生物技术课程PPT展示

定义：PCR技术又称聚合酶链式反响〔polymerasechainreaction)，是通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。PCR技术:PCR技术的根本原理在微量离心管中,参加适量的缓冲液,微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶,一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环的反响过程,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍;扩增了特异区段的DNA带。①模板：单链或双链DNA②引物：16-30bp合成的寡核苷酸③DNA聚合酶：耐热的DNA聚合酶④底物：四种脱氧三磷酸核苷〔dNTP:dATP、dTTP、dCTP、dGTP)⑤Mg2+：DNA聚合酶的激活剂

PCR根本要素◆菌种活化与扩大培养是指将保存的处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面培养活化后，再经过茄子瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物又称为种子。◆获得优质种子必须具备条件①有一种能使保存的菌种转移到能到达最大的复活培养基上的方法②有一个不引起种子染菌的接种场所③具有定量判断种子质量标准的方法④具有定量测定菌种一系列生理状态变化的方法⑤选择能满足种子扩大培养的容器和其他环境条件◆酶的提取与纯化工业用酶纯度要求不一样皮革工业用蛋白酶纺织工业用淀粉酶纯度不需要高食品、医药、分析测试等用途的酶要有高纯度酶的提取是指在一定条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程，也称作酶的抽提，酶的初步纯化在酶的别离纯化前期，将经过处理或破坏的细胞置于一定溶液中，使被提取的目的酶与其它物质别离的过程，包括酶与细胞固体残渣的别离、酶与其他物质的别离。酶的提取在酶制备中最常用的几种沉淀方法：1.盐析法

2.有机溶剂沉淀3.等电点沉淀4.复合物沉淀二、根据酶分子大小、形状不同的纯化方法

1.离心别离技术2.透析与超过滤技术3.过滤4.凝胶层析技术常用凝胶交联葡聚糖凝胶〔Sephadex〕交联琼脂糖凝胶(Sepharose)

聚丙烯酰胺凝胶〔Biogel)二、酶的稳定性与保存保存酶制剂时应注意：1.酶制剂应该放置在低温，枯燥，避光，避氧的环境下，并尽量以固体的形式保存。2.酶制剂处于液体状态时，缓冲液的浓度、pH值、温度、活性稳定剂等因素都会对酶的活力造成影响。3.酶浓度越高，越稳定，不能保存酶的稀溶液。4.将酶固定化也会提高酶的稳定性。D.E=淀粉水解物中的还原糖（以葡萄糖计）全体固形物成分×100在工业中分解淀粉时以dextrose(右旋糖，葡萄糖〕的当量〔equivalent)D.E来表示。DP(degreeofpolymerization)重合度、聚合度直连淀粉分子内的α-葡萄糖的数量微生物原生质体融合：原生质体融合：通过酶解作用将两个亲株的细胞壁去除，在高渗条件下释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体。然后将两个亲株的原生质体在高渗条件下混合，参加融合促进剂聚乙二醇，仙台病毒〔生物〕或电融合等助融，使它们相互凝集。通过细胞质融合，促使两套基因组之间的接触，交换，遗传重组，在适宜条件下使细胞再生，在再生的细胞中获得重组体。生物芯片〔bio-chip〕：是指将生物分子〔寡聚核苷酸、cDNA、基因组DNA、多肽、抗原、抗体等〕以阵列形式固定于支持物的外表，然后与已标记的待测生物样品靶分子进行杂交或相互作用后，通过特定的仪器对反响信号的强度进行检测分析，从而判断样品中靶分子的种类与数量。将大量生物识别分子按预先设置的排列固定于一种载体〔如硅片、玻片及高聚物载体等〕外表，利用生物分子的特意性亲和反响，如核酸杂交反响，抗原抗体反响等来分子各种生物分子存在的量的一种技术.根据用途还可以把生物芯片分为两类：信息生物芯片〔information-biochip〕功能生物芯片〔function-biochip〕基因芯片、蛋白芯片、组织芯片、细胞芯片微流体芯片和芯片实验室疾病诊断和治疗、药物筛选、农作物的优育优选、司法鉴定、食品卫生监督、环境检测、国防、航天等领域。应用领域：1.食源性致病微生物检测方面的应用许多常见微生物如水产品中的霍乱弧菌、副溶血弧菌，奶制品、禽肉及其制品中的单增李斯特菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157，炭疽杆菌、绿脓杆菌、结核杆菌、SARS病毒、禽流感病毒等均可污染食品而导致多种疾病的爆发与流行，严重威胁着人类的健康。食源性病毒检测方法传统方法〔病毒别离培养和电镜观察〕免疫检测方法PCR为主的核酸检测方法很难满足目前食源性病毒检测的要求◆病毒大多无法通过培养的方法进行鉴定◆电镜观察的灵敏度低◆而免疫检测方法受到抗体和检测方法的限制◆不能对多种型分别同时检测※很难对病毒进行准确的检定，容易造成漏检，同时，目前方法的灵敏度不能检测出食品中的微量病毒污。是目前病毒检测的主要方法以PCR为主的病毒核酸检测技术基因芯片技术可以对多指标并行检测，同时检测多种病毒以及病毒的多种亚型，是目前病毒检测的热点研究方法实时定量PCR技术以其灵敏、快速和定量检测的优势，已经成为目前病毒检测方法的主流很难满足多亚型或多病毒的同时检测的要求，且该技术存在易污染、假阳性高的缺点2.生物芯片技术在兽药残留检测方面的应用近20年来，兽药在畜牧业中的应用日益广泛，但兽药残留对人体及环境会造成各种危害〔包括慢性、远期和蓄积性等〕，如致癌、发育毒性、体内蓄积、免疫抑制、致敏和诱导耐药菌株等。兽药残留常规的检测方法：仪器方法如高效液相色谱分析法（HPLC）和气相色谱/质谱联用