食品添加剂的测定-合成着色剂的测定

HPLC法测定合成着色剂的含量

技能点：标准溶液的配制合成着色剂标准贮备液的配制二合成着色剂标准使用液的配制三目录仪器准备一仪器准备一仪器规格仪器规格电子天平0.0001g容量瓶100mL微孔滤膜0.45μm刻度移液管10mL烧杯100mL试剂瓶合成着色剂标准贮备液的配制（1mg/mL）二pH6的水准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝各0.1g（精确到0.0001g），置100mL容量瓶中，加pH6的水到刻度。配成水溶液（1.00mg/mL）。pH6的水定容至100mL合成着色剂标准贮备液（1mg/mL）合成着色剂标准使用液的配制（50μg/mL）临用时将标准贮备液加水稀释20倍，经0.45μm微孔滤膜过滤。配成每毫升相当50.0μg的合成着色剂。三1.00mg/mL50.0μg/mL加水稀释20倍0.45μm微孔滤膜过滤HPLC法测定合成着色剂的含量

技能点：测定原理与试剂配制测定原理一适用范围二试剂配制三目录测定原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。一适用范围1.本法适用于饮料、配制酒、硬糖、蜜饯、淀粉软糖、巧克力豆及着色糖衣制品中合成着色剂（不含铝色锭）的测定。2.测定依据：GB5009.35-2016。二试剂配制1.试剂2.仪器准备3.试剂配制4.标准品三（1）氨水（NH3·H2O）：含量20%~25%

。（2）盐酸（HCl）。（3）冰醋酸（CH3COOH）。（4）无水乙醇（CH3CH2OH）。（5）正己烷（C6H14）。（6）聚酰胺粉（尼龙6）：过200μm（目）筛。（7）硫酸钠（Na2SO4）。1.试剂（除另有说明，所用试剂均为分析纯）HPLC法测定合成着色剂的含量（8）甲醇（CH3OH）：色谱纯。（9）乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。（10）甲酸（HCOOH）：色谱纯。（11）水：GB/T6682规定的一级水。（12）柠檬酸（C6H8O7·H2O）。（13）正丁醇（C4H10O）。（14）三正辛胺（C24H51N）。仪器规格仪器规格电子天平0.001g量筒100mL移液枪洗瓶塑料离心管50mL试管水性微孔滤膜0.45μm烧杯250mL容量瓶1000mL玻璃棒刻度移液管2mL试剂瓶2.仪器准备HPLC法测定合成着色剂的含量（1）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g，加水至1000mL，溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤。3.试剂配制：氨水溶液HPLC法测定合成着色剂的含量一级水1.54g乙酸铵溶液一级水定容至1000mL乙酸铵溶液（0.02mol/L）0.45μm微孔滤膜过滤（2）氨水溶液：量取2mL氨水，加水至100mL，混匀。3.试剂配制：氨水溶液HPLC法测定合成着色剂的含量98mL水2mL氨水氨水溶液（3）甲醇-甲酸溶液（6＋4，体积比）：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。3.试剂配制：甲醇-甲酸溶液HPLC法测定合成着色剂的含量40mL甲酸60mL甲醇甲醇-甲酸溶液（4）柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。3.试剂配制：甲醇-甲酸溶液HPLC法测定合成着色剂的含量一级水20g柠檬酸一级水定容至1000mL亚铁氰化钾溶液（92g/L）（5）无水乙醇-氨水-水溶液（7＋2＋1，体积比）：量取无水乙醇70mL、氨水溶液（2）20mL、水10mL，混匀。3.试剂配制：甲醇-甲酸溶液HPLC法测定合成着色剂的含量10mL水70mL无水乙醇20mL氨水溶液无水乙醇-氨水-水溶液（6）三正辛胺-正丁醇溶液（5%）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。3.试剂配制：氨水溶液HPLC法测定合成着色剂的含量95mL正丁醇5mL三正辛胺三正辛胺-正丁醇溶液柠檬黄（CAS：1934-21-0）。新红（CAS：220658-76-4）。苋菜红（CAS：915-67-3）。胭脂红（CAS：2611-82-7）。日落黄（CAS：2783-94-0）。亮蓝（CAS：3844-45-9）。赤藓红（CAS：16423-68-0）。4.标准品HPLC法测定合成着色剂的含量HPLC法测定合成着色剂的含量

技能点：试样溶液的测定试样制备二色素提取三仪器参考条件四试样溶液的测定五目录仪器准备一仪器准备一仪器规格仪器规格高效液相色谱仪G3垂漏斗电子天平0.001g蒸发皿恒温水浴锅100℃±1℃分液漏斗微孔滤膜0.45μm刻度移液管1mL容量瓶5mL试样制备二色素提取1.聚酰胺吸附法2.液-液分配法三1.聚酰胺吸附法HPLC法测定合成着色剂的含量（4）经0.45μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。（3）收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。（2）用60℃pH为4的水洗涤3到5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3到5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3到5次，直至色素完全解吸。（1）样品溶液加柠檬酸溶液调pH到6，加热至60℃，1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中搅拌片刻，以G3垂熔漏斗抽滤。2.液-液分配法（适用于含赤藓红的样品）HPLC法测定合成着色剂的含量（4）经0.45μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。（3）加氨水溶液提取2到3次，每次5mL，合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素），用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。（2）合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗，加10mL正己烷混匀。（1）样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液（5%）10mL~20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取，直至有机相无色。仪器参考条件色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm。进样量：10μL。柱温：35℃。二列管阵列检测器波长范围：400nm~800nm，或紫外检测器检测波长：254nm。梯度洗脱表见表1。四时间min流速mL/min0.02mol/L乙酸铵溶液%甲醇%01.095531.0653571.00100101.0010010.11.0955211.0955表1梯度洗脱表试样溶液的测定将样品提取液