高效液相色谱法测定母姜与子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚

高效液相色谱法测定母姜与子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚

生姜是生姜的新鲜根茎，味道温和，属于肺、脾和胃。具有解外寒、止吐、祛痰、止咳等功效。这是一种广泛使用的药物和谷物。生姜中姜辣素是其辛辣风味的主要来源,具有抗氧化、抑菌消炎、保肝护肝及抗肿瘤等多种药理活性,因此姜辣素含量是评价生姜药用活性的重要指标。民间常有“姜是老的辣”的说法,老姜是生姜中的母姜,皮厚肉坚,味道辛辣,可以做中药,治疗风寒等,其药效大于子姜。有关母姜与子姜的成分比较鲜有报道,战琨友等采用气相色谱-质谱联用证明母姜中姜辣素类化合物相对含量比子姜高7.86%,但是仅通过面积归一化法比较姜辣素含量不够准确。本实验采用高效液相色谱法,分析比较母姜与子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的含量,为生姜资源的综合开发和利用提供理论依据。1erosc的试剂材料:生姜,于2011年11月30日采自山东莱芜,由山东中医药大学李佳博士鉴定为ZingiberofficinaleRosc.的母姜和子姜。试剂:乙腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司);6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚对照品(自制,纯度均大于98%);水为Milli-Q超纯水;95%乙醇为分析纯(山东禹王实业有限公司)。仪器:KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);BUCHI旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司);Agilent6520高效液相色谱仪。2方法和结果2.1加入0.0%乙醇取母姜和子姜,切成粒径5mm左右的碎粒,分别精密称取50.0g,置入具塞烧瓶中,加入100mL95%乙醇,称重;超声处理30min(功率150W,频率40kHz),称重;95%乙醇补足重量,将提取液过滤蒸干,残渣用乙腈溶解并定容于10mL的容量瓶中,然后将溶液过0.45μm的微孔有机滤膜,待用。2.2储备液的制备分别精密称取50mg6-姜酚、40mg8-姜酚和50mg10-姜酚,用乙腈充分溶解后定容于10mL的容量瓶中,作为对照品溶液的储备液。然后分别精密量取储备液2.5、1.0、0.5、0.5、0.5和0.5mL,用乙腈定容至5、5、5、10、25和50mL。所得对照品溶液浓度:6-姜酚分别为2.50、1.00、0.50、0.25、0.10和0.05mg/mL;8-姜酚分别为2.00、0.80、0.40、0.20、0.08和0.04mg/mL;10-姜酚分别为2.50、1.00、0.50、0.25、0.10和0.05mg/mL。包括储备液在内,共得到了7个不同浓度的对照品溶液,待用。2.3流动相a,低烷基苯磺酸酯类InertsilODS-SP色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),二元梯度洗脱,流动相A为乙腈,B为水。梯度洗脱程序:0min,10%乙腈;0～25min,10%～60%乙腈;25～60min,60%～100%乙腈。进样量:10μL;流速:1mL/min;检测波长:280nm。2.4线性关系的考察分别取2.2中7个不同浓度的对照品溶液,进行高效液相色谱分析,记录色谱峰面积。以峰面积Y为纵坐标,以对照品溶液浓度X为横坐标,绘制标准曲线。结果表明,6-姜酚对照品浓度在0.05～5.00mg/mL范围内与峰面积呈现良好的线性关系,Y=5×107X+2000000,R2=0.9999。8-姜酚对照品浓度在0.08～4.00mg/mL范围内与峰面积呈现良好的线性关系,Y=3×107X+639819,R2=0.9997。10-姜酚对照品浓度在0.10～5.00mg/mL范围内与峰面积呈现良好的线性关系,Y=5×107X+2000000,R2=0.9998。2.5对照品的标准偏差取对照品溶液贮备液,连续进样6次,记录色谱峰面积。6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚对照品峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.42%、0.29%和0.35%,表明此方法精密度良好。2.6色谱峰面积测定分别配制6份母姜和子姜供试品溶液,进行高效液相色谱分析,记录色谱峰面积。比较母姜和子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的峰面积,这3种化合物峰面积的RSD分别为0.23%、0.45%和0.37%,表明此方法重现性好。2.7对照品溶液的制备分别配制9份母姜和子姜供试品溶液,分为3组,样品中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量为已知。每份供试品溶液各取10mL,分别加入0.5、1.0和2.0mL对照品溶液的母液,用乙腈定容至25mL的容量瓶中。按照2.3所示色谱条件进行高效液相色谱分析,记录色谱峰面积,计算回收率。母姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的平均回收率分别为99.81%、98.94%和100.13%,子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的平均回收率分别为100.21%、100.33%和99.90%,见表1。2.8色谱峰面积测定取同一供试品溶液,分别于室温条件下放置0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0h,后将供试品溶液和对照品溶液进行色谱分析,记录色谱峰面积。在6h内测定供试品和对照品溶液,以6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚3种化合物的峰面积为指标,峰面积的相对标准偏差分别为0.25%、0.79%和0.45%,表明供试品溶液在室温6h内稳定。2.9测定产物的色谱图分别配制同一时间收获的3个不同批次的母姜和子姜供试品溶液进行色谱分析,记录色谱峰面积,每个样品重复测定3次。对照品溶液以及母姜和子姜的液相色谱图如图1所示,含量测定结果如表2所示。结果表明母姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量均远高于子姜,其中6-姜酚和10-姜酚的含量约是子姜的2倍。3母姜的质量特性研究结果表明,实验样品中母姜的6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量比子姜中的要高,这对母姜与子姜的合理开发利用提供了依据。母姜质地结实,纤维含量高,水