菌种的保藏和使用-菌种保藏技术（食品微生物检验课件）

食品微生物与检验菌株保藏技术把从自然界分离到的野生型或经人工选育的用于科学研究和工业生产的优良菌种，用各种适宜的方法妥善保存，尽可能保持其原来的性状和活力，使之不死亡、不衰退、不变异，且不被污染，以达到便于随时提供优良菌种给生产和科研进行研究、交换和使用。菌种保藏

一、菌种保藏概念使微生物的代谢作用降至极低限度，使其处于不活泼的休眠状态。ab微生物本身：挑选典型菌种的优良纯种，最好采用它的休眠体（如分生孢子、芽孢等）。环境条件：人为创造一个适合其长期休眠的环境条件，诸如低温、干燥、缺氧、避光、缺乏营养及添加保护剂或酸碱中和剂等。二、菌种保藏原理01020405载体保藏法真空冷冻干燥保藏法液氮超低温保藏法03-80℃低温保藏法长期保藏法-20℃低温保藏法传代培养保藏法液体石蜡保藏法06短期保藏法07三、菌种保藏方法-80℃低温保藏法真空冷冻干燥保藏法传代培养保藏法三、菌种保藏方法将微生物菌种保藏在-80℃冰箱的一种保藏方法。原理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢，以达到长期有效地保藏微生物。原理方法1、将培养好的菌种制成高浓度菌悬液(108～1010CFU/mL)。2、取灭菌甘油与菌悬液充分混匀，使甘油浓度约为20%。3、混匀后分装入冷冻试管或安瓿中，于-60℃～-80℃超低温冰箱中保藏。1.-80℃低温保藏法三、菌种保藏方法自制冻存管：将菌液接入冻存管中，加入甘油做保护剂，做好标识，存放。1.-80℃低温保藏法三、菌种保藏方法MASTCRYOBANK菌种保藏管2.-20℃低温保藏法由冰冻小管组成的多功能保藏系统。小管中包含覆有特殊低温防腐溶液且经化学处理的珠子。三、菌种保藏方法2.-20℃低温保藏法保藏三、菌种保藏方法2.-20℃低温保藏法复苏三、菌种保藏方法又称低压冻干法或冷冻干燥法，该法是在极低温度（-70℃左右）下迅速将菌体细胞冻结且保持完整，然后在减压条件下利用升华现象除去水分，达到使培养物干燥的目的，并在真空条件下熔封管口，故此法简称为冻干法。3.真空冷冻干燥法三、菌种保藏方法3.真空冷冻干燥保藏法保藏三、菌种保藏方法冻干菌种火焰封口三、菌种保藏方法三、菌种保藏方法优点01此法运用了有利于微生物保藏的一切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺乏营养和氧气的条件，微生物的生长和代谢都暂停，是迄今为止最有效的菌种保藏方法。大部分微生物可保藏5-15年之久。缺点02设备和操作都比较复杂。3.真空冷冻干燥法三、菌种保藏方法将菌种的悬液密封于安瓿管内，将微生物菌种保藏在-196℃的液氮中，或保藏在-150℃的气相氮中。方法原理微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止，因而能长期、有效地保藏。为防止影响菌种存活率，菌种悬液中常加入防冻剂，最常用的防冻剂是二甲亚砜和甘油。4.液氮超低温保藏法三、菌种保藏方法LOREM

此法保藏菌种可达20年以上，除适宜于一般微生物，对于一些冻干法都难以保藏的菌种如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。对于在培养基上只产生菌丝体的真菌，必须采用此法保藏。缺点：需要液氮罐或液氮冰箱，所以耗费较多。液氮超低温冰箱4.液氮超低温保藏法三、菌种保藏方法01沙土管保藏法02土壤保藏法03滤纸保藏法04麸皮保藏法5.载体保藏法三、菌种保藏方法将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液，注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在载体上，将管中水分抽干后熔封或石蜡封口，置干燥器中于4℃-10℃进行保存。沙土管保藏法是抗生素生产和研究单位保藏放线菌最常用的方法。（1）沙土管保藏法5.载体保藏法三、菌种保藏方法该法与沙土管保藏法相似，但完全用土壤代替河沙，且对土壤不需要用盐酸处理。此法适用于保藏土壤细菌、放线菌、丝状真菌等，可保存2-6年，转接也较方便，应用范围广。（2）土壤保藏法5.载体保藏法三、菌种保藏方法LOREM

将微生物细胞或孢子吸附在滤纸上，干燥后加以保藏的方法称为滤纸保藏法。此法对细菌、酵母菌、丝状真菌都有一定效果。（3）滤纸保藏法5.载体保藏法三、菌种保藏方法此法是按照我国传统制曲原理制作。称取一定量的麸皮，加水或营养液拌匀，水量达到其湿润蓬松为止，装入小试管内约1cm高，加棉塞后用纸包扎好，高压蒸汽灭菌1h，接入所需保藏的菌种，待生长良好后，将麸皮管置于装有氯化钙的干燥器中，于室温下进行干燥。干燥后将干燥器放于低温处存放。此法适用于青霉、根霉、曲霉、红曲霉等的保藏。（4）麸皮保藏法5.载体保藏法三、菌种保藏方法培养基方法将菌种穿刺到斜面或半固体中，培养好后放在低温干燥处保存，定期移植，一般1～2个月移植一次(视菌种特征而定)。细菌：营养琼脂；真菌：PDA；乳酸菌：MRS培养基；厌氧菌：庖肉培养基；嗜盐性弧菌：含3%NaCl的TSA或营养琼脂6.传代培养保藏法三、菌种保藏方法LOREM霉菌、放线菌及芽孢细菌保存2-4个月传代一次；酵母菌间隔2个月；不产芽孢的细菌可保存1个月左右，最好每月移种一次；假单胞菌两周传代一次。保藏时间依微生物的种类而定：6.传代培养保藏法三、菌种保藏方法随时接种使用，最为简单、经济，使用方便，设备简单；能随时检查所保藏菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。优点缺点容易发生遗传变异；连续传代可使一些菌株的性状丢失或减弱，也易于污染杂菌。6.传代培养保藏法三、菌种保藏方法又称矿油保藏法，是建立在