BriCyte E6流式细胞仪标准操作程序

BriCyteE6流式细胞仪原则操作程序1目的规范原则的BriCyteE6流式细胞仪操作程序，确保仪器设备的正常使用，使得测量数据和检测成果含有良好的溯源性、精确性和可靠性。2范畴仅合用于BriCyteE6流式细胞仪。3仪器检测原理BriCyteE6流式细胞仪采用多路激发、荧光染色的流式细胞技术进行细胞分类和特性分析，并结合流量测定技术实现绝对计数。4仪器设备试剂BriCyteE6流式细胞仪专用试剂：见“淋巴细胞亚群检测”、“HLA-B27检测”试剂内容。全部试剂应参考试剂的使用阐明进行保存。变质、超出效期的全部试剂不能使用。5仪器设备标本原始样品采集、制备、解决、检查和寄存见检查科有关规范。6仪器设备环境规定，使用安全方法6.1仪器设备环境规定6.1.1空间安装规定仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保存最少0.5米的空间，以方便维护和保养。仪器后部分别最少要有0.25米的空间，以避免妨碍热气的排放并确保主机后的液路管道不受挤压。将BriCyteE6流式细胞仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BriCyteE6流式细胞仪。确保操作台面有足够的空间放置试剂托架及鞘液桶、废液桶。6.1.2运行条件环境温度规定：15℃～32℃。环境相对湿度规定：20%～85%。电源电压规定：主机：100~240V，50Hz/60Hz，500VA。仪器设备周边应尽量无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；远离强电磁场干扰源；不要靠近电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；建议在运行设备之前对实验室的电磁环境进行评定；避免强光直接照射；避免置于热源及风源前；选择一种通风良好的位置；含有良好的接地环境；不要将主机放置在斜面上；室内使用。6.2仪器安全在仪器设备上面和周边不要使用可燃性危险品，避免引发火灾和爆炸。在电源打开状态下，严禁打开仪器前面、侧面及背面面板，以免损害线路板；严禁触摸BriCyteE6流式细胞仪外壳里面的电子元件，特别避免湿手触摸，以免造成电击。仪器设备使用前，必须认真检查设备之间连接及外接线(件)与否对的（连接办法见BriCyteE6使用阐明书2.3节）、正常，电源插头与否对的插接，设备与否处在正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断，应立刻关闭影响仪器设备安全的有关开关，并实施安全保护方法。严禁鲁莽装卸仪器设备，运输过程中应避免倾斜，振动和碰撞。如果标本、试剂溢出在分析仪上，立刻擦掉并根据检查科有关规范解决。6.3人员安全仪器设备中全部与病人的样品接触或有潜在性接触可能的表面与零件都视污染物。在操作、维护仪器设备时有必要穿戴保护性的外套和手套，头发、衣物、手指等与全部的活动部件保持距离。在仪器工作过程中，勿触及全部运动部件，避免人身伤害。严禁触摸BriCyteE6流式细胞仪内部的电路，特别避免湿手触摸，以免造成电击。全部物品（样本、质控物、校准物、试剂、废液等），以及同这些物质接触的区域都有潜在的生物传染性危险。操作者在实验室接触有关物品和区域时，应恪守实验室安全操作规定，并穿戴好个人防护装备（如实验室防护衣，手套等）。试剂一旦接触皮肤，立刻用大量水冲洗，如有需要请接受医生治疗；试剂一旦接触眼睛，立刻用大量水冲洗，并接受医生治疗。7开关机程序7.1开机准备确保鞘液余量充足，如需要，请更换鞘液桶。确保废液桶已清空，且已进行了必要的消毒。确保鞘液、废液的管路无弯折，连接可靠。确保仪器的电源插头安全插入电源插座。确保计算机电缆与仪器连接就绪。确保条码扫描仪（如选配）、键盘和鼠标的电缆与计算机连接就绪。7.2开机程序仪器开机：打开仪器背面电源开关，仪器正面批示灯变为绿色闪烁状态。操作软件登录：启动电脑，双击电脑桌面上的MRFlow软件图标，输入顾客名和密码登录，进入MRFlow操作软件界面。系统自动进行初始化、开机倒计时及温控。初始化及温控过程结束后，弹出“开机完毕”提示，单击“拟定”，开机完毕，即可进行正常测试。7.3关机程序单击软件界面上方快捷图标区“（关机）”按钮，弹出“与否拟定关机？”提示，单击“是”。再按照提示信息，分别将装有清洗液(用蒸馏水10倍稀释)、蒸馏水的试管放置于指定位置，单击“拟定”后，仪器自动执行关机程序；关机流程结束后，弹出“关机完毕”提示，单击“拟定”，再关闭仪器电源；清空废液桶中的废液，并妥善解决废液；关闭MRFlow软件窗口，再关闭电脑。8仪器质控8.1实验试剂及解决通用名称“流式细胞仪多色质控微球”，英文名称“FluorescenceSetupParticles”；在涡旋混匀仪上激烈震荡微球，在流式试管中滴加1滴微球，用0.5ml的流式鞘液稀释，使用前充足混匀。8.2质控物信息设立单击“质控”，进入“仪器质控”界面。单击“基本信息”区“批号”下拉菜单，选择一种预先保存的质控物批号，以下图所示。该批号对应的质控物信息自动显示在现在页面。如果该批次质控品初次进行测试，需要通过扫描质控二维码、从质控信息存储介质中读取、手动录入等方式进行质控物信息的设立，具体办法以下：扫描质控二维条码：从质控物包装中找到厂家提供的二维码（码制：QRCode），以下图所示。单击“质控物信息”界面下方“二维码扫描”按钮，弹出下列窗口。使用条码扫描仪，逐个扫描二维码，识别成功的二维码显示为绿色，不成功的二维码显示为红色，以下图所示。如需提前退出，可按键盘上的[ESC]键。三个二维码全部扫描成功后，软件自动解析质控物信息。解析完毕后，质控物信息被录入现在界面。从质控信息存储介质中读取单击“质控物信息”界面下方“导入”按钮。选择导入的途径及质控物信息文献后，单击“打开”，则质控物信息被导入现在页面。手动录入在“基本信息”区设立质控物基本信息，涉及：批号、产品ID、FS阈值、流速。在“各通道靶值”区设立自动算法项目各通道靶值。在“赔偿矩阵”区设立自动算法项目各通道之间赔偿值。录入完整后，内容被实时保存。8.3上机测试8.3.1BriCyteE6自动进样机型将配制好的质控微球溶液，混匀后置于指定试管位。在“仪器控制”栏的位置的输入框中单击，即可出现样本盘位置图，在该图上选择质控试管放置的盘号和位置号。单击“”按钮，启动测试。仪器自动完毕系统校准和电压标定。质控分析完毕后，“质控详情”界面下显示当次质控报告，报告中质控状态栏均显示“pass”即可进行样本测试，如果有“fail”项，需寻找因素重新进行质控测试。在“仪器质控图”界面可查看一段时间内的质控图，单击质控图上的质控点，右侧可同时显示该点当次的质控报告。8.3.2BriCyteE6开放进样机型将配制好的质控微球溶液，混匀后置于试管托架上。单击“”按钮，启动测试。仪器自动完毕系统校准和电压标定。质控分析完毕后，“质控详情”界面下显示当次质控报告，报告中状态栏均显示“pass”即可进行样本测试，如果有“fail”项，需寻找因素重新进行质控测试。在“仪器质控图”界面可查看一段时间内的质控图，单击质控图上的质控点，右侧可同时显示该点当次的质控报告。淋巴细胞亚群检测9.1实验试剂CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色试剂（流式细胞法）；CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色试剂（流式细胞法）；流式溶血剂（使用前用蒸馏水做10倍稀释，即溶血剂:蒸馏水=1:9）。9.2样本解决取两支试管，其中1支试管中加入20ulCD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色试剂，标记为“T_001”，另一支试管中加入20ulCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色试剂，标记为“BNK_001”；各吸取50ulEDTA抗凝静脉血分别加入两支试管底部（避免将血样沾到试管壁上）；试管在涡旋混匀器上轻旋混匀，室温（20℃~25℃）避光孵育15min；分别向两个试管中加入450ul1×溶血素，在涡旋混匀器上轻旋混匀，室温（20℃~25℃）避光孵育15min；上机检测。9.3仪器检测9.3.1BriCyteE6自动进样机型的自动检测单击“”按钮新增样本；输入样本编号；单击“检查项目”框下拉列表，从中选择“T/B/NK-Auto”模板；双击待测样本T试管的“位置”框，弹出样本盘示意图，单击盘号两侧的左/右箭头按钮，切换到欲选择的盘号，单击孔位选择T试管在样本盘上的位置；双击待测样本BNK试管的“位置”框，弹出样本盘示意图，单击孔位选择BNK试管在样本盘上的位置（样本下的全部试管的盘号自动保持一致，更换任何试管的盘号，该样本下其它试管会自动更改为与其一致的盘号）；在“样本”界面“样本信息”区中可录入样本及病人信息；将准备好的样本放入与工作单一致的样本盘及试管位，对的安装样本盘。选中工作单列表中待测样本的起始试管T试管（非常重要，自动测试只识别工作单中起始试管下列的样本）；单击“仪器控制”中的“”启动自动进样按钮，仪器自动从设定的起始位置处开始依次执行样本测定。全部试管测定完毕后，自动进样停止，仪器状态批示灯恢复为绿色长亮，此时可安全打开仓门，取出试管或卸下样本盘。两管样本都测试完毕后，软件自动分析测试成果，并可在报告预览中出具检测报告。同时也可根据需要，调节图形中的设门位置，统计成果随之更新。检测报告9.3.2BriCyteE6开放进样机型的检测单击“”按钮新增样本；输入样本编号；单击“检查项目”框下拉列表，从中选择“T/B/NK-Auto”模板；在“样本”界面“样本信息”区中可录入样本及病人信息；将T试管混匀后置于试管托架上，单击“仪器控制”中的“”启动测试；当T试管测试完毕后，将T试管取下，将BNK试管混匀后置于试管托架上，单击“仪器控制”中的“”启动测试；两管样本都测试完毕后，软件自动分析测试成果，并可在报告预览中出具检测报告。同时也可根据需要调节图形中的设门位置，统计成果随之更新；检测报告：HLA-B27检测10.1实验试剂IgG2a-FITC/IgG1-PE双色试剂（流式细胞法）；HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE双色试剂（流式细胞法）；流式溶血剂（使用前用蒸馏水做10倍稀释，即溶血剂:蒸馏水=1:9）；磷酸盐缓冲液（自配）。10.2样本解决取两支试管，其中1支试管中加入20ulIgG2a-FITC/IgG1-PE双色同型对照，标记为“Isotype_001”，另一支试管中加入20ulHLA-B27-FITC/HLA-B7-PE双色试剂，标记为“B27_001”；各吸取100ulEDTA抗凝静脉血分别加入2支试管底部（避免将血样沾到试管壁上）；试管在涡旋混匀器上轻旋混匀，室温（20℃～25℃）避光孵育15min；每管各加入2ml1×溶血素，在涡旋混匀器上轻旋混匀，室温（20℃～25℃）避光孵育10min（避免细胞和溶血素过长时间的接触，否则会造成白细胞的破坏）；300×g离心5min，弃去上清（使用移液器小心吸取上清，使剩余液体为50～100ul，避免将管底的细胞沉淀悬起），加入2ml磷酸盐缓冲液缓冲液，轻旋混匀，使管底细胞重新悬起，300×g离心5min，弃去上清（使用移液器小心吸取上清，使剩余液体为50～100ul，避免将管底的细胞沉淀悬起）；加入适量的磷酸盐缓冲液（样本在2h内进行检测）或多聚甲醛溶液（样本放置超出2h后检测）；10.3上机检测10.3.1BriCyteE6自动进样机型的自动检测单击“”按钮新增样本；输入样本编号；单击“检查项目”框下拉列表，从中选择“HLA-B27-Auto”模板；双击待测样本Isotype试管的“位置”框，弹出样本盘示意图，单击盘号两侧的左/右箭头按钮，切换到欲选择的盘号，单击孔位选择Isotype试管在样本盘上的位置；双击待测样本B27试管的“位置”框，弹出样本盘示意图，单击孔位选择B27试管在样本盘上的位置（样本下的全部试管的盘号自动保持一致，更换任何试管的盘号，该样本下其它试管会自动更改为与其一致的盘号）；在“样本”界面“样本信息”区中可录入样本及病人信息；将准备好的样本放入与工作单一致的样本盘及试管位，对的安装样本盘。选中工作单列表中待测样本的起始试管Isotype试管（非常重要，自动测试只识别工作单中起始试管下列的样本）；单击“仪器控制”中的“”启动自动进样按钮，仪器自动从设定的起始位置处开始依次执行样本测定。全部试管测定完毕后，自动进样停止，仪器状态批示灯恢复为绿色长亮，此时可安全打开仓门，取出试管或卸下样本盘。两管样本都测试完毕后，软件自动分析测试成果，并可在报告预览中出具检测报告。同时也可根据需要，调节图形中的设门位置，统计成果随之更新。检测报告10.3.2BriCyteE6开放进样机型的检测单击“”按钮新增样本；输入样本编号；单击“检查项目”框下拉列表，从中选择“HLA-B27-Auto”模板；在“样本”界面“样本信息”区中可录入样本及病人信息；将1号试管混匀后置于试管托架上，单击“仪器控制”中的“”启动测试；当1号试管测试完毕后，将其取下，将2号试管混匀后置于试管托架上，单击“仪器控制”中的“”启动测试；两管样本都测试完毕后，软件自动分析测试成果，并可在报告预览中出具检测报告。同时也可根据需要调节图形中的设门位置，统计成果随之更新；检测报告；鞘液及废液解决11.1更换鞘液鞘液将用完时，仪器产生“请更换鞘液”提示；取一桶鞘液，打开桶的包装盖，将鞘液瓶盖组件插入后拧紧，并放置于试剂托架上的鞘液位置；单击提示信息中的“拟定”，之后能够继续进行测试。11.2清空废液废液将满时，仪器产生“请清空废液”提示；取下废液瓶盖组件，将废液桶清空后，装回废液瓶盖组件，并放回试剂托架上的废液位置；单击提示信息中的“拟定”，之后能够继续进行测试。维护与保养12.1定时维护每6个月保养：更换鞘液过滤器；更换气泡过滤器；由Mindray服务进行的计划防止性维护。12.2按需维护12.2.1仪器长久放置后开机维护当仪器较长时间（1周以上）不使用，再次开机后，应进入软件“服务”——“维护”界面，分别执行“液