遗传病诊断张课件

14遗传病诊断6、法律的基础有两个，而且只有两个……公平和实用。——伯克7、有两种和平的暴力，那就是法律和礼节。——歌德8、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亚里士多德9、上帝把法律和公平凑合在一起，可是人类却把它拆开。——查·科尔顿10、一切法律都是无用的，因为好人用不着它们，而坏人又不会因为它们而变得规矩起来。——德谟耶克斯14遗传病诊断14遗传病诊断6、法律的基础有两个，而且只有两个……公平和实用。——伯克7、有两种和平的暴力，那就是法律和礼节。——歌德8、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亚里士多德9、上帝把法律和公平凑合在一起，可是人类却把它拆开。——查·科尔顿10、一切法律都是无用的，因为好人用不着它们，而坏人又不会因为它们而变得规矩起来。——德谟耶克斯临床遗传Clinicalgenetics临床遗传学clinicalgenetics：是医学遗传学的重要组成部分，其内容是运用医学遗传学理论知识，通过家系调查和各项临床检查来诊断、治疗和预防遗传病。14遗传病诊断6、法律的基础有两个，而且只有两个……公平和实1遗传病诊断张课件2遗传病诊断张课件3遗传病诊断张课件4遗传病诊断张课件5一、常规临床诊断（一）、采集病史家史：亲缘关系、婚姻关系、发病情况、绘系谱婚史：婚龄、次数、配偶情况、近婚生育史：育龄、子女数、流、死产史、产伤病毒感染一、常规临床诊断（一）、采集病史6（二）、症状与体征1.智力低下、2.特殊面容、3.特殊气味4.耳聋、5.肝脾肿大、6.皮肤毛发异常7.肢体畸形、8.生殖器变化、9.生长发育迟缓（三）、临床辅助检查（二）、症状与体征7二、系谱分析pedigreeanalysis绘制系谱应注意：1.系统、完整系谱成员应调查三代以上，（包括死者）凡有近亲婚配、死胎、流产和婴儿死亡等，也须询问清楚，记录在系谱中。2.去伪存真注意区别病人和家属所提供信息的真伪。3.注意新的基因突变没有家族史的先证者应考虑是新的基因突变。

例如：假肥大型肌营养不良（DMD）约有1/3的病例为新的基因突变引起的。一般认为是由于患者母亲卵子形成过程中X染色体上DMD基因突变所致。二、系谱分析pedigreeanalysis绘制系谱应注意8对系谱的分析要注意区别：1.孟德尔遗传病2.非孟德尔遗传病3.具有特殊遗传学现象的疾病对系谱的分析要注意区别：91.孟德尔遗传病包括AD遗传病、AR遗传病、XD遗传病、XR遗传病、YL疾病等。系谱分析对这类疾病的分析非常有用，分析时要考虑到某些疾病的遗传异质性、不规则外显、外显不全和延迟显性等情况，可能会造成一些临床假象，由于遗传的异质性可能将不同的遗传病误认为同一种遗传病进行分析。1.孟德尔遗传病102.非孟德尔遗传病①线粒体遗传病：线粒体基因突变所致的遗传病只通过母系遗传，女性患者的子女都可能患病。线粒体遗传病表现为晚发、进行性。②多基因病：其家族性聚集性可能类似于孟德尔遗传，但不严格遵循孟德尔分离规律。2.非孟德尔遗传病113.具有特殊遗传学现象的疾病①基因组印记来自双亲的等位基因和染色体区域的表达不是等同的，这些等位基因在传递上符合孟德尔规律，但在表达方面受传递的双亲性别影响,因而产生母源印记或父源印记时，在系谱分析中要加以注意。②动态突变在孟德尔遗传疾病中，突变后的基因在世代传递中稳定存在，但在三核苷酸重复序列扩展所致的遗传病中，处于突变状态的基因在世代传递中表现为不稳定，其重复单元的数目发生改变。3.具有特殊遗传学现象的疾病12三、细胞遗传学cytogenetics检查（一）、CS检查—核型分析又称核型分析（karyotapeanalysis)，即通过血液或组织培养制备染色体标本，进而显带、显微摄影，分组排列对比分析。是确诊染色体病的主要方法。随着显带技术的应用以及高分辩率染色体显带技术的出现和改进，能更准确地判断和发现更多的染色体数目和结构异常综合征，还可以发现新的微畸变综合征。三、细胞遗传学cytogenetics检查（一）、CS检查13CS检查指征：①智能低下、生长迟缓或伴有其他先天畸形者。②夫妇中有染色体异常，如平衡结构重排、嵌合体等。③家族中已发现染色体异常或先天畸形个体。④多发性流产的妇女及其丈夫。⑤原发闭经和男女不育症者。⑥35岁以上的高龄孕妇。⑦有两性内外生殖器畸形者。⑧身材高大，性情粗暴的男性⑨恶性血液病患者⑩长期接受X线、电离辐射的人员CS检查指征：①智能低下、生长迟缓或伴有其他先天畸形者。14（二）、性染色质检查：性染色体数目异常。不分裂细胞：X染色体数=X染色质数+1Y染色体数=Y染色质数遗传病诊断张课件15（三）、染色体原位杂交insituhybridizationofchromosome用标记的DNA片段与玻片上的细胞、染色体或间期核的DNA或RNA杂交，在不改变原来结构的情况下，研究核酸片段的位置、相互关系。染色体荧光原位杂交

fluorescenceinsituhybridization,FISH（三）、染色体原位杂交insituhybridizati16遗传病诊断张课件17X染色体Y染色体13号染色体18号染色体21号染色体X染色体Y染色体13号染色体18号染色体21号染色体1813号染色体21号染色体13号染色体21号染色体19SpectralKaryotyping(SKY)NormalmaleSpectralKaryotyping(SKY)Norm20TumorcellfromfemaleTumorcellfromfemale2124colorsFISH24colorsFISH22四、生化检查1.Pr和酶的分析确定单基因病2.代谢产物的检测反映酶活性四、生化检查1.Pr和酶的分析确定单基因病23基因诊断特点:①针对直接病因诊断。②特异性强,灵敏度高。③适应性强,诊断范围广,因基因探针可为任何来源、任何种类,其探针序列可为未知或已知,待检测的目的基因可为一个特定基因或基因组合。④目的基因是否处于活化状态均可,无组织和发育特异性,因此可用于检测一些具有组织表达特异性和分化阶段表达特异性的基因。五、基因诊断(genediagnosis）基因诊断特点:五、基因诊断(genediagnosis）24（一）基因诊断的基本技术*分子杂交技术*聚合酶链式反应(PCR)技术*DNA序列测定技术*基因芯片技术（一）基因诊断的基本技术25分子杂交技术molecularhybridization

原理：双链DNA在加热到一定温度以上或在碱性溶液中会变性成为两条单链，互补的两条DNA单链在一定条件下结合成为双链。即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。分子杂交技术26聚合酶链反应及相关技术

（polymerasechainreaction,PCR聚合酶链反应及相关技术

（polymerasechain27例：诊断Barts胎儿水肿综合症。1）建立反应体系2）DNA扩增3）电泳检测待测DNAα基因引物dTNPTaq酶950C→560C→720C

变性退火延伸α基因例：诊断Barts胎儿水肿综合症。待测DNAα基因引物dTN28

DNA测序技术(DNAsequenceing）

Maxan和Gilbert首先建立了化学方法，Sanger建立了DNA测序的酶学方法。最新的DNA自动测序法以不同荧光色素标记的四种不同脱氧核苷酸为原料进行酶促合成反应，经过凝胶电泳分离，应用激光分析及计算机处理就能直接读出碱基顺序。极大地推进了生命科学的发展和人类基因组计划的进程，而且测序的长度可以达到1000bp以上。DNA测序技术(DNAsequenceing）29基因芯片技术

基本原理是核酸杂交，其基本过程是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，形成矩阵点。样品DNA/RNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子，然后按碱基配对原理进行杂交，再通过荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号做出比较和检测，得出所要的信息。基因芯片技术30遗传病诊断张课件31遗传病诊断张课件32（二）基因诊断的途经1.直接诊断——检测突变基因

直接诊断是直接检测致病突变的基因。它通常使用基因本身或紧邻的DNA序列作为探针，或通过PCR扩增产物，以探查基因无突变、缺失等异常及其性质，这称为直接基因诊断，它适用已知基因异常的疾病。（二）基因诊断的途经33当致病基因的某种突变类型与发病有直接的因果关系,或者对致病基因以及分子机制已完全了解,或者对致病基因以及分子机制部分了解但已知其中规律,可应用此途径。当致病基因的某种突变类型与发病有直接的因果关系,342.间接诊断——基因连锁分析当致病基因虽然已知但其异常尚属未知或突变类型较多时；或致病基因本身尚属未知时，但被检测基因有紧密连锁的DNA多态标记，可以通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致病基因的染色体。

2.间接诊断——基因连锁分析35连锁分析多使用基因组中广泛存在的各种DNA多态性位，特别是基因突变部位或紧邻的多态性位点作为标记。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP等技术均可用于连锁分析。连锁分析多使用基因组中广泛存在的各种DNA多态性36（三）基因诊断的方法选择：各种遗传病的基因异常是不同的，同一遗传病也可以有不同的基因异常，但这些异常大体可分为基因缺失和突变两大类型。根据对基因异常类型的了解，可以采用不同的诊断方法。（三）基因诊断的方法选择：各种遗传病的基因异常是不同37

遗传的基因诊断方法基因异常方法探针、引物或限制酶基因缺失基因组DNA印迹杂交\PCR扩增缺失基因的探针引物包括缺失或在缺失部位内点突变RFLP分析\ASO杂交突变导致其切点消失的限制酶PCR产物的多态性分析正常和异常的ASO探针（RFLP、SSCP、DGGE）引物包括突变部位基因已知基因内或旁侧序列多态性基因内或旁但异常不明（RFLP、SSCP、AMP－FLP）侧序列探针或引物连锁分析基因未知与疾病连锁的多态性，与疾病连锁的多态如SSCP、AMP－FLP连锁分析，位点探针或引物RFLP位点单体型连锁分析遗传的基因诊断38（四）基因诊断在遗传病诊断中的应用例：Hbs病β6GAG（谷）→GTG（缬）MstⅡ可识别并切割βA:CCTGAGG序列不能切割βs:CCTGTGG序列此切点消失（四）基因诊断在遗传病诊断中的应用例：Hbs病39IVS-Ⅰ1.15kbMstⅡ切点

1.15kb0.2kbHbA1.35kbA→THbS

1.15kb1.35kb0.2kb正常杂和体HbS病失IVS-Ⅰ1.15kbMstⅡ切点1.15kb0.2kb40第三节产前诊断（prenataldiagnosis)产前诊断又称宫内诊断（intrauterinediagnosis）是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作出准确的诊断。第三节产前诊断（prenataldiagnosis)产411．35岁以上的高龄孕妇或夫妇一方有明显致畸因素接触史；2．夫妇之一有染色体数目或结构异常者；或曾生育过染色体病患儿的孕妇；3．已知或推测孕妇是AR或XR携带者；曾生育过某种单基因遗传病患儿的孕妇；4．曾生育过先天畸形（尤其是神经管畸形）的孕妇；5．有原因不明的自然流产，畸胎，死产及新生儿死亡的孕妇。一、产前诊断的对象1．35岁以上的高龄孕妇或夫妇一方有明显致畸因素接触史；一42㈠仪器诊断包括：①X线检查②超声波检查③胎儿镜检查㈡细胞学方法（染色体检查；染色质检查）

㈢生物化学方法（蛋白质或酶检查；代谢产物检查）

㈣分子生物学方法（基因分析）二、产前诊断的方法㈠仪器诊断二、产前诊断的方法43三、产前诊断的标本及采集技