肾康注射液对高血压肾病大鼠肾脏的影响

肾康注射液对高血压肾病大鼠肾脏的影响

高血压的发生与肾脏密切相关。肾脏既是血压调节的重要器官,同时也是高血压损害的主要靶器官之一。一方面,肾脏通过改变对水钠代谢的调节以及分泌加压和降压物质,从多方面影响血压;另一方面,高血压也可造成肾脏功能受损,若高血压一旦对肾脏造成损害,又可以因肾脏对体液平衡调节以及血管活性物质等代谢障碍,加剧高血压的严重程度,最终导致肾功能不全［１－２］。肾康注射液的组方药材为大黄、丹参、黄芪、红花,是具有降逆泄浊、益气活血作用的中药复方制剂。目前的药理实验研究表明,肾康注射液具有显著降低5/6肾切除大鼠的血压、尿蛋白的排泄、高血脂及改善肾功能的作用［３］,可降低慢性肾衰患者尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、内皮素(ET)、24h尿蛋白,提高一氧化氮(NO)水平,改善临床症状,延缓慢性肾衰的进展［４］。此外,文献报道,肾康注射液在慢性阻塞性肺疾病缓解期使用可以显著改善患者肺功能,提高患者生活质量［５］。基于以上研究背景,本实验主要研究肾康注射液对高血压肾病大鼠肾功能的影响。1仪器、动物和动物1.1仪器低速离心机(GENIUS5K-R,长沙鑫奥仪器仪表有限公司);高速匀浆器(IKA-T10,德国IKA集团);电子天平(AY120,日本岛津SHIMAD-ZU)。全自动生化分析仪(7600,日本HITACHI),测定肾功能所用试剂盒购买于南京建成生物研究所。1.3动物30周龄SPF级雄性SHR大鼠;同周龄WKY大鼠10只。所有大鼠均购于上海斯莱克实验动物有限公司,动物生产许可证号:SCXK(沪)2007-0005。动物常规饲养,保持室温20~25℃,12h光照与黑暗交替(光照8∶00~20∶00),自由饮水和摄食。饲养1周后,测定SHR大鼠尿微量白蛋白的含量,达到肾损伤标准20~200mg·L－１［６］即为高血压肾病模型大鼠。2尿蛋白的检测2.1分组与给药方法将32只高血压肾病模型大鼠随机分为4组:模型对照组(即SHR组)、阳性对照组、肾康注射液大剂量组、肾康注射液小剂量组;WKY大鼠作为阴性对照组。阳性对照组腹腔注射给予福辛普利钠1.6mg·kg－１,肾康注射液大小剂量组腹腔分别注射给予肾康注射液,相当于生药剂量为4,2g·kg－１,阴性对照组和模型组腹腔分别注射等体积生理盐水,1d1次,连续给药30d。2.224h尿蛋白与尿β２微球蛋白的定量测定第0,2,4周将大鼠分别单独放入金属代谢笼,收集24h尿液并记录尿量。留尿期间禁食,不禁水。尿液部分送于西安交通大学第一附属医院检验科检测尿蛋白,剩余部分用尿β２微球蛋白试剂盒(免疫酶联法)测定尿β２-MG含量。2.3肾功能5项的测定肾功能:腹主动脉抽血1mL迅速注入干燥离心管,4℃过夜,3000r·min－１离心15min,分离上清液,用自动生化分析仪测定肾功能5项即血浆中血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、C胱抑素(CYS)和尿酸(UA)的含量。2.4炎症因子白介素-6、白介素-1β的检测取液氮冻存的肾脏皮质0.5g,加入生理盐水,在冰浴中用组织匀浆器制成10%匀浆,以3000r·min－１4℃离心15min,分别用IL-6、IL-1β试剂盒(免疫酶联法)检测IL-6和IL-1β。2.5对高血压肾损害大鼠肾质量/体质量的影响肾质量/体质量比:称量体质量后打开腹腔取出右侧肾脏,以预冷的Hanks液充分灌洗,滤纸吸干称量肾脏质量。计算肾脏质量与体质量的比值(g/100g体质量)。2.6数据统计数据以ue0af±s表示。应用SPSS13.0统计软件进行统计分析,其中尿蛋白的数据处理采用重复测量设计的方差分析,均数间多重比较用LSD法;肾功能、炎症因子及其他指标采用单因素方差分析进行比较,结果均以P<0.05为差异有统计学意义。3肾康注射液对大鼠尿蛋白、肾炎症因子及肾质量比的影响3.1肾康注射液对大鼠24h尿蛋白的影响给药前测定各组尿微量白蛋白含量,各高血压大鼠尿微量白蛋白均在20~200mg·L－１,达到高血压肾损害标准;测定24h尿蛋白质量浓度及24h尿蛋白量。结果表明,模型对照组、肾康注射液组、阳性对照组的24h尿蛋白质量浓度均明显高于阴性对照组(P<0.05),而其各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。经过30d治疗后,阳性对照组、肾康注射液小剂量组和大剂量组的尿蛋白质量浓度均明显低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05),各组尿蛋白含量与模型组差异显著(P<0.01),说明肾康注射液可以降低大鼠24h尿蛋白量。见表1。3.2肾康注射液对大鼠肾功能的影响与模型对照组比较,阳性对照组、肾康注射液小剂量组和大剂量组的尿酸(UA)、BUN、SCr含量差异均有统计学意义(P<0.05),其中模型对照组的UA显著高于其他各组;BUN的含量高于阴性对照组,但各组间差异不明显;模型组的SCr含量高于其他组,而对GLU和CYS的影响不明显。见表2。3.3肾康注射液对肾脏炎症因子的影响与模型对照组比较,肾康注射液可以降低大鼠肾脏中IL-6及IL-1β的含量,阳性对照组、肾康小剂量组和大剂量组的值都低于模型对照组,其中IL-1β的差异具有统计学意义(P<0.05),而对尿液中β２-MG的影响不显著。见表3。3.4肾康注射液对大鼠肾质量/体质量的影响各组大鼠肾脏脏器系数均明显高于阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表4。但模型组与实验组差异不大。4肾康注射液治疗高血压肾病的作用机制原发性高血压是严重危害人类健康的常见疾病,它可以引起全身多个器官的功能损害。肾损害是原发性高血压的严重并发症之一,两者关系密切,互为因果,常形成恶性循环。原发性高血压患者早期肾损害常因缺乏明显临床表现而难以被发现。目前,尿微量蛋白检测已被公认为诊断早期肾损害的灵敏指标［７］,本实验通过尿微量白蛋白的含量来判断是否造成高血压肾损害,在肾脏未严重损伤的情况下,可以更早地对大鼠肾脏的损伤情况进行治疗,能更好地研究肾康注射液对大鼠高血压肾病的作用。在临床上,治疗高血压肾病,首先要选择降低血压的药物,逐渐使血压正常,避免肾损害的继续发展。故选择的药物应具有降压和保肾双重功能,故治疗高血压肾病常采用降压药和利尿药等联合用药［８］。本实验设计选择福辛普利钠作为阳性药,因其为血管紧张素转换酶抑制剂,可以起到一定的降压作用,同时还具有一定的肾保护作用。肾康注射液可以降低高血压肾病大鼠尿液中的蛋白量及尿蛋白质量浓度,说明肾康注射液可以改变肾小球滤过功能,改善高血压肾病大鼠对蛋白类物质的代谢。肾康注射液对大鼠肾功能的影响主要体现在尿素氮和肌酐水平上,肌酐和尿素氮是衡量肾脏滤过能力的重要指标,其他几个指标未见明显改善,由于肾康注射液属于复方中药,作用机制尚不太明确,可以通过后续的物质基础分析来研究产生如此结果的原因。实验中测定了肾组织中的变化,数据表明降低大鼠肾脏中IL-6及IL-1β的含量,肾脏固有细胞在病理状态下可以产生TNF-α、IL-1、IL-6、NO等多种炎症因子,这些因子又通过自分泌和旁分泌的方式使炎症效应不断扩大,引起炎症级联反应。炎症参与了整个疾病的发生、发展过程,但它不是孤立的,与其他机制一起加快肾病进展［９－１０］。肾康注射液对尿液中β２-MG的影响不显著,尿液β２-MG也是高血压早期肾损害的监测指标之一,β２-MG产生于淋巴细胞,其分子能自由通过肾小球滤过膜,如果β２-MG升高,则提示近端小管的重吸收功能受到了损伤［１１］,而在本实验中该指标未发生明显变化,可能近端小管还未受到高血压对其的损害作用。本实验中肾康注射液对大鼠肾质量和肾脏指数的影响不明显,可能由于实验是在肾损伤的早期进行的,在此阶段内大鼠的肾脏尚未发生明显的病变和病理性改变。肾康注射液是一种中药注射液,组方药物为大黄、黄芪、丹参、红花。研究表明,大黄具有促进尿素及肌酐排泄的作用,并具有抑制系膜细胞增殖的作用［１２－１４］,另外丹参是心血管疾病的常用中药,可以缓解大鼠的肾衰竭,具有防止肾小球的硬化和保护肾功能的作用［１５］;红花具有活血化瘀、抗血凝、调经等功效［１６］。近代中药药理学研究表明:红花具有使紧张度增高的动物离体血管扩张的作用,对于延缓肾脏病损伤具有明显的作用［１７］。由于中药成分结构复杂,肾康注射液的药理作用机制有待进一步明确,根据中药现代化的要求,我们下一步将采用