虎标万金油控制菌检验方法的建立

虎标万金油控制菌检验方法的建立

虎标万金油系包含以凡士林为基础的外用软膏剂。它具有芳香、通风、止痒、清新和去除污垢的功效。中国药典2000年版对软膏剂的微生物限度早有规定,不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌,但由于虎标万金油具有一定的抑菌作用,按中国药典常规检查,阳性对照菌不能生长,试验不成立。为了提高阳性对照菌的检出率,建立该样品的控制菌检验方法,我们对此进行了多次实验,取得了较满意的结果。1细、细、成分配、回采培养基虎标万金油(厦门虎标医药有限公司批号:CA30201-205);十四烷酸异丙酯试剂(北京中联试剂精细化学品有限公司,批号:980424);胆盐乳糖培养基,营养肉汤培养基,溴化十六烷三甲铵琼脂培养基甘露醇高盐琼脂培养基,均为北京三药科技开发公司生产。HTY-200型集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)。金黄色葡萄球菌(26003)、铜绿假单胞菌(10104)(中国药品生物制品检定所提供)。2方法和结果2.1细菌溶液的制备按中国药典阳性对照菌液制备方法制备,使菌液为50~100个·ml-1。2.2温度稳定性的测定称取本品(供试品)10g,加入5ml无菌司盘80、10ml吐温-80,使匀后,慢慢加入45℃左右的0.9%无菌氯化钠溶液85ml,边加边搅拌(或研磨),使供试品充分乳化,作为1∶10的供试液,为供试品抑菌性的判断试验备用。3控制细菌检查3.1稀释溶液的抗菌性能在进行药品抑菌性作用判断试验的同时,我们也做稀释液抑菌性试验,以保证稀释液对本实验无干扰作用。3.1.1微生物限度检查法ml,2份分别加入与供试液等量的稀释液(无菌司盘805ml、吐温-8010ml、0.9%无菌氯化钠溶液85ml),1份作为阴性对照,1份加入铜绿假单胞菌液(加入量为50~100个菌),照微生物限度检查法检查。3.1.2微生物限度检查法ml,2份分别加入与供试液等量的稀释液(无菌司盘805ml,吐温-8010ml,0.9%无菌氯化钠溶液85ml),1份作为阴性对照,1份加入金黄色葡萄球菌液(加入量为50~100个菌),照微生物限度检查法检查。3.2试验中的抗菌性3.2.1阳性对照的确定ml,2份分别加入1∶10的供试液10ml,其中1份加入铜绿假单胞菌(对照菌液的加入量为50~100个菌)作为阳性对照。另1份加入与供试液等量的稀释液(无菌司盘805ml,吐温-8010ml,0.9%无菌氯化钠溶液85ml),作为阴性对照,照微生物限度检查法检查。结果见表1。3.2.2阳性对照的确定ml,2份分别加入1∶10的供试液10ml,其中1份加金黄色葡萄球菌液(对照菌液的加入量为50~100个菌)作为阳性对照。另1份加入与供试液等量的稀释液(无菌司盘805ml,吐温-8010ml,0.9%无菌氯化钠溶液85ml),作为阴性对照,照微生物限度检查法检查。实验结果见表1。3.3微生物测量检测称取本品(供试品)4g,分成2份,各加20ml十四烷酸异丙酯,使匀,分别加0.9%无菌氯化钠溶液200ml,充分震摇,萃取,静置分层;其萃取液用2套2联多次使用的无菌全封闭薄膜滤器过滤,用含有吐温-80的0.1%蛋白胨溶液冲洗至阳性对照可正常生长。取出滤膜4片,2片滤膜分别加到100ml的胆盐乳糖培养基中,其中1份加入铜绿假单胞菌对照菌液(对照菌液的加入量为50~100个菌)作为阳性对照,2片滤膜分别加到100ml的营养肉汤培养基中,其中1份加入金黄色葡萄球菌对照菌液(对照菌液的加入量为50~100个菌)作为阳性对照。照微生物限度检查法检查。实验结果见表2。4抑菌控制菌检查4.1对药品的抑菌性判定,应在微生物限度检查前确定,我国微生物限度检查是根据不同稀释度的菌数变化和控制菌的阳性对照试验是否正常检出来判断的,菌数测定可根据报告规则或培养基稀释法来报告抑菌性药品的菌数,不需对供试品的抑菌性成分进行处理,而对控制菌的检查,需根据供试品的不同情况进行处理,以消除抑菌成分的干扰。为此我们进行了药品抑菌试验,以判定该药是否有抑菌作用。从五批供试品抑菌实验结果看,该药品具有一定的抑菌作用。因此,我们采用了薄膜过滤法,以除去抑菌成分的干扰。4.2本实验供试品抑菌性的判断和控制菌检查的试验中加入阳性菌的量,是根据平板菌数计数的结果来加菌量的,在加阳性菌操作的同时又进行菌数测定,以确保阳性对照菌加入量在50~100个菌。4.3软膏剂控制菌检查采用十四烷酸异丙酯作为分散剂,对部分软膏剂品种可以通过薄膜过滤法