hplc-蒸发光散射检测法测定注射用头孢曲松钠中na

hplc-蒸发光散射检测法测定注射用头孢曲松钠中na

na-定量测定通常采用原子吸收分光光度法和离子选择性电极法进行。针对金属离子没有紫外吸收的特点,色谱法中以电导检测较为常用,而以离子色谱-蒸发光散射检测器(ELSD)检测药物中Na+亦屡见报道。本实验采用离子交换HPLC-ELSID测定注射用头孢曲松钠中Na+的含量,方法简便准确,对头孢曲松钠的生产和临床应用有一定的借鉴意义。供试样品及诉讼资料泵:SHIMADZULC-6A,柱温箱:SHIMADZUCTO-6A,检测器:法国SEDEX75型蒸发光散射检测器,记录仪:SHIMADZUC-R7Aeplus。基准氯化钠:使用前在110℃干燥至恒重,Na+含量为39.34%。供试样品来源及批号:注射用头孢曲松钠(1)20010904,(2)20010905和(3)20010902,均由浙江永宁制药厂提供;(4)S100040273,(5)S100120700和(6)100120703,均由上海罗氏制药公司提供;(7)010701,(8)010702和(9)010703,均由上海先锋药业公司提供;(10)010401,(11)010402和(12)010403,均由上海新亚药业公司提供。氯化钾、氯化锂、醋酸铵、冰醋酸均为分析纯;水为重蒸水;乙腈为HPLC级。方法和结果1流动相、灵敏度色谱柱:HypersilSCX(250mm×4.0mm,5μm,大连依利特公司装填);柱温:30℃;流动相:乙腈-0.03mol·L-1醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH值为4.8)(20:80),流速:1.0mL·min-1;ELSD温度:40℃,灵敏度(gain):6,雾化气体(空气)压力:0.35MPa;进样体积:20μL。2标准曲线法制备供试品溶液溶剂:0.03mol·L-1醋酸铵溶液,用冰醋酸调节pH值为4.8。取本品约0.05g,精密称定,置20mL量瓶中,加入溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液(Na+浓度约为200μg·mL-1);精密量取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。另取在110℃干燥至恒重的氯化钠对照品适量,精密称定,用溶剂溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.12,0.25,0.5,1.0和2.Omg的对照品溶液(Na+浓度分别约为50,100,200,400和800μg·mL-1)。精密量取上述溶液各20μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,取对照品溶液中Na+峰面积的对数对其浓度的对数进行线性回归,按所得的线性方程计算供试品中钠的含量。在上述色谱条件下,色谱行为类似的一价碱金属离子Li+,Na+和K+依次出峰,分离度分别为2.4和6.6,Na+峰理论板数大于11000,见图1。4elsd结果分析精密称取基准氯化钠199.0mg,置50mL量瓶中,加溶剂[0.02mol·L-1醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH值为4.8)]溶解并稀释至刻度,摇匀,作为线性方程第1点,精密量取5mL,置10mL量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,作为线性方程第2点,依次类推,直至线性方程第8点。8份溶液中Na+的浓度依次为1565.7,782.9,391.4,195.7,97.9,48.9,24.5和12.2μg·mL-1。取溶液在上述色谱条件下分别进样分析。由于ELSD的响应非线性,峰面积(A)与组分浓度(C,μg·mL-1)的关系为A=aCb。二者的对数线性相关:logA=blogC+loga,其中b值主要与雾化器体积及仪器的构造有关,应在0.9～1.8之间。以logA为纵坐标,logC为横坐标,则Na+的回归方程为logA=2.6042+1.1456×logC,r=0.9999。本方法的线性良好,b值与经验值相符。在线性溶液浓度C的一定范围内,峰面积A与浓度C可呈良好线性,如以峰面积A对Na+浓度C回归,得A=1149×C-37745,r=0.9995。相比较而言,线性以A和C分别取对数后再回归为好。5试验和定量限制Na+的检测限按信噪比3:1计为6μg·mL-1,定量限以线性方程的最低浓度计为12μg·mL-1。6加样回收试验6.1进样精密度取Na+浓度为195.7μg·mL-1的氯化钠对照品溶液,连续进样5次,得平均峰面积的RSD为1.6%(n=5)。6.2方法精密度取同一批供试品,照样品测定项下方法操作,测得钠含量的平均值为7.08%,RSD=1.8%(n=6)。7系统稳定性试验取浓度为2.5mg·mL-1的样品溶液,在室温放置2d内于不同时间分别进样,考察系统的稳定性情况。尽管样品溶液颜色逐渐变黄,色谱图中除头孢曲松阴离子峰略有变化,Na+峰面积基本不变。8进样测定取样品约0.05g,精密称定,置20mL量瓶中,加对照品适量,加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,照样品测定项下方法操作,测得平均回收率为100.2%(n=5)。分别取不同来源的供试品适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成约含Na+200μg·mL-1的溶液,在上述色谱条件下进样分析,计算出供试品中钠的含量,批号1～12钠含量测定结果分别为7.0%,7.2%,7.0%,7.0%,7.1%,7.0%,7.2%,7.1%,6.9%,7.2%,7.1%,7.1%。头孢曲松阴离子在近死时间处洗脱,不干扰Na+的测定。乙腈浓度对elsd检测柱温的影响由于离子色谱对流动相的离子强度有一定要求,并且ELSD检测器中只能使用挥发性物质作为流动相组分,因此醋酸铵成为流动相成分的首选,pH值选择为醋酸的pKa值4.8,此时缓冲盐的缓冲能力最强。醋酸铵溶液的pH值保持不变,Na+的保留随缓冲液离子强度的增强而减弱,但Li+,Na+和K+相互间的分离度也相应降低。降低乙腈浓度,可增加流动相的离子强度,使Li+,Na+和K+的保留均减弱,减少分析时间。当乙腈浓度在20%～30%变化时,头孢曲松阴离子的保留受乙腈浓度影响较小,始终在近死时间处洗脱,不干扰Na+的测定。升高柱温,尽管柱压可明显降低,但Li+,Na+和K+相