王老吉奶茶对应激小鼠糖代谢机能低下及体内过氧化状态的影响

王老吉奶茶对应激小鼠糖代谢机能低下及体内过氧化状态的影响

1材料和方法1.1测定条件及试剂王老吉绿茶提取物（wlj）（国药标准：ws3-b347982003）由王老吉药业有限公司提供，生产批号：0605125；人参茎叶总剂量（rzg）由抚顺新泰人参饮料有限公司提供。丙酮酸试剂盒(CatNo:A081),肝糖原试剂盒,及丙二醛试剂盒(malondialdehyde,MDA)均购自南京建成生物工程研究所;6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylicacid(Trolox,为维生素E的水溶性衍生物),2,2″-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride(AAPH)及荧光素钠(sodiumfluorescein)均购自WakoPureChemicalIndustries,Ltd.(Osaka,Japan);葡萄糖(H41023719)为天津药业产品。1.2荧光酶标仪测定罗康全活力型血糖仪(GN03384832)(Roche,Germany),MK3型酶标仪(Labsystem,Finland),GENios荧光酶标仪(Tecan,Switzerland)。1.3实验分组7周龄♀性BALB/c小鼠,购自南方医科大学实验动物中心,许可证号SCXK(粤)2003-0002。饲养温度(23±2)℃,照明时间12h/d(7:00-19:00),小鼠饲养一周后进行实验实验将小鼠随机分成正常对照组、拘束对照组、125mg/kg人参皂苷阳性对照组、125及500mg/kg王老吉凉茶浸膏给药组,每组7只。阳性对照组及王老吉凉茶组以0.1mL/10g灌胃给药,正常对照组和拘束负荷模型组均灌胃等量空白水,每日1次连续给药5d,在末次灌胃30min后进行拘束应激实验,小鼠拘束装置参照文献制作,为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管,给予一次性拘束20h(12:00~次日8:00),拘束期间小鼠不能进食饮水,正常对照组小鼠为非拘束禁食禁水小鼠。1.4不同血糖消除的线性范围BALB/C小鼠5只,禁食20h口服葡萄糖2g/kg,分别于5、10、15、20、30、60和120min后尾静脉取血检测血糖浓度,求出血糖消除的线性范围。1.5大鼠糖的抗剂上述各组实验动物在禁食和拘束结束30min后口服葡萄糖2g/kg,分别测定口服葡萄糖20、40、60、80min的血糖浓度。1.6肝素钠小离心管液组在测定血糖浓度后,小鼠在乙醚麻醉下心脏取血0.5mL于肝素钠小离心管中,5000r/min5min离心,取血浆。按丙酮酸试剂盒方法测定血浆丙酮酸含量。1.7肝糖原合成测定1.8根据tars法测定血浆mda含量1.9荧光酶标板法检测酶活的强度本实验参照Davalos等人方法并加以改进。将96孔板每个微孔中加入待测样品溶液20μL,再加入磷酸钾缓冲液20μL和AAPH140μL(终浓度12.8mmol/L),最后添加荧光素钠20μL至终浓度为63nmol/L,立即启动反应并迅速将酶标板置于预温37℃的荧光酶标仪中开始测定。采用动力学方式,每2min测定一个点,至荧光强度衰减为零为止。ORAC值是以1μmol/L的Trolox在荧光衰减曲线上对应的保护积分面积作为标准对照计算。1.10数据的统计与分析实验数据以示,采用SPSS软件,利用ANOVA检验进行统计学处理,P<0.05有统计学意义。2结果2.1糖负荷大鼠的糖时量曲线结果显示血糖浓度在20min达峰值,80min后已降到空腹血糖水平,血糖线性范围在20~80min,见图1。2.2限制负荷对大鼠糖的抵抗力的影响如图2所示,与正常对照组相比,拘束负荷小鼠的血糖消除速率明显减慢,在40和60min时具有统计学差异。2.3糖代谢消除速率如表1所示,口服2g/kg葡萄糖后拘束负荷小鼠血糖消除半衰期(T1/2)明显延长(P<0.01),糖代谢消除速率下降。与应激对照组相比(P<0.01),人参皂苷给药组及王老吉给药组均能使应激小鼠糖耐受能力提高,结果表明王老吉凉茶能加速血糖利用。2.5orac水平如表3所示拘束负荷明显增加小鼠血浆的脂质过氧化产物MDA(P<0.01),且显著降低小鼠血浆中的ORAC水平(P<0.01);与应激对照组相比,人参皂苷和王老吉明显减少拘束负荷小鼠血浆中的脂质过氧化产物MDA含量(P<0.01),且明显升高拘束负荷小鼠血浆中的ORAC水平(P<0.01),表明王老吉凉茶能降低体内的过氧化水平同时能提高体内的抗氧化能力,人参皂苷也显示相同的作用。3王老吉茯苓茯苓茶多糖对小鼠血浆酮体及肝脏的代谢葡萄糖作为能源的利用在改善应激负荷引致的疲劳和各种生理机能低下中起到了重要的作用。小鼠拘束负荷20h后血糖浓度半衰期由51.8min延迟到57.3min,表明拘束负荷降低小鼠对葡萄糖作为能源的利用能力。125及500mg/kg王老吉凉茶给药促进拘束负荷小鼠的血糖消除速率,改善因应激负荷引起的血糖利用率低下,改善机体的能量代谢水平。当葡萄糖摄取不足时,机体会动员储存的脂肪作为能源利用,酮体是血浆脂肪酸代谢的不完全产物。我们的结果发现拘束负荷小鼠血浆酮体水平明显上升,表明拘束负荷增加小鼠血浆脂肪酸代谢的不完全产物。125及500mg/kg王老吉凉茶给药组降低拘束负荷小鼠的酮体水平同时促进肝糖原合成,改善因拘束负荷起因的能源代谢低下,证明王老吉凉茶能提高葡萄糖能源的利用的同时加强能量的储存。王老吉凉茶不仅降血浆中MDA含量,同时显著提高体内的抗氧化能力指数(ORAC)水平,能明显地缓解机体内的氧化应激状态可能有利于改善糖代低下状况。目前国内外对氧化应激与疾病间的关系以及氧化应激的发生机制从多方面进行了探讨和总结,取得了一定的进展和成果。但是关于糖代谢状态与体内抗氧化能力间的研究尚不多见。王老吉凉茶由岗梅根、木蝴蝶、火炭母、金钱草、布渣叶、淡竹叶金沙藤、五指柑、山芝麻、金樱根10味草药组成,具有清热解暑、祛湿生津等功能。本实验中我们以葡萄糖耐受实验来观察应激和血糖代谢的关系,同时测定小鼠体内氧化水平和抗氧化能力的变化。测定血糖浓度后,小鼠在乙醚麻醉下取出肝脏,按肝糖原试剂盒方法测定肝糖原含量。按MDA试剂盒说明书方法测定MD