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文件编号：HAMK-OI--2015版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号：PAGEPAGE5呕吐毒素标准操作规程目的为了规范亲和柱净化样本中呕吐毒素的操作流程，特制订本操作规程。范围本标准适用于粮食、饲料、食品中呕吐毒素的检测。检出限和定量限项目岛津安捷伦样本检出限（µg/kg）样本定量限（µg/kg）样本检出限（µg/kg）样本定量限（µg/kg）DON12.9636.72151503职责部门名称部门职责质量管理部负责本制度的实施。负责本制度的监督执行。程序5.1原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过呕吐毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱呕吐毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。5.2溶液配制5.2.1PBS缓冲液：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL蒸馏水或去离子水溶解，用浓盐酸调节pH至7.0，再用蒸馏水或去离子水定容至1L。上述PBS缓冲液用于样品的提取、稀释，以及亲和柱的清洗。5.2.2呕吐毒素标准工作液：先用色谱级甲醇将高标稀释到5ppm，再用水将其稀释到1ppm，此时标品的溶剂为20%甲醇，然后再用20%甲醇将标准品梯度稀释到500ppb、200ppb、100ppb、50ppb。5.3样品前处理5.3.1玉米、小麦、面粉、配合饲料、浓缩料、精补料等吸水性较小的样本将样品粉碎，称取25g样品，加入5g聚乙二醇，加入125mL蒸馏水；高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；用快速定性滤纸过滤，收集滤液；滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；取2.5mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：25.3.2麸皮、豆皮、玉米胚芽粕、米糠等吸水性较强的样本称取10g样品，加入100mL蒸馏水；高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；用快速定性滤纸过滤，收集滤液；滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；取5mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：25.3.3酒类取脱气的酒类样品（含二氧化碳的酒类样品，使用前先搅拌或超声脱气）或不含二氧化碳的酒类样品25g，用PBS缓冲液定容至100mL；高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；用快速定性滤纸过滤，收集滤液；滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；取2mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：25.3.4酱油、醋、酱及酱制品取样品25g，用PBS缓冲液定容至100mL；高速均质（≥

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