hplc法测定西南不同主产地生姜中6-姜酚的含量

hplc法测定西南不同主产地生姜中6-姜酚的含量

中国西南部有许多山区，气候湿润，全年高，地理环境适宜。对生姜有害，有利于生长，品质优良。主要成分是姜酚。在医学上,生姜是重要的中药材,它是卫生部首批公布的药食兼用资源之一。姜酚是姜中辣味成分的主要组分之一,现代医学研究证实,姜酚具有很强的生物活性和药理作用,其具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、消炎、强心、降压、防治心血管疾病、健胃与抗胃溃疡、保肝利胆、防腐杀虫等广泛的生物活性。6-姜酚为姜酚中最主要的活性成分,其可以治疗皮肤癌,抑制恶性细胞增生。研究表明生姜的保健特性和药食兼用特性大部分都与6-姜酚有直接或间接的关系,通过建立HPLC方法来准确测定西南各主要产地生姜中6-姜酚含量,为生姜在医药保健方面的应用提供依据。1主要设备和材料1.1超声、仪器和干燥配方测量d分离器dq-25d高效液相,型号:Aglient1260型,VWD检测器;超声,型号:KQ-250DB,昆山市超声仪器有限公司;真空干燥,型号:BZF50型,Boxun;电子天平,型号:METTLERTOLEDO。1.2-姜酚对照品生姜:在西南地区云、贵、川三省相关产地购买;6-姜酚对照品:购买自天津中新药业,纯度98%(HPLC);水:二次蒸馏水;其余试剂均为分析纯。2实验部分2.16-姜酚含量测定2.1.1水、温度和塔板数色谱柱:DiamonsilC18(5μm,4.6×250mm);流动相:乙腈∶水=66∶34;柱温:30℃;流速:1.0mL/min;波长:280nm;进样量:10μL。理论塔板数以6-姜酚计,大于35000。结果如图1所示,对照品(A)及样品(B)基线平直,峰形对称尖锐,无拖尾,显示在此条件下样品组分分离效果良好。2.1.2对照品溶液的制备精密称取6-姜酚对照品15.44mg至25mL容量瓶中,甲醇超声溶解,定容后作为对照储备液。根据实验要求,用甲醇稀释成5个不同浓度水平的系列对照品溶液,置于4℃冰箱避光保存。分别精密称取粗姜酚7.94mg、8.01mg、15.02mg、17.21mg和26.00mg至10mL容量瓶中,甲醇超声溶解,定容后置于4℃冰箱避光保存。2.1.3标准曲线的绘制将6个不同浓度水平6-姜酚对照品溶液依次连续进样3次取平均值,浓度为横坐标X,峰面积值为纵坐标Y,绘制标准曲线如图2,计算回归方程,R值。标准曲线回归方程为Y=6246.5X+4.4,R=0.999962。6-姜酚浓度在0.06176-0.37056mg/mL范围内,6-姜酚浓度与峰面积的线性关系良好。2.1.4进样和进样次数配制低、中、高三种浓度分别是0.067、0.154、0.344mg/mL的6-姜酚标准品溶液,在一天之内分别连续进样5次,以及连续5天分别进样1次,检测6-姜酚的峰面积,日内、日间RSD值分别是0.11%、0.19%。2.1.5进样和日内、持续时间进样6-姜酚含量精密吸取浓度为0.801mg/mL的供试品溶液,分别间隔0、1、2、4、8、16、24小时进样1次测定6-姜酚含量,以及分别间隔1、3、6、10、15、30天进样1次测定6-姜酚含量,日内、日间RSD值分别是0.48%、1.00%。2.1.6重复精密吸取5份不同浓度水平供试品溶液,测定6-姜酚的含量,RSD值为0.87%。2.1.7最低浓度ms空白溶剂甲醇峰高0.12mAu,0.067mg/mL6-姜酚标准品的峰高52.5mAu。信噪比3∶1,6-姜酚能被检测出的最低浓度为4.59×10-4mg/mL。空白溶剂甲醇峰高0.12mAu,0.067mg/mL6-姜酚标准品的峰高52.5mAu。信噪比10∶1,6-姜酚能被检测出的最低浓度为1.53×10-3mg/mL。2.1.8加样回收率试验取6-姜酚含量为41.13%的粗姜酚不同质量5份,精密称定,分别加入6-姜酚标准品0.344mg,配制待测样品溶液,测定6-姜酚含量,计算加样回收率,RSD值为1.21%。2.1.9-姜酚质量分数的计算样品溶液进样10μL,按“2.1.1”色谱条件进行HPLC测定6-姜酚含量,按以下公式计算。c为进样时样品浓度,mg/mL;A为样品中6-姜酚所对应的的峰面积,mAu·s;W6-姜酚为样品中6-姜酚的质量分数;x为稀释倍数;v为进样溶液总体积,mL;m为样品质量,mg。2.2生姜是中国西南部的主要药物2.2.1小麦粉的制备将不同品种的生姜分别洗净切片,恒温烘干,粉碎至粉末状,过40目筛,密封阴凉处保存。分别取干姜粉末约0.5g,精确称量,置于50mL容量瓶,加入30mL甲醇,振荡摇匀浸泡24h。恒温50℃,超声40min,用甲醇稀释至刻度,摇匀,置于冰水浴中冷却15min,取出后用有机滤膜(0.45μm)迅速过滤,放至室温,得待测滤液。2.2.26-姜酚含量测定3不同部位生姜的6-姜酚含量建立了生姜中主要药用有效成分6-姜酚的HPLC检测方法,并对来自西南地区贵州水城、兴义、安顺、长顺,云南罗平,四川键为(黄口、白口)和贵州