实验诊断课件：临床常用免疫学检查

2023/11/301临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查2023/11/30临床常用免疫学检查2传统定义:免疫(immune):

指免除传染病免疫性(immunity):

指抗感染能力免疫学(immunology):

是阐明机体的抗病机制和防止免疫应答不良后果的学科2023/11/30临床常用免疫学检查3近代免疫学定义已超越单纯抗感染范畴定义为对抗原性异物的识别和清除免疫学被抽象为”分辨自身和非己”,是研究机体识别和清除非己成分的科学2023/11/30临床常用免疫学检查42023/11/30临床常用免疫学检查5

2023/11/30临床常用免疫学检查62023/11/30临床常用免疫学检查72023/11/30临床常用免疫学检查82023/11/30临床常用免疫学检查92023/11/30临床常用免疫学检查10强直性脊柱炎患者的病情演变2023/11/30临床常用免疫学检查11结节性多动脉炎2023/11/30临床常用免疫学检查12临床常用免疫学检查免疫功能检查

*血清免疫球蛋白检测*血清补体检测*细胞免疫检测肿瘤标志物检测

*蛋白质类肿瘤标志物、糖脂类肿瘤标志物、酶类肿瘤标志物自身免疫检测

*类风湿因子测定、*抗核抗体检测

*抗心磷脂抗体测定*抗中性粒细胞胞浆抗体测定器官与骨髓移植的检测

2023/11/30临床常用免疫学检查13临床常用免疫学检查感染免疫检测

*细菌感染免疫检测病毒感染免疫检测其它（寄生虫感染、性病等）病毒肝炎血清标志物其它

循环免疫复合物检测、冷球蛋白检测、丙种反应性蛋白检测

2023/11/30临床常用免疫学检查14临床常用免疫学检查

细胞因子检查

*IL-2、6、8、10*TNF、IFN

2023/11/30临床常用免疫学检查15一、免疫功能检查

免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）是一组由浆细胞合成和分泌、具有抗体活性的球蛋白存在机体的血液、体液、外分泌液及细胞膜上，可分为分泌型（secretedIg,sIg）和膜型(membraneIg,mIg)根据其功能和理化性质分为五种2023/11/30临床常用免疫学检查16Immunoglobulin,Ig2023/11/30临床常用免疫学检查17

IgG最多、占70%～80%抗体活性

IgA血清型和分泌型两种

IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子

IgD功能尚不完全清楚

IgE与变态反应有关免疫球蛋白

2023/11/30临床常用免疫学检查18

2023/11/30临床常用免疫学检查19

（一）免疫球蛋白

用超速离心、免疫电泳方法可将免疫球蛋白分为五类：

IgG、IgA、IgM、

IgE

、IgD

2023/11/30临床常用免疫学检查20免疫球蛋白特点IgG

机体含量最多、占70%-80%的抗体活性，是唯一能够通过胎盘的Ig，是使新生儿获得被动免疫的抗体

IgA

分血清型和分泌型两种，分泌型主要与呼吸道、消化道、泌尿生殖道的感染、肿瘤等病变密切相关

IgM

五聚体，是分子量最大的Ig，是有效凝聚和溶解细胞的因子。在个体发育和抗原刺激后出现最早的抗体，在机体的早期免疫防御中起主要作用。天然同族凝聚素、冷凝集素、伤寒沙门菌抗体和RF均属此型

2023/11/30临床常用免疫学检查21IgE

血清含量最少的Ig，与变态反应、寄生虫感染、皮肤过敏等有关IgD

功能尚不完全清楚2023/11/30临床常用免疫学检查22IgG亚类测定临床意义

IgG160%~70%成人IgG1缺陷常见

IgG214%~20%

儿童中以IgG2缺陷

IgG34%~8%成人IgG3缺陷常见

IgG42%~6%2023/11/30临床常用免疫学检查23

IgG亚类缺陷患者常表现为反复感染,如呼吸道感染、腹泻、中耳炎、鼻窦炎等。

IgG亚类异常增高主要见于变态反应疾病。2023/11/30临床常用免疫学检查24IgE测定：

由呼吸道、消化道的黏膜固有层浆细胞分泌，IgE为亲细胞抗体，在Ⅰ型变态反应性疾病的发病中起重要作用。临床意义：

IgE增高最多见于Ⅰ型变态反应性疾病，如支气管哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、荨麻疹等；非过敏性疾病如寄生虫病、肝炎、SLE、类风湿关节炎及多发性骨髓瘤（IgE型）等。

2023/11/30临床常用免疫学检查25正常值：

单向免疫扩散法—IgG7.0~16.6g/LIgA0.7~3.5g/LIgM0.5~2.6g/L

ELISA法—IgE0.1~0.9mg/L2023/11/30临床常用免疫学检查26

多克隆增高:IgGIgAIgM均增高单克隆增高:仅某一种Ig增高而其他种Ig不增高

2023/11/30临床常用免疫学检查27

免疫球蛋白增高的临床意义：

多克隆性增高—慢性感染（包括细菌、病毒、结核感染等）、慢性肝病、自身免疫性疾病、肿瘤（淋巴瘤）等

单克隆性增高—免疫增殖性疾病，如分泌型多发性骨髓瘤；IgE的增高主要与各种过敏性疾病相关

2023/11/30临床常用免疫学检查28免疫球蛋白减低的临床意义

先天性—先天性无（低）丙种球蛋白血症、重链病、轻链病

后天性—肾病综合征、病毒感染、免疫抑制剂应用、肿瘤2023/11/30临床常用免疫学检查29关于M蛋白M蛋白（Monocolonalprotein）:又称单克隆免疫球蛋白，是由单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白及其分子片段。血清中若能检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病，最常见的是：

多发性骨髓瘤

(multiplemyeloma,MM)，可有IgG型、IgA型、IgM型等

巨球蛋白血症（Waldenstrom症）

重链病、轻链病

半分子病2023/11/30临床常用免疫学检查30（二）血清补体（complement,C）

*是一组具有酶原活性的糖蛋白，由C1-C9及B、D等因子及补体调节蛋白组成*通过传统途径和旁路途径激活，传统途径需免疫复合物（CIC）激活，旁路途径不需要CIC激活而首先发挥作用*参与灭活病原体的免疫反应，也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤*血清中含量稳定，属天然免疫，不耐热2023/11/30临床常用免疫学检查312023/11/30临床常用免疫学检查32

2023/11/30临床常用免疫学检查33致敏绵羊红细胞+待测血清（CIC）（C1等）50%红细胞溶解（CH50）检测方法：2023/11/30临床常用免疫学检查34

总补体溶血活性检测（totalhemolyticcomplementactivity,CH50）

正常值：50-100ku/L

临床意义：反映传统途径的活化程度

减低—肾小球肾炎、自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮Systemiclupuserythematosis,SLE）、感染性心内膜炎（subacuteinfecitiveendocarditis,SBE）、肝病等

增高—急性炎症、组织损伤、肿瘤等2023/11/30临床常用免疫学检查35补体C3检测：

C3在补体系统各成分中含量最多，是传统途径和旁路途径被激活的关键物质免疫比浊法正常值：0.85-1.70g/L

补体C4检测：

C4代表补体传统活化途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用单向免疫扩散法正常值：0.2-0.6g/L2023/11/30临床常用免疫学检查36临床意义：

参见CH50减低和增高的临床意义

C3增高在急性炎性反应更敏感(炎症性疾病)

C4对判断免疫复合物形成时补体消耗性减低更有意义（自身免疫性疾病）2023/11/30临床常用免疫学检查37（三）细胞免疫检测

T细胞免疫检测

B细胞免疫检测自然杀伤细胞检测细胞因子检测中性粒细胞吞噬杀菌功能检测2023/11/30临床常用免疫学检查38关于T细胞T细胞表面有多种特异性抗原，统称为白细胞分化抗原（clusterdifferentiation,CD）不同的CD分子可代表不同的T细胞亚群用免疫荧光法和流式细胞术可检测T细胞表面的CD分子的百分率2023/11/30临床常用免疫学检查39T细胞分化抗原测定

(免疫荧光法，IFA）

CD3—总T细胞正常值：63.1%±10.8%

CD4—T辅助细胞（TH）正常值：

42.8%±9.5%

CD8—T抑制细胞（TS）正常值：

19.6%±5.9%

CD4/CD8正常值：

1.66±0.33

2023/11/30临床常用免疫学检查40临床意义：CD3

降低—自身免疫性疾病（SLE、类风湿关节炎）

CD4/CD8增高—恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、变态反应、排异反应

CD4/CD8减低—见于艾滋病

CD3CD4CD8均增高—T细胞型淋巴细胞恶性疾病2023/11/30临床常用免疫学检查41

B细胞分化抗原测定：

应用CD19、CD20、CD22等单克隆抗体标记单个核细胞—B细胞，通过免疫荧光或流式细胞术进行检测，CD19是所有B细胞共有的表面标志，活化后不消失参考值：CD1911.74±3.73%

临床意义：

升高—B细胞型急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、Burkitt淋巴瘤等减低—无丙种球蛋白血症、免疫抑制剂应用2023/11/30临床常用免疫学检查42

自然杀伤细胞免疫检测

自然杀伤细胞（NK）介导天然免疫应答，它不依赖抗体和补体即能杀伤靶细胞

自然杀伤细胞（NK）活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一

2023/11/30临床常用免疫学检查43

参考值：

NK细胞活性（自然杀伤）47.6%～76.8%

临床意义：升高：常见于病毒感染早期，Down综合症，器官移植后，使用免疫增强剂（如干扰素）治疗后。减低：常见于恶性肿瘤，重症联合免疫缺陷病，AIDS和免疫抑制剂使用者等。先减低后升高：检测肿瘤患者的治疗效果2023/11/30临床常用免疫学检查44中性粒细胞吞噬、杀菌功能检测

硝基四氮唑蓝还原试验（NBT）中性粒细胞在吞噬杀伤过程中氧耗量增加，导致糖代谢活跃，6-磷酸葡萄糖脱氢氧化为戊糖，所脱的氢可还原淡黄色的NBT成为蓝黑色的点块状颗粒沉积在中性粒细胞的胞浆里，在油镜下可被观察到。计数100-200个中性粒细胞，计算其中NBT阳性细胞的百分率。2023/11/30临床常用免疫学检查45

硝基四氮唑蓝还原试验（NBT）

参考值：阳性细胞75%～95%

临床意义：NBT↑--细菌感染

1.有助于鉴别细菌感染/病毒感染

NBT不高--病毒感染

2.

NBT↓为白细胞吞噬功能缺陷，见于先天性慢性肉牙肿、中性粒细胞异常缺陷综合症、先天性丙种球蛋白缺乏症等，及长期使用免疫抑制剂时。2023/11/30临床常用免疫学检查46三、肿瘤标志物（tumormarker）检测1、是由肿瘤细胞本身合成、释放或机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质2、可反映细胞恶变各阶段的表型及基因特征性3、包括蛋白类（甲胎蛋白、癌胚抗原等）、糖类、酶类肿瘤标志物2023/11/30临床常用免疫学检查47（一）甲种胎儿球蛋白

（alphafetoprotein,AFP）胎儿早期由肝脏合成的糖蛋白，当细胞或组织发生恶变时，有关基因被激活使AFP重新开始合成RIA或ELISA法正常值低于25ug/L原发性肝癌AFP大于300ug/L生殖腺胚胎癌、病毒性肝炎、肝硬化、孕妇均有血清AFP升高，一般低于300ug/L2023/11/30临床常用免疫学检查48（二）癌胚抗原测定

（carcinoembryonicantigen,CEA）富含多糖的蛋白复合物，胎儿早期的消化管有合成CEA的能力正常值：RIA法和ELISA法小于15ug/L90%的胰腺癌、74%的结肠癌、60%的乳腺癌出现CEA的明显增高，大于60ug/L动态监测CEA有助于肿瘤的诊断、预后和复发的判断2023/11/30临床常用免疫学检查492023/11/30临床常用免疫学检查502023/11/30临床常用免疫学检查51四、自身抗体检测（一）类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）

RF是变性的IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis,RA）患者的血清和关节液内，也出现在其他自身免疫病（autoimmunedisease,AID）病人血清中可分为IgM型、IgG型、IgA型等，用胶乳凝集法测出的主要是IgM型，用ELISA法可检出其它亚型2023/11/30临床常用免疫学检查52病因未明的慢性炎症性疾病复杂的、多因素的发病机制临床经过多变，预后难料特征为：--关节滑膜的进行性破坏伴有软骨和骨骼的缺失--韧带和肌腱的损伤--运动功能和生活质量的丧失--提前死亡RA2023/11/30临床常用免疫学检查53RA病人体内细胞因子的失衡2023/11/30临床常用免疫学检查54

2023/11/30临床常用免疫学检查55

天鹅颈样畸形2023/11/30临床常用免疫学检查56足趾关节炎变造成的拇趾外翻及足趾屈曲畸形，小腿有RA血管炎后的溃疡2023/11/30临床常用免疫学检查57手X相，示各关节端骨质稀疏，X线I期2023/11/30临床常用免疫学检查58近指、掌指关节间隙狭窄，RA-X线第Ⅱ期2023/11/30临床常用免疫学检查59掌指关节端骨出现穿凿样破坏，以右第I掌指关节最为明显，RA-X线第Ⅲ期2023/11/30临床常用免疫学检查60部分指关节已呈骨性强直，以右中指及左食指远端指关节最为明显，右腕骨诸骨有融合，RA-Ⅳ期2023/11/30临床常用免疫学检查61肘部对称性皮下类风湿结节2023/11/30临床常用免疫学检查62足跟腱部类风湿结节2023/11/30临床常用免疫学检查63RF-IgGRF-IgARF-IgM2023/11/30临床常用免疫学检查64参考值：阴性<30U/L临床意义：

类风湿关节炎（阳性率70%）其它自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合症（SS）、多发性肌炎（PM）、硬皮病（PSS）等可阳性

慢性活动性肝炎、某些感染性疾病（传染性单核细胞增多症、结核病、感染性心内膜炎等）也可出现阳性2023/11/30临床常用免疫学检查65（二）抗核抗体检测

1.抗核抗体（antinuclearantibody,ANA）

抗核抗体是一种泛指抗各种细胞核成分的自身抗体的总称（ANAS），包括脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等，这种抗体无器官和种族的特异性2023/11/30临床常用免疫学检查66

免疫荧光法

以鼠肝细胞核或人喉癌细胞核（Hep-2细胞）作抗原时该抗体（1抗）可与之结合，再加入荧光标记抗人IgG（2抗）后可产生黄绿色荧光2023/11/30临床常用免疫学检查67血清抗体荧光素标记的抗免疫球蛋白细胞核细胞浆载片间接免疫荧光检测的原理2023/11/30临床常用免疫学检查68

根据细胞核着染荧光的图像可分为:

均质型DNP核蛋白边缘型DNA

颗粒型ENA

核仁型RNA

2023/11/30临床常用免疫学检查69ANA（-）2023/11/30临床常用免疫学检查70核周型2023/11/30临床常用免疫学检查71均质型2023/11/30临床常用免疫学检查72颗粒型2023/11/30临床常用免疫学检查73核仁型2023/11/30临床常用免疫学检查74抗着丝点型2023/11/30临床常用免疫学检查75

参考值：

免疫荧光法为阴性血清滴度>1：40为阳性

2023/11/30临床常用免疫学检查76

临床意义：

ANA阳性最多见于未治疗的SLE

阳性率达80%—100%（活动期几乎100%阳性）

2023/11/30临床常用免疫学检查772023/11/30临床常用免疫学检查782023/11/30临床常用免疫学检查792023/11/30临床常用免疫学检查802023/11/30临床常用免疫学检查812023/11/30临床常用免疫学检查822023/11/30临床常用免疫学检查832023/11/30临床常用免疫学检查842023/11/30临床常用免疫学检查85ANA阳性是结缔组织病的标志

混合性结缔组织病（mixedconnectivetissuedisease,MCTD）100%阳性系统性硬化病（systemicsclerosis,SSc）85%—95%阳性多发性肌炎（polymyositis,PM）30%—50%阳性

类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)

干燥综合症（SjogrenSyndrom,SS）等

2023/11/30临床常用免疫学检查86ANA阳性也可出现于其它疾病

原发性胆汁性肝硬化慢性肝病慢性感染恶性肿瘤等2023/11/30临床常用免疫学检查872.抗脱氧核糖核酸抗体（anti-DNAantibody，抗DNA）

其中抗双链DNA（doublestranded-DNA,ds-DNA）抗体的靶抗原是细胞核中的DNA双螺旋结构，它的检测有临床的重要性

正常结果：阴性

临床意义：抗ds-DNA抗体阳性见于活动期SLE，阳性率70%—90%，为SLE特异性抗体，特别在并发狼疮性肾炎时起重要作用，其它风湿病中抗ds-DNA抗体也可阳性但较少见2023/11/30临床常用免疫学检查88

3.可提取性核抗原多肽抗体谱

ENA（extractableantinuclearantigen）:由多种相对分子质量不同的多肽构成，利用免疫印迹试验可对这些抗原的自身抗体进行检测

2023/11/30临床常用免疫学检查89

ENA多肽7项是目前临床最多应用于风湿病检查的项目2023/11/30临床常用免疫学检查90抗Sm抗体：SLE标记性抗体抗核糖核蛋白抗体（U1RNP）

混合性结缔组织病（MCTD）高滴度阳性

SLE30%~40%阳性抗Ro抗体（SSA）/抗La抗体（SSB）干燥綜合症（sjogrensyndrome）80%阳性

SLE、特别是新生儿狼疮可阳性抗Scl-70抗体：硬皮病约30%阳性抗核糖体核糖核蛋白抗体（rRNP）：只出现于SLE2023/11/30临床常用免疫学检查91抗核小体抗体（ANuA）

对SLE有较好的敏感性和特异性，在狼疮性肾炎的发病机制中起中起重要作用。临床意义同于抗ds-DNA抗体，但更为敏感。2023/11/30临床常用免疫学检查92抗增殖细胞核抗原抗体（APCNA）：只出现于SLE，阳性率很低（约3%）抗着丝点抗体：硬皮病（系统性硬化症局限型—CREST）肺间质病变

原发性胆汁性肝硬化（PBC）2023/11/30临床常用免疫学检查93抗胞浆抗体检测:

抗线粒体抗体（anti-mitochondriaantibody,AMA）---是一组以线粒体内外膜蛋白为靶抗原、具有非器官和非种族特异性的自身抗体

抗线粒体抗体亚型M1-9，间接免疫荧光法临床意义：有助于自身免疫性肝病的诊断原发性胆汁性肝硬化（PBC）AMA阳性率>90%

2023/11/30临床常用免疫学检查94抗Jo-1抗体:

抗组氨酰-tRNA合成酶抗体

临床意义：多发性肌炎/皮肌炎可阳性肺间质纤维化发病前期及Jo-1綜合征2023/11/30临床常用免疫学检查95抗心磷脂抗体（anticardiolipinantibody,ACA）

抗磷脂抗体是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，其中以ACA可作为代表。

正常参考：阴性ELISA法测定≥2.1为阳性

2023/11/30临床常用免疫学检查96临床意义：

ACA阳性见于SLE、类风湿关节炎、干燥综合症、抗磷脂综合症以及肿瘤、感染等2023/11/30临床常用免疫学检查97抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)

（anti-neutrophilcytoplasmicantibody）

ANCA是存在于系统性血管炎患者血清中的一种自身抗体，可分为胞浆型（C-ANCA）和核周型（P-ANCA），采用间接免疫荧光法检测2023/11/30临床常用免疫学检查982023/11/30临床常用免疫学检查99靶抗原是蛋白酶－3（PR3）与韦格纳肉芽肿密切相关c-ANCA2023/11/30临床常用免疫学检查100c－ANCA2023/11/30临床常用免疫学检查101靶抗原是髓过氧化物酶（MPO）与MPA和局灶性节段性坏死性肾小球肾炎密切相关

p-ANCA2023/11/30临床常用免疫学检查102p－ANCA2023/11/30临床常用免疫学检查103临床意义：

C-ANCA（+）---韦格纳肉芽肿（WG）

P-ANCA（+）---血管炎性肾炎显微镜下多动脉炎（MPA）变应性肉芽肿血管炎（Churg-Strauss综合症）自身免疫性肝炎

2023/11/30临床常用免疫学检查104（三）组织和细胞抗体检测

抗线粒体抗体（anti-mitochondri