柴胡黄芩配伍的药效学研究

柴胡黄芩配伍的药效学研究

柴胡和黄鼠狼是临床上常用的“药物比较”。它最早起源于《伤寒论》。这是钟景柴胡系列中最具代表性的基本配方。它与小柴胡汤、柴葛解肌汤、柴胡汤、龙胆泻肝汤等许多经典方剂一起使用。柴胡疏肝升阳、和解表里,黄芩疏风清肺、宣肺止咳,二者合用具有清热疏肝,和解少阳之功能,在临床有广泛的应用基础。本实验通过观察柴胡黄芩不同配伍分别对2,4-二硝基苯酚和酵母所致大鼠发热模型的影响和对小鼠耳肿胀的抑制作用,观察了柴黄药对主要药效学作用的最佳配伍关系,为中医临床用药和中药复方的基础研究提供新依据。1材料表面1.1u3000研究方法柴胡(批号:060501)、黄芩(批号:20070601)购置于山东济南天一中药饮片有限公司,经山东中医药研究院中药资源研究室鉴定为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC(北柴胡)和唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根,受试液由山东省千佛山医院药剂科制备,柴胡、黄芩不同比例的配伍受试液分别为:1∶0、1∶2、1∶1、2∶1、0∶1,每种受试药均制成每毫升含生药量1g的溶液备用。混合致炎液组成:巴豆油2%、无水乙醇20%、蒸馏水5%、乙醚73%。1.2中心提供材料:scxk鲁Wistar大鼠,雄性,(180±20)g,共140只,SPF级;由山东大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(鲁)20090001。KM小鼠72只,体质量18~22g,雌雄各半,SPF级,由鲁抗集团提供,合格证号:SCXK(鲁)20080002。环境:山东省中医药研究院动物实验中心,许可证号:SYXK(鲁)20050052。1.3电子体温计电子天平(上海上天精密仪器有限公司产品),电子体温计[欧姆龙(大连)有限公司产品]。2,4-二硝基苯酚(化学纯);干酵母(安琪酵母股份有限公司,CF2008/10/01H)。2方法和结果2.12.4-2硝基苯酚引起的热大鼠模型2.1.1不同配伍比例对大鼠脏器正常基础体温的影响取Wistar大鼠60只,将体温计于探头后3cm处标记,确保体温计每次伸入动物体内的长度一致。造模前,每日早晚测量各组大鼠的肛温,测定时间为上午9∶00和下午2∶00,连续测定5d。选取体温在36.6~38.0℃,且连续体温变化小于0.3℃的大鼠,取其平均值作为正常基础体温。按照体温基础值和体质量均衡随机分成6组,分别为空白对照组,黄芩组,柴胡组,3种不同配伍比例组。称质量后各组动物以10mg/kg剂量皮下注射2%的2,4-二硝基苯酚溶液,正常组注射同体积生理盐水,造模同时给予黄芩,柴胡及不同配伍组灌胃,空白对照组分别给予同体积的生理盐水。于给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0h后测定肛温,记录各组体温数据,与基础体温比较,计算各时段温差。各时段温差=各时段体温(℃)-基础体温(℃)2.1.2组间分时段体温变化t检验比较所有数据以ue0af±s的形式表示,SPSS16.0统计软件进行组间分时段体温变化t检验比较,各组不同时段进行方差分析比较组间差异。2.1.3对大鼠体温作用的影响连续观察各组大鼠6h内5个时间点的体温变化,如表1所示,空白组大鼠体温在0.5h时升高最明显,随后逐渐回落,至6h时体温比基础体温仅升高0.7℃左右。各给药组对大鼠体温影响不同,5组受试药中以柴胡与黄芩1∶2组温度降低最为明显,其次为黄芩组,柴胡组无明显降低大鼠体温的作用。各给药组对大鼠体温的影响可延续至2h,4h时与空白组比较1∶2配伍组尚存在一定程度的影响,其它组已无明显趋势,6h时各组与空白组比较基本无明显变化。以组为单位进行SPSS分析,比较组间差异,与空白组比较,黄芩组和柴胡黄芩1∶2组具有统计学意义,其它三组没有明显的统计学差异。其它各组两两比较,提示1∶2组为解热作用最明显一组,其次为黄芩组,1∶1组仍有一定的解热作用,2∶1组和柴胡组则没有明确的解热作用。2.2干发酵母引起的热大鼠模型的影响2.2.1大鼠前体温测定取Wistar大鼠70只,造模前每日早晚测量各组大鼠的肛温,测定时间为上午9∶00和下午2∶00,将体温计于探头后3cm处标记,确保体温计每次伸入动物体内的长度一致,连续测定5d。选取体温在36.6~38.0℃,且连续体温变化小于0.3℃的大鼠,取其平均值作为正常基础体温。随机分成6组,分别为空白对照组,黄芩组,柴胡组,3种不同配伍比例组。称质量后各组动物以10mL/kg剂量皮下注射20%干酵母混悬液,空白对照组注射同体积生理盐水;造模同时黄芩,柴胡,和配伍组灌胃给药,空白对照组给予同体积的生理盐水。于给药后2.0、4.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、12.0h后测定肛温,记录数据,与基础体温比较,计算温差。体温差值=各时间点温度(℃)-药前基础体温(℃)2.2.2数据分析所有数据以x珋±s的形式表示,SPSS16.0统计软件进行组间分时段体温变化t检验比较,各组不同时段进行方差分析比较组间差异。2.2.3对热性能的影响连续观察各组大鼠12h内8个时间点的体温变化,如表2-1、表2-2所示,大鼠在注射酵母菌混悬液后体温逐渐上升,上升趋势可达7h,此后逐渐回落,至12h时体温比基础体温仍高1.36℃。各给药组对大鼠体温影响不同,5组受试药中给药2h时间点时,黄芩组作用最为明显,其次是1∶2组和1∶1组,2∶1组仍能表现出解热作用,但与空白组比较没有明显统计学差异(P>0.05),柴胡组则没有明显的降低体温的趋势。黄芩组的解热优势维持至致热后4h,6h时其解热作用逐渐降低,1∶1组解热作用明显优于黄芩组和1∶2组,且此优势维持至12h,黄芩组在致热12h时仍有一定的解热作用,1∶2组作用较黄芩组差。与空白组比较2∶1组能表现出一定的解热趋势,但无显著性差异(P>0.05)。SPSS分析进行各组间解热作用的比较,5个组解热作用强度依次为:柴胡黄芩配伍1∶1组、黄芩组、1∶2组、2∶1组、柴胡组。与空白组比较,柴胡黄芩2∶1组和柴胡组没有统计学差异,其它三组均能表现出明显的统计学差异。2.3影响小鼠混合炎症溶液对耳肿胀的影响2.3.1致炎及耳水肿抑制率测定取小鼠72只,随机分成6组并进行称质量,雌雄各半。分为空白对照组,黄芩组,柴胡组,3种不同配伍比例组。20g/kg灌胃给药,连续给药7d。在末次给药60min后,用混合致炎液涂抹小鼠右耳的前后两面,每鼠0.02mL,左耳不作任何处理。致炎后4h,将小鼠颈椎脱臼处死,剪下小鼠左右两耳,打孔器在同一部位打下圆形耳片,电子天平称取每只小鼠左右耳片的质量,计算各小鼠的耳片肿胀程度。耳肿胀程度=致炎侧耳片质量(右耳)-对照侧耳片质量(左耳)。耳肿胀抑制率=[(空白组平均肿胀率-给药组平均肿胀率)÷空白组平均肿胀率]×100%2.3.2数据分析2.3.3对小鼠耳水肿的影响根据公式计算各组小鼠耳肿胀度和抑制率,如表3所示,各给药组对小鼠耳肿胀均有一定程度的抑制作用,但组间作用程度不同,黄芩组抑制作用最为明显,其次为配伍1∶2组,其余3个组与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。3对干酵母致热大鼠模型的影响通过柴胡黄芩药对不同比例配伍给药,观察了其对两个大鼠致热模型的影响和对小鼠耳肿胀模型的影响,观察了该药对配伍和解热抗炎作用的关系,结果可见不同比例配伍对2,4-二硝基苯酚致热大鼠模型的影响强度依次为:柴胡与黄芩1∶2组、黄芩组、2∶1配伍组、1∶1配伍组、柴胡组。与空白组比较,柴胡黄芩1∶2组和黄芩组具有统计学意义,其它三组没有明显的统计学差异。而对干酵母致热大鼠模型的影响强度依次为:柴胡黄芩配伍1∶1组、黄芩组、1∶2组、2∶1组、柴胡组。与空白组比较,柴胡黄芩2∶1组和柴胡组没有统计学差异,其它三组均能表现出明显的统计学差异。不同配伍比例对小鼠耳肿胀度、耳肿胀抑制率的影响作用强度依次为:黄芩组、1∶2配伍组、1∶1配伍组、2∶1配伍组、柴胡组。其中黄芩组和1∶2配伍组作用较为明显,其它三组作用与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。综合上述实验结果分析,认为不同配伍对于解热抗炎作用表现出不同的作用强度,对于两种大鼠致热模型亦表现出不同的药效学作用和配伍比例的关系,对2,4-二硝基苯酚致热大鼠模型以1∶2配伍作用最强,而对于干酵母致热模