小鼠虚证四诊表现比较研究

小鼠虚证四诊表现比较研究

过去，作者的研究建立了一个收集大鼠的工作站和方法，并制定了相应的标准。这些方法的建立,主要检测的是KM小鼠。那么,是否适用于ICR、Balb/c、C57等国内外常用的其他品系小鼠呢?同时,对于相同的造模,这些小鼠在四诊表现方面是否存在异同?这是本研究的主要目的。在中医证候动物模型中,环磷酰胺(气虚造模)和乙酰苯肼(血虚造模)所造成的模型比较稳定,四诊特征明显,因而本研究采用这两种造模方法。1材料和方法1.1实验动物及设备KM、ICR、Balb/c、C57等4种品系小鼠,各30只,雄性,16～18g,由中科院上海实验动物中心提供。合格证号:KM:SCXK(沪)2002-0002;ICR、Balb/C57:SCXK(沪)2003-002。清洁级条件下常规饲养。1.2x-射线衍射法温度法MP200B型电子天平,数字WMY-01型温度计,SQF-EA体视显微镜,3200K(色温)500W摄像专用光源,自制光源装置,NIKONCoolpix4500数码相机,普通三脚架。小鼠半透明实验笼,划有小方格(5cm×4cm)的透明薄膜纸(26cm×16cm)。1.3组件和模型方法各种品系小鼠各自随机分为3组,每组10只。具体见表1。1.4红色指标检测体重、饮水、摄食、腋温、爪和尾显微数码拍照获取反映红色程度指标r值、晚间35s自主活动计数,以及一般外观表现的观察。以上指标第1、4、7、11、14日各检测1次,共5次。1.5检测方法1.5.1体重电子天平测量。1.5.2剩余量/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/剩余量/剩余量/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数间隔天数/小鼠只数每只日摄食量=(上次加入的饲料量-剩余量)/(小鼠只数×间隔天数)。每只日饮水量=(上次加入的饮水量-剩余量)/(小鼠只数×间隔天数)。1.5.3小鼠左前温度值的测定左手抓住小鼠,暴露腹部,右手持温度计,将温度计探头预热后插入小鼠左腋下,以温度计上的数值上升到不再上升为止,即可以读出相应的腋温数值。1.5.4基于x-ms的料色设计第一步:将小鼠左后爪(尾)分别放在载物台上,爪面向上,使每只小鼠左后爪(尾)的方向一致,调整显微镜的微调按钮,使之放大倍数为8倍,手动模式(M),曝光模式:尾-M(1/30,F4.5),爪-M(1/30,F4.5),ISO:400下拍摄。将拍摄后的照片输入电脑。第二步:采用Photoshop7.0图像软件进行处理,选取爪的掌部及尾部作为RGB色度的定量分析。作为国际标准色的定量,R代表红色,G代表绿色,B代表蓝色,得到原始爪尾RGB分量值。将RGB值带入公式r=R/(R+G+B),得出r值。能反映红色程度的深浅。1.5.5照片记录方法将数码相机固定在三脚架上,位于观察笼正上方。打开相机电源至录像模式,将鼠笼置于地面,垂直于数码相机下方。将小鼠从饲养笼中转移到洁净透明的小鼠饲养笼内,待小鼠适应新环境10min后,用数码相机拍摄小鼠35s录像。输入电脑后,可反复播放,并逐一记录35s内不同小鼠水平行走的格数、垂直探头次数。能反映晚间动物自主活动状况。1.6统计处理SPSS10.0统计软件。除饮水摄食外,采用单因素方差分析,方差不齐采用非参数检验。2结果2.1体重2.1.1km鼠造模后气虚组与血虚组体重先出现下降,后期逐渐恢复。其中第7日血虚组与正常组有统计学差异(P<0.05)。见图1。2.1.2两组降后逐渐恢复的比较小鼠气虚组、血虚组体重均出现先下降后逐渐恢复的现象,其中气虚组第7、11日、血虚组第7日与正常组有统计学差异(P<0.05)。见图2。2.1.3两组第4、7、11、14日、血压病大鼠血清第4、7日的统计学差异气虚、血虚两模型组体重下降,其中气虚组第4、7、11、14日、血虚组第4、7日与正常组有统计学差异(P<0.05)。后期两组均出现恢复的趋势。见图3。2.1.4造模前后的影响气虚组、血虚组体重均出现下降,其中气虚组第4、7、11日、血虚组第7日与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见图4。可以看出,四种不同品系的各两个模型组小鼠造模后体重一致下降,以后有逐渐恢复的趋势。不同的是:KM小鼠对同等剂量环磷酰胺造模的耐受性较强,而ICR、balb/c和C57鼠相反;balb/c小鼠对同等剂量乙酰苯肼造模的耐受性差,而ICR、C57和KM小鼠相对不敏感,易于恢复。其中,ICR小鼠所受到的影响最小。总体上,乙酰苯肼造模早期影响严重,但恢复快、幅度大;环磷酰胺造模影响相对轻一些,恢复略缓慢。2.2腋温2.2.1km鼠气虚模型组腋温变化较小。血虚模型组腋温下降明显,后恢复至正常水平,其中第4、7日与正常组间有统计学差异(P<0.05)。见图5。2.2.2ic-老鼠气虚组、血虚组均出现一先下降后恢复至正常水平的过程,气虚组第7日、血虚组第4、7日与正常组间有统计学差异(P<0.05)。见图6。2.2.355.b和c气虚、血虚两模型组腋温下降,其中气虚组第11、14日、血虚组第4、7、11、14日与正常组间有统计学差异(P<0.05)。见图7。2.2.4各品系小鼠腋温变化造模后气虚组出现下降的趋势。血虚组腋温下降,以第4、7日最为明显,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见图8。除KM小鼠外,环磷酰胺造模,其它品系小鼠腋温均下降,后期趋向恢复。乙酰苯肼造模,各组小鼠腋温下降幅度均较环磷酰胺模型大。与体重一致的是,各品系小鼠该模型腋温恢复也快,在14日大多基本恢复至正常水平。2.3icr和s17恢复慢环磷酰胺造模,小鼠饮水下降,其中KM小鼠较轻,恢复快;balb/c次之;ICR、C57恢复慢。基本趋势仍然是先下降后逐渐回升。乙酰苯肼造模,小鼠饮水所受到的影响,ICR最严重。但一致的是,14日左右各组基本恢复至正常水平。各乙酰苯肼模型变化幅度较各环磷酰胺模型大。2.4乙酰苯造模与饮水量变化趋势大体类似,各组摄食量先下降,后回升。其中乙酰苯肼造模早期影响重,但后期恢复也快。其中,KM和ICR小鼠在恢复过程中出现了啮齿频繁的现象。2.5r值爪r2.5.1km鼠两模型组造模后爪r值下降。其中气虚组第7日、血虚组第4、7日与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见图9。2.5.2两组恢复后至正常组ICR小鼠造模后两模型组爪r值均下降,后恢复至正常水平。其中气虚组第7日、血虚组第4、7日与正常组有组间差异(P<0.05)。见图10。2.5.3两组第4日、4日、7日比较气虚组、血虚组爪r值下降,以血虚组明显。气虚组第4日、血虚组第4、7日低于正常组(P<0.05),后期逐渐恢复,接近正常组水平。见图11。2.5.4小鼠正常配方的变化气虚、血虚两模型组爪r下降,其中气虚组第7日、血虚组第4、7、14日明显低于正常组(P<0.05)。两模型组大体趋势是先出现下降,后逐渐恢复,向正常组水平靠近,血虚组第14日甚至高于正常组(P<0.05)。见图12。磷酰胺造模,小鼠爪r下降,色淡,以第7天显著,以后缓慢恢复,以C57恢复最著。乙酰苯肼造模,小鼠爪r下降,色淡白,以第4～7天最严重,而且一致地重于环磷酰胺造模。但一致的是,14日左右各品系各组基本恢复至正常水平。其中C57恢复最著。2.6小鼠尾r、环磷酰胺造模的小鼠术后环磷酰胺造模,小鼠尾r下降,色淡,以C57、ICR恢复至正常,而KM、balb/c持续色淡。乙酰苯肼造模,小鼠尾r下降,色淡白,以造模后第4～7天最严重,而且一致地重于环磷酰胺造模。但14日左右各品系各组基本恢复至正常水平。2.7夜间独立活动的计数水平方向2.7.1km鼠两模型水平运动均无明显的规律,总的趋势是两模型组偏少。血虚组第7、14日计数低于正常组(P<0.05)。见图13。2.7.2ic-老鼠造模后,气虚组与正常组接近;血虚组水平活动计数下降,其中第4、14日明显低于正常组(P<0.05),以后逐渐恢复。见图14。2.7.355.b和c气虚组变化趋势不明显,但血虚组活动计数下降显著,第7、11日明显低于正常组(P<0.05),以后逐渐恢复。见图15。2.7.4总变化的变化两模型组水平运动第4日一度出现暂时的下降,与正常组间有差异(P<0.05)。总的变化趋势仍然是先出现下降后逐渐恢复。见图16。乙酰苯肼造模导致小鼠自主活动减弱较环磷酰胺严重,以balb/c最明显,持续时间长。2.8晚上独立活动的垂直方向总体上,乙酰苯肼造模导致小鼠垂直方向运动减弱较环磷酰胺严重而明显,其中以balb/c最严重,持续时间长,而KM受到的影响最小。3其他品系小鼠四诊表现比较以上结果提示,正常和相同造模因素影响下不同品系小鼠四诊表现大致相同,因此,我们所建立的小鼠四诊方法,适用于目前国内外常用不同品系小鼠,包括被毛是白色或黑色的。总体上,乙酰苯肼造模早期影响严重,但恢复快、幅度大;环磷酰胺造模影响相对轻一些,恢复略缓慢环磷酰胺造模,在体重、腋温、饮水等方面,KM小鼠所受到的影响最小,而ICR、C57小鼠耐受性差,恢复慢;但爪、尾色淡C57恢复最快,而KM、balb/c持续色淡。依据这些小鼠体重下降、腋温降低、饮水减少、爪尾色淡有气虚和偏阳虚的表现。对于脾主运化水谷方面,KM小鼠耐受性较强;而主生血方面,C57小鼠可能耐受性较强。