egcg磷脂复合物的制备及表观油水分配系数的测定

egcg磷脂复合物的制备及表观油水分配系数的测定

表中无儿童茶素（ecgg）是茶叶中儿茶素的主要成分之一，约占儿茶素总数的50%60%。它也是儿茶素中最具抗逆性的成分。它具有清除体内自由基、抗癌、抗炎、抗突变、抗衰老、神经系统保护和肝功能改善等功效。由于EGCG具有多酚羟基、极性大、易溶于水,从而限制了其在食品中的广泛应用;此外由于稳定性较差,EGCG在体内的生物利用度较低。磷脂复合物系指在非质子传递溶剂中,天然活性成分与磷脂以一定配比,通过电荷迁移或极性相互作用而形成的较为稳定的化合物或络合物。磷脂复合物的形成能改善天然活性成分的脂溶性,增强机体对天然活性成分的吸收,提高其生物利用度,但是目前未见有关EGCG磷脂复合物的研究报道。因此,本研究采用物理方法制备EGCG磷脂复合物,并通过对EGCG磷脂复合物一些理化性质的考察,以确定EGCG磷脂复合物的制备工艺,为EGCG及其磷脂复合物的深入研究与利用提供理论基础。1材料和方法1.1化学试剂及试剂EGCG杭州禾田生物技术有限公司;大豆卵磷脂郑州四维磷脂技术有限公司;甲醇(色谱纯)国药集团上海化学试剂有限公司;无水乙醇、甲酸、正辛醇、氯仿、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、溴化钾等均为国产分析纯试剂。1.2结构仪器和仪器Laborota4000型旋转蒸发仪德国Heidolph公司;SHB-Ⅲ型循环水式真空泵郑州长城科工贸有限公司;Tensor-27型傅里叶变换红外光谱仪、D8AdvanceX射线衍射仪德国Bruker公司;HWCL-3恒温磁力搅拌浴郑州长城科工贸有限公司;Agilent1100型高效液相色谱仪美国Agilent公司;UV-2450型紫外分光光度计、AY-120电子精密天平、BL-220H分析天平日本Shimadzu公司;DSC823e型差示扫描量热仪(DSC)瑞士梅特勒-托利多公司。1.3方法1.3.1大豆中采用ecgg法合成大豆卵磷脂EGCG磷脂复合物的制备参照戴彦韵的方法并稍做修改。准确称取490mg大豆卵磷脂和100mgEGCG(大豆卵磷脂和EGCG物质的量比为1:1),将大豆卵磷脂置于圆底烧瓶中,加入10mL无水乙醇室温搅拌溶解后,边搅拌边逐渐加入EGCG,缓慢升温至40℃,持续搅拌冷凝回流反应4h,真空干燥。根据复合物易溶于氯仿而EGCG不溶于氯仿的特性,将产物加入适量的氯仿充分溶解,经0.45uf06dm的非水滤膜过滤,制备得到EGCG磷脂复合物。1.3.2ecgg磷脂化合物的结构试验1.3.2.不断最佳溶液的制备将EGCG和EGCG磷脂复合物分别溶于无水乙醇溶液中,制成等EGCG浓度的乙醇溶液;按复合物溶液中磷脂的浓度条件制备等浓度的磷脂乙醇溶液。3种溶液进行紫外全扫描分析。1.3.2.红外光谱分析采用KBr压片法分别对EGCG、磷脂、EGCG磷脂复合物及EGCG和磷脂的物理混合物在400～4000cm-1范围内进行红外光谱扫描分析。1.3.2.线衍射分析分别对EGCG、磷脂及EGCG磷脂复合物进行X射线衍射扫描分析,条件如下:石墨单色器单色化Cu-Kα,管压40kV,管流40mA,衍射范围5°<2θ<60°,步长0.05°,每步计时0.1s。1.3.2.sf测定以空坩埚为参比、升温速率10℃/min、扫描范围25～300℃、N2流速30mL/min,分别对EGCG、磷脂、EGCG磷脂复合物及EGCG和磷脂的物理混合物进行DSC测定。1.3.3正辛醇和正辛醇的缓冲液对gcg质量浓度的影响精密称取EGCG和EGCG磷脂复合物适量,分别溶于正辛醇饱和的磷酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液饱和的正辛醇中,配成以EGCG质量浓度为基准的1mg/mL的溶液(EGCG的质量浓度为ρ0),各取溶液2mL于10mL具塞试管中,分别加入2mL磷酸盐缓冲液饱和的正辛醇和正辛醇饱和的磷酸盐缓冲液。37℃摇床振摇4h,5000r/min离心10min,取下层水相并利用高效液相色谱法测定EGCG,由标准曲线计算EGCG的质量浓度ρw,按照下式计算表观油水分配系数P。2结果与分析2.1磷酸盐溶液在c由图1可知,EGCG和EGCG磷脂复合物在278nm波长处有最强吸收峰,而磷脂溶液在278nm处的吸收峰较低。EGCG磷脂复合物的吸光度明显降低,这可能是由于磷脂的极性基团部分与EGCG发生了较强的相互作用而引起的。2.2ecgg磷酸盐混合物的结构表征由图2可知,EGCG的特征吸收峰为O-H(3357.86、3478.25cm-1),磷脂的特征吸收峰N-H(3407.26cm-1)、P=O(1234.61cm-1),混合物的特征吸收峰:O-H(3356.18、3477.42cm-1)、P=O(1224.37cm-1),形成EGCG磷脂复合物后特征吸收峰N-H和O-H移向低波数,且峰形较宽而钝,P=O(1200.19cm-1)蓝移近30cm-1,说明EGGC分子中的酚羟基与磷脂胆碱部分中的季铵氮产生了强的分子间作用力。2.3ecgg为复合粉体的晶体结构由图3可知,EGCG主要以晶体形式存在,晶体衍射峰强烈;磷脂在10°以后主要以无定型特征存在,衍射图上仅为一宽带。EGCG磷脂复合物在10°以后EGCG的晶体衍射峰消失,完全表现为无定型特征。这可能是因为EGCG与磷脂的极性端定向结合,从而使复合物处于高度分散状态,其自身的晶体特征被抑制。2.4ecgg的晶型变化由图4可知,物理混合物中,磷脂与EGCG的熔点峰依然存在,只是受各自物理混合的影响有所变化。EGCG磷脂复合物中EGCG的熔点峰完全消失,证明EGCG晶型发生变化,可能是EGCG的极性基团与磷脂的极性基团部分发生了分子间相互作用,磷脂的两条长脂肪酸链对EGCG进行了包裹,使EGCG高度分散于磷脂中,进而改变了EGCG的相变温度,其特征吸收峰明显改变,形成新的物相——磷脂复合物。2.5ecgg为复合溶剂EGCG和EGCG磷脂复合物的正辛醇-水表观油水分配系数P见表1。根据生物药剂学分类系统,同时具有良好水溶性和透膜性的被动吸收的药物有较好吸收,所以一般认为lgP>5(即亲脂性强)的药物不易吸收,这主要是由于它们的水溶性太差,lgP<1(即亲水性强)的药物不易吸收,这主要是由于它们的脂溶性太差,而适合吸收的药物的表观油水分配系数lgP在1～4范围内较为理想。根据表观油水分配系数实验结果可知,EGCG的lgP<1,而EGCG磷脂复合物的lgP在1～2之间,因此EGCG磷脂复合物应为适合吸收的药物。EGCG磷脂复合物在正辛醇中溶解性能的改善,一方面是由于其无定型的状态,另一方面可能是由于EGCG磷脂复合物中磷脂的极性端与EGCG相互作用而受到一定的掩蔽,从而对其极性产生较大的影响,使EGCG磷脂复合物表现出较强的脂溶性。3ecgg非水滤膜过滤的磷系物本研究根据EGCG磷脂复合物易溶于氯仿而EGCG不溶于氯仿的特性,将产物加入适量的氯仿充分溶解,经0.45uf06dm的非水滤膜过滤,制备得到复合率为100%的EGCG磷脂