超敏C反应蛋白检测免疫比浊法

超敏-C反映蛋白检测（免疫比浊法）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中超敏-C反映蛋白（HS-CRP）的含量。二、临床意义（一）概述C-反映蛋白（CRP）是急性时相反映蛋白，由5个完全相似的非糖基化的亚单位构成，分子量为11D。在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合成快速。在急性时相反映高峰时肝合成蛋白质能力的20%是CRP的合成。C-反映蛋白能激活补体，引发调理作用，增强细胞的吞噬功效，对血小板凝集和血块收缩有克制作用。（二）临床意义1.hs-CRP与心血管疾病（1）hs-CRP可作为ACS的预后指标重度不稳定心绞痛（UAP）患者入院时，若CRP浓度≥3mg/L，其心绞痛的复发、冠状动脉血管置换术、心肌梗死和心血管疾病致死等心血管事件发生率比CRP<3mg/L的患者高.CRP≥3mg/L的UAP患者出院时有较高的再住院及发生心肌梗死的危险。出院时测定hs-CRP比入院时测定能更加好地预测90天的不良后果.另外，hs-CRP有助于鉴别出心肌肌钙蛋白（cTn）阴性而死亡率增高的患者。因此Morrow等认为，应当考虑联合使用cTn和hs-CRP来评定ACS危险程度。（2）hs-CRP是将来发生冠脉事件的预测指标前瞻性研究显示，hs-CRP是已知冠心病患者将来心血管病发病和死亡的预测指标。高水平的hs-CRP患者将来发生卒中危险增加2倍，将来发生心肌梗死危险增加3倍，将来发生周边血管疾病的危险增加4倍。（3）hs-CRP与其它生化指标对冠心病危险的预测价值hs-CRP对冠心病的预测价值明显高于的传统的冠心病危险因素如血脂、脂蛋白和载脂蛋白.如总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白AI和B（apoAI、apoB）。诸多冠心病危险因素，如肥胖、高血压、糖尿病、冠心病家族史及多个生化指标，仅仅只有hs-CRP和TC/HDL-C有单独的预测价值.另有研究发现，hs-CRP能鉴别那些血脂水平在适宜范畴的个体冠心病发生的危险性。（4）在冠心病的危险性评定时，hs-CRP与血脂指标均是独立的变量，如将两者同时检测并进行联合分析，其意义更大。与TC和hs-CRP在正常值75%下列的人相比，单独TC增高的人危险性增加2.3倍，单独hs-CRP增高的人危险性增加1.5倍，而TC和hs-CRP均增高的人群，发生冠心病的危险性增加5倍。因此TC和hs-CRP两个危险因素的联合作用远远不不大于单个危险因素所产生的影响。2.hs-CRP与糖尿病近年的研究发现，在2型糖尿病的患者中，血清CRP水平明显增高，且与大血管病变、微血管病变等并发症亲密有关.2型糖尿病患者中CRP水平增高，且与尿白蛋白排泄有关，而微量白蛋白尿现在认为是筛选早期DN的重要指标，亦是T1DM和T2DM患者心血管疾病发生率及死亡率明显升高的标志。因而，CRP水平可作为DN发生、发展及心血管疾病等终点事件发生的预测指标之一。因此CRP水平较BUN和SCr可更及时地反映糖尿病肾脏损害的程度,对糖尿病肾病发生、发展的早期预测含有重要意义。3.hs-CRP与炎症（1）CRP作为急性时相蛋白在多个急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时快速升高，并有成倍增加之势。病变好转时，又快速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正有关。（2）CRP与其它炎症因子的有关性：CRP与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等含有亲密有关性。CRP与WBC存在正有关。在炎症反映中起着主动作用，使人体含有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时，CRP可早于WBC而上升，恢复正常也很快。故含有极高的敏感性。（3）CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊疗：一旦发生炎症，CRP水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常。脓毒血症CRP快速升高，而依赖血培养则最少需要48小时，且其阳性率不高。又如CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎，其阳性率达99％。（4）恶性肿瘤患者CRP大都升高。如CRP与AFP的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊疗。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有主动意义。手术前CRP上升，手术后则下降，且其反映不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床评定肿瘤的进程。。（5）用于评定急性胰腺炎的程度。当CRP高于250mg/L时，则可提示广泛坏死性胰腺炎.（三）医学决定水平1.当CRP浓度在3到10mg/L时，可作为心血管危险因素评定2.当CRP浓度在10到20mg/L时，可作为儿科医院判断小朋友病毒还是细菌感染的指标3.当CRP浓度＞20mg/L时，可作为炎症反映的监测。三、检查原理样品中高敏C－反映蛋白与结合在乳胶颗粒表面的羊抗人C－反映蛋白抗体结合，产生抗原抗体反映，使胶乳颗粒形成凝集，产生一定浊度。浊度高低反映样品中高敏C－反映蛋白的含量，通过与同样解决的校准品比较，即可计算出样品中高敏C－反映蛋白含量。四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处在安静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立刻松开；对的使用抗凝剂；避免溶血；避免过失性采样。样品运输过程中应避免过分振荡、避免样品容器的破损、避免样品被污染、避免样品及唯一性标志的丢失和混淆，避免样品对环境的污染、水分蒸发。HS-CRP测定样品为空腹血清、血浆（肝素或EDTA抗凝）。样品应在低温条件下运输保存，样品中高敏C－反映蛋白在2～8℃保存可稳定5天，－20℃保存可稳定30天。五、试剂（一）试剂构成R1：试剂1胶乳溶液＞0.1mg/mlR2：试剂2胶乳溶液＞0.5mg/ml高敏C－反映蛋白多点校准品（0.5ml×6）标示值见瓶签不同批号试剂中各组份不能交换。（二）试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。（三）试剂的保存及稳定性1.不能冰冻试剂。2.未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定时为瓶签标示的使用期。开瓶后的试剂应在2～8℃保存，稳定时为30天。（四）试剂性能可接受的指标空白吸光度：试剂空白在主波长570nm、副波长800nm处，10mm光径下，吸光度值≤1.000。（五）试剂使用中的注意事项1.严格按照试剂阐明书的规定使用试剂。2.试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的使用期。对超出使用期的试剂不能使用。3.严禁放置0℃下列保存。4.试剂开瓶后，如果长久放置，会吸取空气中的二氧化碳，造成pH值下降，造成测定值不精确，因此请尽快使用。5.当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值＞1.000时，表明试剂已失效，应弃去。6.因胶乳放置一段时间后可能会下沉，请每隔7天对R1和R2混匀。混匀时避免产愤怒泡。7.装载试剂时避免产愤怒泡，否则成果无法确保。8.不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能混用，否则试剂的稳定性将无法确保。六、防止危险发生的注意事项使用时应避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者附着到皮肤上的时候，请立刻用大量清水冲洗，如有必要，请接受医生的治疗。七、解决废弃物时的注意事项试剂反映后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照有关法规进行废物解决。六、操作环节1.基本参数方法：终点法样品/试剂：3/200主波长：570nm反映温度：37℃副波长：800nm反映时间：10min2.操作（1）工作曲线绘制将校准品浓度由低到高次序排列后，按下表操作：加入物C1C2C3C4C5C6校准品（μl）666666试剂R1（μl）300300300300300300混匀，37℃恒温1分钟，570nm波优点以空白管调零测定吸光度A1，37℃恒温4分钟。试剂R2（μl）100100100100100100混匀，37℃恒温5分钟，570nm波优点测定吸光度A2，计算△A=A2-A1，绘制校准曲线图。（2）样品测定加入物空白（B）测定（U）样品（μl）--6（μl）6--试剂R1（μl）300300混匀，37℃恒温1分钟，570nm波优点以空白管调零测定吸光度A1，37℃恒温4分钟。试剂R2（μl）100100混匀，37℃恒温5分钟，570nm波优点测定吸光度A2，计算△A=A2-A1。3.操作流程图主波长:570nm副波长:800nm空白读数空白调零时间:主波长:570nm副波长:800nm空白读数空白调零时间:温度:37℃5分钟4分钟1分钟5分钟4分钟1分钟R2R2:100μlR1:300μl样品:6μl4.计算使用多点非线性/半对数校准模式，以样条函数为计算模式，根据校准品的值与吸光度变化值作剂量/响应曲线，样品中HS-CRP的含量可根据其吸光度变化值在剂量/响应曲线上计算出。七、参考值范畴＜3.0mg/L八、注意事项（一）本试剂尽管含有较好的抗交叉污染能力，但仍应根据仪器性能及实验室条件做好避免交叉污染的工作。（二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品体积比例不变的条件下，适宜增加或减少试剂与样品的用量。（三）采用必要的防止方法使用试剂，试剂使用后应立刻盖紧瓶盖，避