辛伐他汀对高肺血流并野百合碱注射大鼠肺动脉高压模型的影响

辛伐他汀对高肺血流并野百合碱注射大鼠肺动脉高压模型的影响

动脉高压（ph）是一种常见的临床综合征。最常见的是左右冠状动脉粥样硬化。这会导致右心衰竭和死亡。目前治疗PH的标靶已开始从单纯血管扩张剂转向抗血管重构,尤其是抗细胞增殖治疗,但尚缺乏临床长期使用方便、副作用轻微且效果良好的理想药物。近年文献报道辛伐他汀在一些PH的动物模型中能有效减轻甚至逆转PH及肺血管重构(PVR)。本研究通过高肺血流并野百合碱注射建立PH动物模型,采用辛伐他汀进行处理,探讨辛伐他汀在防治PH中的作用和价值。1对象和方法1.1各组大鼠腹主动脉-下腔静脉造瘘成功的检测雄性SD大鼠40只(体质量250～300g,购自四川大学实验动物中心),平均随机分为4组:安慰剂组、辛伐他汀A组[1mg/(kg·d)]、辛伐他汀B组[2mg/(kg·d)]、正常组。各组平均体质量差异无统计学意义。前3组参照文献的方法,行大鼠腹主动脉-下腔静脉造瘘手术,造瘘术结束前于下腔静脉抽血观察,若为动静脉混合血则表示造瘘成功。参照文献的方法配制野百合碱(购自美国Sigma公司),于造瘘术后第7d一次性腹腔注射野百合碱60mg/kg。1.2辛伐他汀对造瘘术后第535d的给药安慰剂组于造瘘术后第5～35d给予安慰剂每日1次灌胃;辛伐他汀A、B组于造瘘术后第5～35d分别给予辛伐他汀1mg/(kg·d)或2mg/(kg·d)每日1次灌胃;正常组正常饲养35d,不予任何处理。1.3流量动力学指标的测定1.3.1麻醉后右心导管术与多导生理仪检测造瘘术后第37d,即辛伐他汀停药1d,行12%乌拉坦8mL/kg腹腔内注射麻醉,经颈静脉插管,肝素化后右心导管术与多导生理记录仪检测mPAP。测量完毕后,抽静脉血3mL,用酶法测定血清总胆固醇。1.3.2rv/lv+s游离右心室(RV)和左心室加室间隔(LV+S),洗去血液,用滤纸吸去表面水分,分别用电子天平称重,计算RV/(LV+S)。1.4免疫组化染色将气管及完整心、肺自胸腔取出,10%中性福尔马林经气管缓慢注入肺内,使肺膜平滑膨胀,切取右下肺,浸泡于10%中性福尔马林液中固定48h,常规石蜡包埋,5μm厚度连续切片。切片分别行VanGieson弹力纤维(EVG)特殊染色和免疫组化LsAB法行α-平滑肌肌动蛋白(α-actin)染色(α-actin小鼠抗大鼠单克隆抗体购自武汉博士德公司)。EVG染色使肺小动脉弹力纤维着色,显示肌层厚度;α-actin染色阳性表达使肌细胞呈黄色。1.5关于力学指标的观察1.5.1evg染色切片观察采用Nikon&Spot图象采集处理系统(美国),400倍光镜观察EVG染色切片,每张切片随机计数20根管径在50～150μm的肺小动脉,计算其管壁厚度和外径。血管壁厚百分比(%)=2×管壁厚度÷外径×100%。1.5.2切片观察和-actin染色400倍光镜观察α-actin免疫组化染色切片,每张切片随机观察30根管径在15～50μm的小动脉。α-actin染色阳性即为肌化。无肌性血管肌化程度(%)=(完全肌化+部分肌化的血管数)÷30×100%。1.6统计方法实验数据以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析和q检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1治疗冠心病基肥与对照组相比,安慰剂组大鼠mPAP升高,右心室肥厚(P<0.05)。辛伐他汀治疗不同程度减轻了上述改变(P<0.05);而辛伐他汀A、B组间比较,差异没有统计学意义。见附表。2.2组m肺小动脉-actin的表达增加安慰剂组大鼠直径50～150μm的肺小动脉血管壁增厚,15～50μm肺小动脉α-actin的表达增加,与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。辛伐他汀治疗不同程度减轻了上述改变(P<0.05);而辛伐他汀A、B组间比较,差异没有统计学意义。见图1、2和附表。2.3两组患者mmol/l、mmol/l、mmol/l、mmol/l、.42.0.42.3.4.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3m正常组、安慰剂组、辛伐他汀A组、辛伐他汀B组血清总胆固醇浓度分别为(1.404±0.147)mmol/L、(1.455±0.247)mmol/L、(1.387±0.206)mmol/L、(1.434±0.229)mmol/L,组间比较差异无统计学意义。3辛伐他汀治疗ph的临床应用基础大量左向右分流的先天性心脏病若不及时手术根治,则可能并发梗阻性PH,从而使患者丧失手术机会。如何延缓先心病PH的形成;在已发生了梗阻性PH而丧失手术机会的患者如何减慢PH的进一步恶化,甚至在一定程度上逆转PH,是小儿心脏病学所面临的重要课题之一。目前普遍应用的大鼠PH模型有低氧、野百合碱诱导、高肺血流(腹主动脉-腔静脉造瘘或一侧肺切除)PH模型。本研究中,我们在国内首次通过腹主动脉-下腔静脉分流加野百合碱注射建立PH动物模型,该动物模型的病理生理改变与左向右分流型先心病PH的病理生理改变更为接近。随着对肺血管重构的细胞生物学研究的快速进展,学者们已经明确提出,肺血管重构应当成为各种肺动脉高压症的治疗的标靶。他汀类药物最早出现于1987年,在高脂血症的治疗中广泛使用,近来发现多数他汀类药物尚有多种调血脂以外的药理作用。但目前罕见有关辛伐他汀用于PH的报道。本研究我们对肺小动脉的体视学改变进行了观察。α-actin是血管平滑肌细胞收缩蛋白的主要构成成分之一,直径在15～50μm的小动脉由单一弹力层构成管壁,为无肌性小动脉。无肌性小动脉出现α-actin阳性表达,则提示小动脉肌化。实验证实辛伐他汀能明显减轻无肌性血管的肌化和血管壁增厚,说明辛伐他汀抑制了肺小动脉的重构。辛伐他汀正是通过抑制肺血管重构,进而抑制肺循环后负荷的增加,减轻了PH和右心室肥厚。由于辛伐他汀已有多年的临床使用经验,是心内科常用药物,该药长期应用毒副作用很小、经济负担不重、一天一次的用药依从性良好,故我们初步认为辛伐他汀可作为左向右分流型先心病的长期治疗用药。本研究的目的之一是为辛伐他汀治疗PH的临床应用进行前期研究,所以我们进行了初步的剂量探讨。我们将辛伐他汀溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中形成混悬液,吸取溶液灌胃,从而保证了剂量的准确。辛伐他汀2mg/(kg·d)是参考Nishimura的用药剂量,由于该剂量超过了成人(50kg)用量(5～80mg/d),所以我们又选择了1mg/(kg·d)的剂量进行研究。结果显示,辛伐他汀治疗无论是1mg/(kg·d)还是2mg/(kg·d),均能有效减轻PH和肺血管重构,且两组间治疗效果的差异无统计学意义。提示在临床应用治疗PH时,可考虑使用每天1