山茱萸总降血糖作用的实验研究

山茱萸总降血糖作用的实验研究

中药山茱萸是山茱萸科植物的干燥成熟果肉，包括环烯醚类、脂肪酸和提取物。《本草纲目》中记述,其味酸涩,性微温;有补肝肾,涩精气,固虚脱的功效,常用于肾气丸、六味地黄丸、鹿茸丸等治疗糖尿病的中药复方。现代药理学研究表明,山茱萸中含有的环烯醚萜类(主要为马钱素和莫罗苷)和三萜酸类(主要为熊果酸和齐墩果酸)是降糖作用的主要活性部位。本文通过不同的糖尿病模型较系统地观察了山茱萸总萜的降血糖作用及对糖耐量的影响,为其进一步研究开发及机理研究提供了试验依据。1实验材料1.1ls-2000a型电子研制Sartorius分析天平:北京多利斯天平有限公司;TLS-2000A型电子秤:常熟双杰测试仪器厂;722型光栅分光光度计:上海第三分析仪器厂;LD5-10低速离心机:北京医用离心机厂;电热恒温水浴箱:淮阴医疗器械厂。1.2tfc类药物山茱萸总萜(terpenesoffructuscorni,TFC)由江苏吴中苏药医药开发有限公司提供。乙醇提取,大孔树脂分离获得萜类有效部位,经HPLC分析,环烯醚萜和三萜酸的总含量为54%。提取物用0.5%CMC-Na溶液混悬到所需浓度备用。1.3聚丁二醇acarbose,4-l-1,3-甲基苯磺酸酯四氧嘧啶(alloxan)、链脲佐菌素(streptozotocin):Sigma公司,临用前分别用生理盐水、0.1mol·L-1柠檬酸溶液配成所需溶液;拜唐平(acarbose):北京拜耳医药保健有限公司;葡萄糖测定试剂盒:上海荣盛生物技术有限公司;胰岛素放免试剂盒:北京华英生物技术研究所;糖化血清蛋白测定试剂盒、肝糖原测定试剂盒:南京建成生物工程研究所。1.4scxk-妇人场致scxk苏2002-4008昆明种小鼠,雌雄各半,由江宁县青龙山动物繁殖场提供,合格证号:SCXK(苏)2002-0018。SD大鼠,雌雄各半,由南京军区总医院提供,合格证号:SCXK(苏)2003-004。2实验方法2.1灌胃给药,多次灌胃小鼠禁食12h,眼眶静脉丛取血,离心分离血清,按试剂盒方法测定空腹血糖值,将小鼠分为5组:阴性对照组(溶剂:0.5%CMC-Na溶液,下同)、阳性药组(拜糖平30mg·kg-1)、山茱萸总萜高(100mg·kg-1)、中(50mg·kg-1)、低(25mg·kg-1)剂量组,每组12只。按0.2mL·10g-1体重连续灌胃给药10d,每天一次。第10天禁食7h后灌胃给药,同法测定给药后1h、2h、4h、6h时的血糖值。2.2灌胃给药后血糖值测定分组和给药剂量同上,连续给药4d。第4d禁食7h后灌胃给药,给药1h后灌胃给予淀粉5g·kg-1,给淀粉后同法测定0.5h、1h、2h的血糖值,并用梯形面积法计算曲线下面积。2.3山基层小鼠血糖检测小鼠禁食16h后尾静脉注射四氧嘧啶70mg·kg-1。72h后,测定空腹血糖值,血糖值高于16.7mmol·L-1者为高血糖小鼠。根据血糖水平将高血糖小鼠分为5组:模型对照组、阳性药组、山茱萸总萜高、中、低剂量组,每组14只。另取14只同批次正常小鼠作为正常对照组。给药剂量同上,同法连续给药10d。第10d禁食7h后灌胃给药,同法测定给药后1h、2h、4h、6h时的血糖值。继续给药2d,即第12d禁食过夜,给药1h后采血分离血清,按试剂盒方法测定胰岛素水平。2.4模型大鼠分组、给药及大鼠输注后糖化血清蛋白gsp的检测大鼠禁食24h后腹腔注射链脲佐菌素70mg·kg-1。72h后,测定空腹血糖值,血糖值高于16.7mmol·L-1者为高血糖大鼠。根据血糖水平将高血糖大鼠分为5组:模型对照组(溶剂)、阳性药组(拜糖平20mg·kg-1)、山茱萸总萜高(60mg·kg-1)、中(30mg·kg-1)、低(15mg·kg-1)剂量组,每组10只。另取10只同批次正常大鼠作为正常对照组(溶剂)。按1mL·100g-1体重连续灌胃给药12d。第12d禁食7h后灌胃给药,同法测定给药后1h、2h、4h、6h时的血糖值。继续给药2d,即第14d禁食过夜,给药1h后采血分离血清,按试剂盒方法测定胰岛素、糖化血清蛋白GSP的含量;取肝脏按试剂盒方法测定肝糖原含量。2.5统计方法所有数据均用均值±标准差(x¯±s)(x¯±s)表示。用t检验进行显著性检验。3结果3.1对正常大鼠血糖症的影响阳性药组和山茱萸总萜各剂量组空腹血糖值与阴性对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。结果见表1。3.2各组降血糖的比较与阴性对照组相比,阳性药组和山茱萸总萜高剂量组在0.5h、1h时能显著或非常显著地降低小鼠血糖值;中剂量组在1h时能显著降低小鼠血糖值;阳性药组、山茱萸总萜高、中剂量组在2h时也有降血糖的趋势,但与阴性对照组相比均无统计学差异(P>0.05);低剂量组血糖值与阴性对照组相比无统计学差异(P>0.05)。与阴性对照组相比,阳性药组与山茱萸总萜高剂量组分别可显著和极显著地降低糖耐量曲线下面积;中剂量和低剂量组有降低糖耐量曲线下面积的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。山茱萸总萜三个剂量组血糖值及糖耐量曲线下面积与阳性药组相比均无统计学差异(P>0.05)。结果见表2。3.3影响四氧嘧啶糖尿病模型中小鼠血糖和胰岛素水平的影响3.3.1各组小鼠血糖值的比较模型组较正常对照组血糖水平极显著性升高。与模型对照组比较,阳性药组和山茱萸总萜高剂量组在各时间点均能显著或非常显著地降低模型小鼠血糖值;中剂量组在1h、2h时和低剂量组在1h时能显著降低模型小鼠血糖值。结果见表3。ΔΔP<0.01vsnormal;*P<0.05,**P<0.01vsmodel.3.3.2各组大鼠血清中胰岛素含量的比较模型组较正常对照组胰岛素水平极显著性降低。与模型组比较,阳性药组、山茱萸总萜高、中、低剂量组均能显著提高血清中胰岛素的含量。结果见表4。3.4影响链霉菌糖尿病模型中大鼠血糖、胰岛素、糖化血、蛋白、肝糖原的影响3.4.1影响链霉菌糖尿病模型中大鼠血糖的形成3.4.2影响链霉菌的糖尿病模型中小鼠胰岛素、糖化血清蛋白和肝糖原的水平4山基层对-糖苷酶抑制剂的降血糖作用糖尿病是一种临床常见的慢性内分泌代谢性疾病,病程长且复杂、难根治,并可导致心脑血管疾病、肾功能衰竭、视网膜病变等严重的并发症。随着对糖尿病发病机制的深入研究,发现降糖药物主要通过保护胰岛β细胞或促进受损β细胞的修复、促进胰岛素分泌以增加血清胰岛素含量、增加胰岛素敏感性、改善胰岛素抵抗、延缓对葡萄糖的吸收、增加糖原的合成等途径达到降低血糖的目的。山茱萸总萜可能通过保护胰岛β细胞或促进受损β细胞的修复而提高血清胰岛素水平,通过促进糖原合成而增加肝糖原含量。α-糖苷酶抑制剂是新型的治疗糖尿病药物,通过抑制肠道内α-糖苷酶的活性而延缓葡萄糖的生成及吸收,减轻餐后高血糖现象。拜糖平是最早上市的α-糖苷酶抑制剂。有文献报道,山茱萸中含有α-糖苷酶抑制剂的活性成分,故选用拜糖平作为阳性对照药。山茱萸总萜可以提高正常小鼠糖耐量,作用强度与拜糖平相当,因此,推测可能对α-糖苷酶具有抑制作用,深入地研究正在进行中。近代研究认为,长期高血糖引起蛋白质发生非酶糖化反应,生成的糖基化终末产物(AGEs)是导致糖尿病并发症的重要因素。有文献报道,山茱萸环烯醚萜总苷可以延缓糖尿病肾病和血管并发症的发生发展。糖化血清蛋白反映了过去1～2周平均血糖水平且不受当时血糖浓度的影响,同时也能反映药物对体内非酶糖化作用的影响。山茱萸总萜可以显著降低糖尿病模型动物的血糖值和糖化血清蛋白的含量,提示其可能对糖尿病及其并发症均有一定的治疗作用。综上,山茱萸总萜对糖尿病模型动物具有良好的降血糖活性,推测可能是通过提高糖耐量、保护胰岛β细胞或促进受损β细胞的修复、增加肝糖原合成等多种途径发挥作用,其确切的作用机制正在进一步研究中。模型组较正常对照组血糖水平极显著性升高。与模型组比较,阳性药组和山茱萸总萜高、中、低剂量组在各时间点均能显著或非常显著地降低模型大鼠血糖值。结果见表5。模型组与正常对照组胰岛素水平、GSP含量