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第三章cDNA文库和基因组文库第一节cDNA文库的建立与基因的分离第二节基因组文库的建立与基因的分离

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应用第一节cDNA文库的建立与基因的分离10515%15000种步骤：①新鲜材料②提取RNA（mRNA）③第一条cDNA链的合成反转录酶④第二条cDNA链的合成置换合成/引物-衔接头法⑤双链cDNA同载体的连接λgt10/λgt11利用oligo（dT）引物和反转录酶合成cDNA第一链自身引导法合成双链cDNA双链cDNA的置换合成引物-衔接头法合成双链cDNA双链cDNA的置换合成缺点：缺少对应于mRNA5’端的几个核苷酸引物-衔接头法优点：①利于获得全长cDNA②利于和载体连接

缺点：①酶切可能切断cDNA对策：利用切点稀少的限制酶②dG：dC段可能影响转录和测序back同聚物加尾法克隆双链cDNA

通过依次加入、连接合成的DNA衔接物

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