微生物实验室培养基的管理

微生物实验室培养基的管理、使用及质量控制主要内容培养基的订购和接收培养基的制备培养基的测试培养基的储存1.培养基的订购和接收订购根据实验室培养基清单所列存货量、实验室日常用量、供应商提供的到货期来确定定货日及定货量只能使用实验程序所列的培养基;若实验程序未列出，培养基则用知名公司的产品接收在培养基容器上标记：接收日期、到期日、培养基名称

储藏

大部分培养基、药品及试剂应保存在干燥、阴暗处，温度在15-25℃之间，有些需要储藏在2-8℃的冰箱内，具体操作要按照培养基说明每种培养基储藏柜建立说明并记录以下信息：培养基名称，批号，规格数量，有效期，到货日期，验收日期，存放地点，储存条件根据“先入先出”原则，按到期日早晚排列，保证培养基保持新鲜及更新开封超过一年的培养基视为过期培养基要处理掉培养基入库登记表2.培养基的制备培养基的准备和灭菌及分装应分别在单独的区域进行，按实验规程和说明进行并根据日常用量及保存期确定制备量。每次准备和灭菌都要在配置记录表上记录以下信息：配置日期，名称，厂家，批号，使用量，配置量，配置前后pH,灭菌锅编号，灭菌要求，操作人，备注

培养基配置记录制备前的准备工作

仔细阅读使用方法，包括是否需要烧开、灭菌、及添加剂，根据单位用量计算出需称重量水

要使用纯化水，如经蒸馏、去离子或反渗透得到的水，应符合环境保护局（EPA）中关于饮用水的标准，每周对其定期进行微生物和化学评估用带磁力搅拌的加热板、沸水浴或流动蒸汽来加热以防烧焦或沸出，加热时要保证磁力棒在搅动器皿和容器使用硅酸硼玻璃、不锈钢、铝或别的耐腐蚀材料，其容积至少要比所准备的培养基的体积大10%配制时先用半量的水将之充分振荡混匀,再加入剩余的水并洗掉粘在壁上的残余所有培养基都是热敏感的,不要加热超时培养基不含明胶或琼脂的应用冷水或仅需微热来溶解

培养基含明胶或琼脂的必须加热至完全溶解,用沸水浴或流动蒸汽来加热

灭菌之前要检查是否完全溶解,是否有琼脂颗粒粘壁

灭菌灭菌前贴上灭菌条，标上批号，填写灭菌记录表拧松盖或塞以防溢出高压蒸汽灭菌通常温度为121℃，时间一般为（按装培养基的容器容积）：1-100ml15分钟;100ml-1l25分钟;>1l30分钟;管状设备及过滤漏斗30分钟;干物60分钟具体时间及温度应该查看使用说明及时间/体积表一个灭菌周期完成后，小心打开灭菌锅门使培养基冷却5-10分钟再拿出已灭菌培养基在盖子拧紧后放入恒温水浴锅中（一般为50—55℃）灭菌后培养基pH的调整：使培养基冷却至25℃，取单位体积的培养基，用pH计测试并用1mol/l的HCl或1mol/l的NaOH调至培养基要求的pH范围，再根据添加的酸或碱的量来计算校正全部同种培养基的pH培养基不能重复灭菌灭菌记录培养基使用登记表倒平板和分装应在无菌工作台中进行倒平板时的温度

45-55℃之间,以防在盖上形成蒸汽；琼脂温度不对可导致培养基水过度蒸发而导致培养基收缩和凝结分装用的瓶子或试管的体积应该是所分装培养基的1.5倍以上含热敏感成分添加剂的培养基，其热敏感成分用0.45µ的滤膜来过滤除菌，并在培养基冷却到50℃后才能加入已凝的琼脂培养基不能放在加热板上直接加热，微波炉或水浴可用来再熔化已凝的琼脂培养基，注意加热前要拧松盖子培养基不能重复熔化，这会破坏其成分并增加污染机会已灭菌的、熔化的培养基要放在50℃恒温水浴中冷却并在6小时内分装

平板凝固后倒置平板进行培养和贮存，TBG等分装后要放冰箱

象BS等有沉淀的培养基倒平板时注意振荡使之浊度均一

平板上的气泡可用本生灯焰轻轻加热除去

平板上的水可造成微生物蔓延和菌落液化,可在30-40℃恒温箱中除去

pH6.0以下的酸性培养基配制时要在温和条件下，因为加热可造成琼脂和明胶分解;若已造成分解可按5.0克/升琼脂来补充

平板架每次使用后用纯水冲洗，紫外灯照射杀菌3.培养基的测试无菌实验

无菌实验是为了说明培养基被正确地灭菌，保证在实验中出现的污染不是由不正确的灭菌而来肉汤要37℃培养24小时观察无菌后才能使用

倒平板后要培养24小时观察无菌后才能使用：细菌板放37℃培养箱，真菌板放28℃培养箱

装在试管中的培养基培养24小时后若发现有长菌，则该批培养基要灭菌后扔掉在倒平板的同时倒一定数目的平板作为空白对照，并在该批平板将被使用的温度和时间下培养，直到该批平板用完，记录其阳性率若使用培养基来做倾注平板实验，要同时用所有培养基倒一个空白板作培养阴阳性对照

取样量应为总平板、试管或瓶子数的1-2%，用ATCC菌种接种并应产生预期效果

生长能力测试

每种培养基都要测试其支持、鉴别或抑制适当菌的能力对完全培养基可根据实验室情况选用不同类型的代表种;对选择、鉴别培养基应选择最能显示其特征的微生物

生长能力测试——测试方法

接种能产生10-100个菌落的已知微生物的24小时培养物

接种10-3稀释度的已知微生物的24小时培养物具体的选择应