DB15-T 2195-2021 规模化牛场牛病毒性腹泻-黏膜病净化技术规范

65.020.30CCS

B4115 DB15/T

2195—2021规模化牛场牛病毒性腹泻-黏膜病净化技术规范Technical

Regulation

of

Eradication

Bovine

diarrhea

CattleFarms2021-05-25

发布 2021-06-25

实施内蒙古自治区市场监督管理局 发

布DB15/T

2195—2021 本文件按照GB/T

《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC

19）归口。本文件主要起草人：王炜、王永杰、徐晓静、赵杰军、程晓飞、贺永强、张福隆、田茂、葛旭升、李庆东、王洪、闫喜军、王潇、李光鹏、胡薇。DB15/T

2195—20211 范围本文件规定了规模化牛场牛病毒性腹泻-黏膜病净化的检测方法，无疫场群的建立、维持及综合生物安全措施。本文件适用于规模化牛场牛病毒性腹泻-黏膜病的检测及免疫无疫场的建立。2 规范性引用文件文件。GB/T

6682

分析实验室用水规格和试验方法GB/T

牛病毒性腹泻/NY/T

1168

畜禽粪便无害化处理技术规范农医发〔2017〕25号

病死及病害动物无害化处理技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1牛病毒性腹泻-黏膜病

viral

diarrhea-mucosal

由牛病毒性腹泻病毒引起的牛的传染病。3.2净化

对规模化牛场采取一系列措施，达到清除牛病毒性腹泻-黏膜病的过程。在某一限定的牛场内，根Persistent

infection，PI模化牛场中牛病毒性腹泻-黏膜病逐渐被清除的疫病控制方法。4 材料与方法4.1 仪器PCR仪、凝胶成像系统、高速台式冷冻离心机、组织研磨器或者研钵、普通冰箱、微量移液器、酶标仪、恒温箱、高压灭菌锅。4.2 试剂DB15/T

2195—2021RNA提取试剂盒；反转录酶、聚合酶，

℃保存，避免反复冻融；除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯；实验室用水应符合GB/T

6682

的要求。4.3检测方法4.3.1 抗原检测根据情况，选择下列之一或组合方法进行检测。4.3.1.1 荧光定量

参照GB∕T

18637-2018，

荧光RT-PCR检测方法。4.3.1.2 RT-PCR

检测采用附录A

RT-PCR检测方法进行检测。4.3.1.3 ELISA

检测采用商品化抗原捕捉ELISA方法。4.3.2血清学检测参照GB/T

，

病毒中和试验部分或部分

BVDV抗体间接ELISA试验方法进行检测。4.3.3合格免疫抗体判定标准4.3.3.1 个体免疫抗体合格标准，采用病毒中和试验，参照

GB/T

18637-2018，

病毒中和试验部分或

部分

BVDV

抗体间接

ELISA

试验方法进行检测。血清

BVDV

1:256。4.3.3.2 群体免疫抗体合格标准，抗体效价不低于

1:256

的群体阳性率不低于

%。5 净化群的建立5.1 净化策略5.1.1 采用

BVDV

疫苗免疫结合检测、淘汰持续性感染牛的净化策略。5.1.2 做好引种监测，引进的牛应为抗原抗体阴性。5.1.3 综合生物安全措施保障到位。5.2 感染状况普查阶段5.2.1 采样方法5.2.1.1 采血5

mL临床健康状况等。用猪耳断屑器从每头牛的耳廊腹部采取三角形的皮肤活组织样品，大小约为12×5

，然后用裹有医用纱布的回形针压在取样部位止血。DB15/T

2195—5.2.2 采样数量首次全群采样普查。之后新生犊牛、1月龄犊牛全部采样，免疫牛按5

%～10

%抽样比例采样。5.2.3 净化方案5.2.3.1 群体血清样品抗体阳性率不超过

20

%，采用全群普查筛查、淘汰

18

月龄以下

ELISA

法或

PCR

法进行抗原检测，淘汰

牛。5.2.3.2 群体血清样品抗体阳性率超过

20

%，全群普查筛查、淘汰

PI

牛，并进行全群免疫接种、监测。5.3 免疫间断5.3.1 疫苗商品化灭活疫苗或亚单位疫苗。5.3.2免疫程序20

%的牛场，进行春秋两季普免；3～4月龄犊牛免疫；青年母牛在配种前6～8周首免，配种前2～4周进行二免，以后每年在配种前2～4周免疫1次。5.3.3 检测评估二免后28日检测抗体。如果90

%的样品抗体不低于1:256，即可认为群体免疫合格。5.4 检测与淘汰阶5.4.1首次检测5.4.1.1 疫苗二免后

日，采用

ELISA

方法逐个检验，了解全群

免疫状况，结合

ELISA

或

法检测疑似

PI

牛。对检测的抗原、抗体均为阴性的牛隔离饲养，以备复检。5.4.1.2 对步骤5.4.1.1ELISA或PCR5.4.1.1间隔时间

3～5

周，确保潜在

PI

牛不遗漏，淘汰复检抗原阳性的牛。5.4.2 定期检测5.4.2.1

ELISA

方法或

5.4.2.21

月龄犊牛，按照上述方法复检，逐个检验，淘汰抗原阳性牛。5.4.2.3 疫苗免疫后

30

日左右，按

5

%～10

%抽查抗体，每年二次，常规检验。5.5 净化场的评估阶段5.5.1 评估时间在进入“假定健康阶段”后，按照免疫无疫标准、净化标准进行净化场评估。5.5.2 免疫无疫标准DB15/T

2195—5.5.2.1 免疫后每年检测

1

次，抗体阳性率不低于

90

%。5.5.2.2 每年随机按

5

%～10

%抽检一次，ELISA

抗原初筛和

3

PI

牛。5.5.3 净化标准5.5.3.1 BVDV

或

ELISA

抗原检测阴性。5.5.3.2 停止免疫两年以上，无牛病毒性腹泻-黏膜病抗原阳性牛。6 净化场的维持阶段6.1 免疫制定并实施合理的免疫程序。6.2 监测6.2.1 每年随机按

5

%～10

%抽检一次，抗体不低于

，群体阳性率不低于

90

%。6.2.2 出生犊牛抗原检测阴性。6.2.3 严格检疫引进牛只，逐头检测，确保抗原阴性。6.2.4 建立专门隔离饲养舍，引进后隔离饲养

日以上经检测合格后才可混群饲养。7 综合生物安全措施7.1合理的牛场选址根据国家和内蒙古自治区《动物防疫合格证》有关条件要求进行。7.2 生产模式坚持自繁自养，如必须从场外引进，做好隔离检疫。7.3 饲养管理加强饲养管理，减少应激。做好通风、保温、适宜的饲养密度。7.4 消毒措施入口设置消毒池。7.5无害化处理措施7.5.1 粪便处理按

1168

的规定执行。7.5.2 病死畜无害化处理按农业农村部发布的《病死及病害动物无害化处理技术规范》执行。7.6有害生物防治措施禁止在场内饲养犬、猫等其它易感动物。每6个月至少开展1次全方位彻底灭鼠。定期杀虫、防蝇。DB15/T

2195—7.7 其他生物安全措施7.7.1 设立隔离区和隔离屏障。7.7.2 严禁抗原阳性牛的引入。7.7.3 病牛隔离区设于牛舍的下风口。7.8 档案管理7.8.1 做好生产记录、饲料和饲料添加剂购进和使用记录、兽药购进和使用记录、免疫记录、消毒记录、人员车辆物品出入登记记录和销售记录等。7.8.2 记录保存不少于

2

年。cDNA1.0

5.02.5mmol/L

3.020pmol/

0.520pmol/

0.5

0.5DEPC

39.550.0dNTP5.05.0

1.0

1.0DEPC

2.014.0/bpBVDV

5′3′288BVDV

5′3′DB15/T

2195—附录A（规范性）BVDV

检测方法A.1引物序列BVDV病毒核酸RT-PCR检测方法所用引物序列见表。表A.1 引物序列表A.1 引物序列提取

5.0μL，置

mL灭菌离心管中，加入下游引物1.0μL，混匀，70

℃作用52～342℃作用1小时，

℃