR突变检测，如果肿瘤标本不可评估，则可使用血液（血浆）标本中获得的循环肿瘤DNA(ctDNA)用于EGFR突变检测。

只能使用经论证可用于测定肿瘤或ctDNA的EGFR突变的检测方法，检测方法须稳定、可靠并且灵敏，以避免出现假阴性或假阳性的测定结果

ctDNA伴随诊断写进我国的专家共识19若肿瘤标本不可评估，可从血液标本中评估ctDNA，以尽最大可能明确最可能从吉非替尼治疗中收益的NSCLC患者目前成熟且最常用的血液EGFR突变检测方法为：突变扩增阻滞（ARMS）ctDNA的临床意义——液体活检20靶向治疗指导肿瘤疗效动态监测-靶向治疗终点-化疗疗效的动态监测术后复发/转移监测预后评估肿瘤筛查21ctDNA的动态监测-晚期非小细胞肺癌疗效评估非小细胞肺癌ctDNA融合基因标记物检测：CAPP-SeqctDNA可以很好地监测NSCLC的疗效NewmanAMetal.NatMed2014,20(5):548-54.

ChemtherapyCarbo/Pem/BevPem/BevCrizotinibMonthCTctDNA(pgmL-1)Tumorvolume(cm3)Time(months)TumorvolumeFusionsNDctDNA的临床意义——液体活检22靶向治疗指导肿瘤疗效动态监测-靶向治疗终点-化疗疗效的动态监测术后复发/转移监测预后评估肿瘤筛查和早诊ctDNA对早期直肠癌的术后监测23ctDNA检测：SSV(体细胞结构变异)ReinertTetal.Gut2016,65(4):625-34.

ResectionstageⅡrectumRecto-scopyRecto-scopy分子复发CT临床复发Colono-scopyRadiationtherapyPreDay8303mth691215182124273033C12D1C12I2CEACEAthresholdCEAug/LTumorGEs/mlplasma基于血液的肺癌EGFR突变检测III、IV期肺腺癌易瑞沙®、特罗凯®、凯美纳®等方法：ARMS-PCRQIAGEN试剂盒为主收费：2760元T790M突变检测（Digital-PCR)检测极限小于0.01%，并可实现绝对定量22基因列表优势：高通量，覆盖了大部分非小细胞肺癌和结直肠癌的驱动基因劣势：敏感度高于Sanger测序，但稍低于ARMS-PCR特殊保存方式1、抑制核酸酶介导的ctDNA降解2、防腐剂稳定有核血细胞标本送检流程采用专用