选3专题2 2-2-1动物细胞培养和核移植技术

动物细胞工程主讲：柯碧动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术核移植技术动物细胞工程常用技术其它动物细胞工程的基础一、动物细胞培养

就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。1、概念：2.2.1动物细胞培养和核移植技术2、原理：细胞增殖如何进行细胞培养?请阅读课本P44—46，思考下列问题1、无菌、无毒的环境（培养液和用具的无菌处理，添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等）3、温度和PH

温度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、气体环境

O2和CO2（95%空气和5%CO2

）4、动物细胞培养条件离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。问题3：用什么方法将组织细胞分散成单个细胞？问题1：动物细胞培养选择什么材料容易成功？为什么选用它做动物细胞培养材料？动物胚胎或幼龄个体的器官或组织；因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。问题2：为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养和废物的排出。

问题4：为什么用胰蛋白酶处理？动物组织细胞间隙中的物质主要是蛋白质；并且动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，适宜胰蛋白酶作用注意：控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理3、过程：胚胎或幼龄动物器官组织剪碎胰蛋白酶处理单个细胞细胞悬液传代培养原代培养胰蛋白酶处理贴壁细胞1.细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。2.接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。肿瘤细胞失去接触抑制。原代培养细胞特点：贴壁生长、接触抑制：原代培养：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：当原代培养的细胞处于接触抑制后,贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理,然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。（分瓶培养的过程）传代10代以内，细胞正常生长，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，细胞增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化。继续传代培养少部分细胞克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。

细胞株：从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，传代培养的细胞能传到10-50代，其遗传物质没有发生变化。

细胞系：一般传代50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液10代细胞部分细胞“癌变”，无限传代动物细胞培养不能最终培养成动物体50代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2.动物细胞培养过程：胰蛋白酶5、动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质（2）为基因工程提供受体细胞（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据获得细胞细胞的全能性细胞或细胞产品新的个体或细胞产品培养结果或细胞产品快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目6、植物细胞和动物细胞培养的比较1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是------（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体

C.胚胎移植D.动物细胞培养

练一练3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在（

）A.培养基不同B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。4．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥5.下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是A、用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B、将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D、动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡

动物细胞特点分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性想一想为什么一般不能直接利用动物细胞培育动物体？

根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达?

再想一想利用动物体细胞核移植技术

1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞三、动物体细胞核移植技术胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易2、原理：

动物细胞核具有全能性3、种类：◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：电刺激◆胚胎移植至代孕受体内妊娠、分娩核移植流程供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）

体细胞细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期）去核无核卵母细胞注入重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体遗传基本相同的个体总结：体细胞核移植过程（供核）（供质）（受体）据上图思考下列问题：发育1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么